identifier: Lee-Gosselin, Laura  (2017). Analyses pharmacologiques du pacap, un peptide prometteur pour le traitement de la maladie de Parkinson  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, maîtrise en science, 106 p.

subject:
PACAP
Parkinson
récepteurs
PAC1
VPAC1
VPAC2
RCPG de la classe B
apoptose
mort neuronale
stress oxydatif
PACAP
Parkinson
receptors
PAC1
VPAC1
VPAC2
class B GPCR
apoptosis
neuronal death
oxidative stress.

abstract:
Le pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP), via ses interactions avec trois récepteurs, soit PAC1, VPAC1 et VPAC2, est une molécule pléiotrope possédant notamment des propriétés neuroprotectrices. Ce peptide est ainsi considéré comme prometteur pour le développement d’un traitement des maladies neurodégénératives et notre objectif est donc de concevoir des dérivés du PACAP activant sélectivement PAC1, lequel médie un effet antiapoptotique au niveau des neurones. Des études récentes ont montré l’importance des acides aminés histidine-1 et phénylalanine-6 pour l’affinité et l’activité du peptide. En conséquence, nous avons évalué la relation entre les caractéristiques physicochimiques de ces résidus et les propriétés pharmacologiques du PACAP. Des tests d’affinité ont été effectués sur des cellules CHO exprimant l’un ou l’autre des récepteurs et l’activité biologique a été déterminée par des mesures de mobilisation calcique et d’activation de l’AMPc et de Gαq. Les résultats pour la position 1 suggèrent que la présence d’un hétéroatome capable de faire un pont H, et son orientation spatiale, sont deux éléments cruciaux. Pour la position 6, les résultats montrent que l’hydrophobicité du substituant est déterminante pour la liaison et l’activation de PAC1. Il appert cependant que ce résidu doive respecter certaines limites quant à sa géométrie et sa dimension.

The pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP), via its interactions with three receptors named PAC1, VPAC1 and VPAC2, is a pleiotropic molecule showing, among others, neuroprotective properties. Thus, this peptide is considered as promising for the development of a treatment for neurodegenerative diseases and accordingly, our objective is to design PACAP derivatives able to activate selectively PAC1, which mediates an antiapoptotic effect in neurons. Recent studies have shown the importance of the amino acids histidine-1 and phenylalanine-6 in binding to receptors and biological activities. As a result, we evaluated the relationship between the physico-chemical characteristics of these residues and the pharmacological properties of PACAP. Binding assays were performed on CHO cells expressing one or the other of the three receptors and biological activity was determined by calcium mobilization assays and cAMP and Gαq activation measurements. The results for position 1 suggest that the presence of a heteroatom capable of H-bonding, as well as its spatial orientation, are two crucial elements. In position 6, the results show that hydrophobicity of the substituent is important for binding and activation of PAC1. However, it appears that this residue must respect certain limits in its geometry and size.


identifier: Murphy-Marion, Maxime  (2017). Interaction éosinophiles humains-nanparticules: focus sur la capacité du dioxyde de titane (TI02) pour induire l'adhérence  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, maîtrise en sciences expérimentale de la santé, 138 p.

type:
Thèse
Non évalué par les pairs

abstract:
L’industrialisation des nanoparticules (NPs) soulève d’importantes considérations toxicologiques
puisqu’une grande partie de la population se voit exposée aux NPs. Une des NPs prototypes la
plus abondamment étudiée est le dioxyde de titane (TiO2). Certaines études ont démontré que
des NPs augmentent le recrutement des éosinophiles (Eos) en plus d’exacerber les symptômes
de l’asthme chez la souris. Par contre, peu d’études rapportent les effets directs des NPs sur la
biologie des Eos. Dans ce mémoire, nous voulons déterminer si certaines NPs peuvent altérer
certaines fonctions importantes des Eos humains, comme l’adhésion. Nous avons étudié une
dizaine de NPs différentes, dont près de la moitié provoquent une augmentation de l’adhésion
des Eos sur un tapis cellulaire, les NPs de TiO2 démontrant la plus grande activité. Les niveaux
d’expression des différentes molécules d’adhésion ont été mesurés, et des expériences de type
westerns blots, avec des inhibiteurs pharmacologiques, ont mis en évidence les voies
d’activations importantes. Nos résultats suggèrent que la NP de TiO2 active les voies
signalétiques du p38 et de AkT dans le processus d’adhésion. Enfin, cela permet de mieux
comprendre les effets des NPs sur la physiologie des Eos et de voir que les NPs agissent de
différente façon sur la biologie des Eos.

The industrialisation of nanoparticles (NPs) raises awareness from a toxicological perspective.
In fact, a majority of the population is exposed to NPs, hence the importance of this study. One
of the most abundant NP that has been studied over the years is the titanium dioxide (TiO2).
Studies have shown that NPs increase eosinophils (Eos) recruitment as well as exacerbate
asthmatic symptoms in mice. On the other hand, the effect of TiO2 on human Eos have not
been investigated yet. In this master's dissertation, NPs have shown to alter important functions
among Eos particularly the adhesion. Among ten or so NPs studied, half of them increase the
adhesion phenomena and TiO2 have shown to induce the strongest activity. The level of
expression of adhesion molecules has been measured and the activation pathways have been
elucidated by Western Blotting human Eos treated with pharmacological protein inhibitors. Our
results suggest that TiO2 NP activate signalisation pathway involving p38 and AkT in the
adhesion process. At last, this study provides a better understanding of the interaction between
NPs and human Eos, thus perceiving that NPs act in different ways on the biology of Eos.


identifier: St-Pierre, Joey  (2017). Effet du stress prénatal maternel engendré par une catastrophe naturelles sur l'axe mère-placenta-foetus: impact du moment de l'exposition et du sexe du foetus  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en biologie, 227 p.

subject:
Stress
grossesse
placenta
cortisol
sérotonine
hormones placentaires
glucose
programmation foetale

abstract: Le placenta humain régule le transfert du stress maternel au foetus, notamment via l’activité de l’enzyme 11β-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 2 (11β-HSD2). La 11β-HSD2 convertit le cortisol maternel en cortisone inactive, protégeant ainsi le foetus. Le stress maternel prénatal est associé à une diminution de l’activité de la 11β-HSD2 placentaire et à une augmentation du cortisol foetal ce qui peut altérer le développement du foetus à court et long terme (programmation foetale). De récentes observations permettent aussi d’émettre des hypothèses selon lesquelles le cortisol au niveau placentaire soit impliqué dans d’autres systèmes comme celui du transport du glucose, de la sérotonine placentaire ainsi que les fonctions endocrines placentaires. De plus, ces systèmes pourraient être impliqués dans le mécanisme de programmation foetale observé en cas de stress maternel durant la grossesse. Les hypothèses de recherche sont : (1) Le stress prénatal maternel (PNMS) objectif ou subjectif dû à une catastrophe naturelle durant la grossesse est négativement corrélé à l’expression et à l’activité de la 11β-HSD2 entraînant une augmentation du taux de cortisol placentaire menant à : (i) une diminution de l’expression des hormones placentaires régulées par le cortisol; (ii) une altération de l’expression des transporteurs du glucose (GLUTs) placentaires; et (iii) une altération du système sérotoninergique placentaire. Finalement, les effets du PNMS sont plus marqués dans les placentas de foetus mâle que femelle et dépendent du moment auquel la mère est exposée au stress durant la grossesse (semaine de grossesse) et sont associés avec une altération de la croissance et du développement cérébral du foetus à court et long terme (programmation). Dans ce projet, nous avons démontré que 1) le PNMS peut affecter le système de régulation des glucocorticoïdes placentaires en réduisant l’expression de l’ARNm de NR3C1-β ainsi que de NR3C1-α et de HSD11B1 lorsque la mère est exposée à l’élément stresseur en mi-grossesse ; 2) le PNMS peut influencer l’apport en glucose chez le foetus en modifiant l’expression de différents transporteurs du glucose placentaire; 3) le PNMS est associé à une diminution de l’expression de l’ARNm du récepteur 5-HT2A; et 4) le moment auquel la mère est exposée au stress durant la grossesse module différemment l’expression de l’ARNm des gènes CYP19A1, NR3C1-α, HSD11B1 et MAOA dans le placenta. D’autres recherches sont nécessaires afin d’établir un lien entre la modification des biomarqueurs placentaires observée et les effets de programmation foetale.


identifier: Sylvestre, Alexandre  (2017). Identification in vitro des métabolites de nouveaux stéroïdes : 17α-méthylstenbolone, 17α-méthylméthénolone et androst-2-en-17-one  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, maîtrise en science, 100 p.

abstract:
La caractérisation des métabolites de nouveaux stéroïdes de synthèse dont la distribution est illégale est la clé pour pouvoir en détecter la prise par les athlètes. L'utilisation de techniques in vitro telles que les incubations avec des hépatocytes cryopréservés est connue pour simuler le métabolisme via la biotransformation au niveau du foie procurant des résultats semblables à ceux obtenus in vivo chez l’humain. L'utilisation de technique in vitro a pour avantage d'éviter tout problème éthique lié au recours à des volontaires humains pour mener des études d’excrétion avec ces molécules dont l’innocuité est inconnue. Le but de ce projet était de produire in vitro des métabolites de différents stéroïdes de synthèse dont la biotransformation est méconnue. L'origine des stéroïdes utilisés pour les incubations varie d’une synthèse organique à l’interne, de manufacturiers certifiés en produits analytiques ou bien de compagnies de suppléments pour conditionnement physique. La pureté de chaque stéroïde a été vérifiée sur CG-SM avant leur utilisation pour des incubations in vitro (une séparation par CLHP a pu être nécessaire). La production des métabolites a été faite avec l'utilisation d'hépatocytes humains cryopréservés, de fractions S9 de foies humains ainsi que d'enzymes recombinantes du CYP450. Des structures ont été proposées pour les métabolites obtenus, suite à l’analyse par CG-SM principalement. Plusieurs métabolites ont été obtenus pour chacun des stéroïdes testés; cinq pour la méthylstenbolone, sept pour la méthylméthénolone et deux principaux pour l’androst-2-en-17-one. En plus de ces trois SAA, des tests sur l’Epitren RX 30, un supplément contenant de la trendione et de l’épistane, ont été réalisés pour en savoir plus sur leurs voies métaboliques. Ces résultats ont permis le développement d’une méthode de dépistage qui a été incorporée aux analyses existantes.

Metabolite characterization of new synthetic steroids, whose distribution is illegal, is the key to detect use by athletes. In vitro techniques, such as incubations with cryopreserved hepatocytes, are known to simulate the human metabolism in the liver giving similar results to those obtained in vivo with urine analysis. In vitro techniques are advantageous compared to excretion studies with human volunteers as the safety of the molecules is unknown. The aim of this project was to produce in vitro metabolites of various synthetic steroids whose metabolism was unknown. The origin of these steroids varied from organic synthesis produced in-house, certified analytical product manufacturers and fitness supplement companies. The purity of each steroid was checked on GC-MS prior to in vitro incubation (HPLC purification was sometimes necessary). Production of metabolites was possible from incubations with cryopreserved human hepatocytes, S9 fractions from human liver and recombinant CYP450 enzymes. Structures have been proposed for metabolites primarily following the GC-MS analysis. Several metabolites have been obtained for each of the steroids in question: five for 17-methylstenbolone, seven for 17-methylmethenolone and two principal ones for androst-2-en-17-one. In addition to these three AAS, some tests have been accomplished on Epitren RX 30, a supplement containing trendione and epistane, to get better knowledge of the metabolic pathways involved. These results lead to the development of a screening method that has been incorporated into existing detection methods.


identifier: Nguyen, Thanh-Thuy  (2017). Characterization of Phenotypic Changes Involved in the Uptake of Weakly Soluble Hydrocarbons by Pseudomonas Aeruginosa  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en biologie, 337 p.

abstract: Petroleum products like linear alkanes (e.g. hexadecane, octadecane, etc.) and polycyclic aromatic hydrocarbons (e.g. naphthalene, phenanthrene, etc.) are very important pollutants in the environment because of their abundance, toxicity, weak solubility, and persistence due to their poor bioavailability, the limitation of biodegradation pathways and a high tendency to the sorption to other hydrophobic organic matters. There are different types of treatments applied in the polluted environments, including chemical, physical and biological methods. The chemical and physical treatments can cause a secondary pollution, and are expensive. In contrast, the continuous exposure to the contaminants has led to the evolution of microorganisms that are able to grow on hydrocarbons, degrade and utilize the polluted hydrocarbons as their carbon sources, and this inspired the development of biological treatment methods. Thus, the ability of microbial-degrading hydrocarbons is a potential key element in the clean-up strategy of polluted sites. Many different microorganisms, including algae, fungi and bacteria, have been reported to possess the capability of degrading a wide variety of the polluted persistent organic compounds. Among these bacteria, different members of the Pseudomonas genus, which also possess the capacity to degrade weakly soluble hydrocarbons such as linear alkanes, polycyclic aromatic compounds (PAHs), etc., have already been isolated for studying mechanisms involving the effective biodegradation of polluted hydrocarbons by these microorganisms.Pseudomonas aeruginosa bacteria are found in a wide variety of environments, such as soil, water or in association with plants and animals as well as inside of the human body. These bacteria can also grow on hydrophobic carbon substrates such as long-chain linear alkanes and PAHs. The ability to grow in various unfavorable conditions of these bacteria, such as on the petroleum-related products in the polluted environments, relies on their high adaptabilities. In response to the environmental stimuli, bacteria can use different second messengers to regulate various cellular processes for their survival and adaptive development.At the time this project was started, it was known that the second messenger bis-(3'-5')-cyclic dimeric guanosine monophosphate (cyclic di-GMP or c-di-GMP) plays a key role in the bacterial biofilm development, including the P. aeruginosa species. c-di-GMP was shown to be overproduced in various P. aeruginosa rough small colony variants(SCVs) derived from different clinical isolates. This cell type possesses high abilities to grow and form biofilms in unfavorable conditions. The formation of rough SCVs of P.aeruginosa strain 57RP on dextrose in biofilm or in static liquid cultures was also observed in previous experiments in the laboratory of Prof. Richard Villemur. Strain 57RP and several other P. aeruginosa strains were also able to grow and form biofilm on hexadecane, other n-alkanes and PAHs used as a whole carbon source. We hypothesized that the 57RP rough SCVs, which shared some common phenotypic behaviors with the clinical rough SCVs, also overproduce c-di-GMP. However, to which extent this second messenger would influence the appearance of SCVs and the capacity of degrading linear alkanes and/or PAHs was still unclear. Several studies carried out on the growth of certain oil-degrading bacteria growing on different substrates revealed that hexadecane induced a large change in gene expression of biofilm cells compared to the cells growing on pyruvate {Sabirova, 2006 #10585}{Sabirova, 2011 #10578} or to the planktonic cells growing on acetate {Vaysse, 2009 #10584}. Many up-regulated proteins were found in different cell compartments such as the outer membrane, periplasm, inner membrane and cytoplasm. Question to which extent of different modulation of gene expression would be seen between the 57RP cells growing on hexadecane and the 57RP cells growing on other substrates, such as glucose, requires some proteomic studies to be carried out for a better understanding of the physiological adaptation of 57RP cells to the hydrophobic substrate.The principal aim of this project was to characterize the phenotypic changes of a P.aeruginosa strain 57RP, previously isolated from a hydrocarbon-polluted site in Canada by our laboratory, and capable of using several weakly soluble hydrocarbons, such as hexadecane, as the sole carbon source for its growth. The present study was carried out to further investigate the previously suggested important role of c-di-GMP in the phenotypic switching of the bacterial cell states and characterize initially the components of the cell envelope of 57RP SCV grown on hexadecane.


identifier: Heppel, Joël  (1995). Études des variations génomiques entre différentes souches du virus de la nécrose pancréatique infectieuse (VNPI)  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 183 p.

abstract: Le virus de la nécrose pancréatique infectieuse (VNPI) est un pathogène très commun dans les élevages de poissons. Bien qu'il soit surtout associé aux salmonidés chez lesquels il peut être responsable d'un taux de mortalité très élevé des alevins, le VNPI a aussi été isolé dans plusieurs autres familles de poissons à travers le monde. Ce virus est classé dans la famille Birnaviridae et son génome est constitué de deux segments d'ARN bicaténaire linéaire. Le plus grand des deux, nommé segment A, code pour les protéines structurales du virus et serait responsable de certaines variations phénotypiques observées entre les souches du VNPI. Des études sérologiques ont aussi démontré une grande hétérogénéité antigénique chez cet agent pathogène mais jusqu'à présent aucune étude détaillée ne s'est attardée sur la variabilité génomique. Dans le but d'établir une classification génétique et de localiser les régions du segment A qui pourraient être responsables des variations phénotypiques et antigéniques du VNPI, nous avons comparé 37 souches virales. Pour chacune d'elles, un fragment de 310 pb a été amplifié par PCR, puis digéré de façon séquentielle par cinq enzymes de restriction. Sur la base des profils de restriction obtenus, 17 souches ont été sélectionnées et séquencées au niveau du même fragment. L'analyse comparative des séquences obtenues et de celles publiées préalablement a permis de classer les souches en trois génogroupes majeurs. Cinq souches représentatives des variations observées ont ensuite été séquencées dans la région comprise entre l'extrémité 5' du brin positif du segment A et l'extrémité 3' de la portion du génome qui code pour la protéine majeure de la capside, la VP2 (nucléotides 1 à 1737 d'après la séquence publiée de la souche Jasper). La comparaison des séquences en acides aminés déduites des ADN complémentaires a révélé la présence d'un domaine variable au centre de la protéine qui contient deux petites régions hydrophiles et hypervariables. L'expression chez Escherichia coli de diverses portions de la VP2 d'une souche du VNPI, de même que la sélection et le séquençage de trois mutants du même virus qui échappent à la neutralisation par des anticorps monoclonaux (AMC), ont permis de localiser les principaux épitopes sur la séquence primaire de la protéine. Les deux sections hypervariables semblent impliquées dans la formation d'un déterminant antigénique discontinu reconnu par des AMC neutralisants, alors que les autres anticorps se sont fixés sur des sites adjacents à l'intérieur du domaine variable ou à proximité. Les cinq souches virales sélectionnées précédemment ont ensuite été comparées au niveau de la portion non codante de l'extrémité 5' ainsi qu'au niveau d'un petit cadre ouvert de lecture chevauchant partiellement celui de la VP2 et pouvant coder pour une protéine de 17 kDa nommée VPS. Alors que la partie non codante du génome est apparue très bien conservée entre les souches, les divergences étaient très importantes au niveau du cadre de lecture de la VPS. Par ailleurs, ce dernier était absent dans une des souches virales alors qu'il était tronqué dans deux autres. Néanmoins, à l'aide d'un antisérum monospécifique, il a été possible de détecter la VPS dans les cellules infectées par une souche de VNPI contenant le cadre de lecture en entier. Les différences importantes observées au niveau de la région qui code pour la VPS pourraient être à l'origine de certaines variations phénotypiques entre les souches virales. Quant à la diversité antigénique, elle semble surtout reliée à la région centrale de la VP2 qui est la portion la plus variable de la protéine et la principale cible des anticorps. Ce domaine pourrait être suffisant pour induire une réponse immunitaire protectrice chez les poissons, pourvu que la chaîne polypeptidique se replie correctement.


identifier: Laplante, Serge  (1994). Optimisation de la production de ligninases avec le champignon basidiomycete phanerochaete chrysosporium (ATCC-24725)  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 246 p.

abstract:
 Une grande demande en ligninases est envisagée dans un futur rapproché, non seulement pour délignifier les lignocelluloses utilisées comme matières premières pour la production de bio-combustibles, la pâte de papier, ou pour accroître la digestibilité des moulées animales, mais aussi pour leurs utilisations dans le bioblanchiment des pâtes de papiers, la détoxification des effluents d'usines papetières, et autres polluants récalcitrants environnementaux, et aussi pour la biotransformation de la lignine en produits chimiques à haute valeur. Cependant, le problème actuel est de produire suffisamment de ligninases à un coût abordable pour de telles applications industrielles.

 Une des solutions à ce problème est l'optimisation de la
production de ligninases par la mise au point des conditions de culture avec le champignon basidiomycete Phanerochaete chrysosporium (ATCC-24725), l'un des meilleurs producteurs de ligninases connu à ce jour. La majorité des études antérieures sur la production de ligninases ont été effectuées avec ce microorganisme. Ces études ont permts d'établir les caractéristiques principales des conditions ligninolytiques pour la production de ligninases, en utilisant des milieux liquides synthétiques à base de glucose comme source de carbone et d'énergie. Cependant, les niveaux d'activité rapportés à ce jour sont plutôt faibles.

 Dans ce travail, nous avons étudié la production de ligninases: lignine peroxydase (LiP), peroxydase manganèse-dépendante (MnP), et/ou laccase, en fermentation liquide (en flacons agités), ainsi qu'en fermentation à l'état solide, en utilisant P. chrysosporium (ATCC-24725) sous différentes conditions physiologiques. Nous avons établi les conditions optimales . de production de ligninases selon une évaluation de l'activité maximale de chaque type de ligninase (LiP et MnP), et de leur productivité respective.

 Les meilleures activités ligninases furent obtenues en
fermentation à l'état liquide (flacons agités) avec copeaux de bois comme source principale de carbone et d'énergie. Les conditions optimales de production de ligninases ont été obtenues en milieu liquide limitant en carbone (sans glucose et sans extrait de levure), et ont permis de produire 1,111 U/mL d'activité LiP et 4,75 U/mL d'activité MnP, après 6 et 7 jours de fermentation, respectivement (1 U= 1 J.L mol substrat oxidé/minute). Ce qui correspond à une productivité en ligninases de 0,185 U/mL.Jour et 0,679 U/mL.Jour, respectivement.

 À partir de ces conditions optimales, nous avons augmenté l'échelle de production de ligninases en volume de culture de 3 litres en minifermenteur artisanal de 4 litres, et avons obtenu 0,685 U/mL d'activité LiP et 2,35 U/mL d'activité MnP, après seulement 4 jours de fermentation, correspondant à des productivités respectives de 0,171
U 1 rn L .Jour et 0,588 U/mL.Jour. Ces résultats indiquent que l'augmentation de l'échelle de production de ligninases fut réalisée avec succès, puisque les productivités sont demeurées comparables à celles obtenues en flacons agités. Ceci suggère que la production de ligninase est potentiellement réalisable à grande échelle avec un tel
procédé.

 Les connaissances acquises dans cette étude sont un bon point de départ pour une meilleure compréhension des besoins nutritionnels particuliers de P. chrysosporium (ATCC-24725) pour la production de ligninase en milieu à base de copeaux de bois comme source de carbone et d'énergie. Dans le futur, un tel procédé pourrait être envisageable pour simultanément biodélignifier des matières lignocellulosiques et de produire des ligninases en quantités suffisantes pour diverses applications industrielles.


identifier: Beatti, J. Gregory  (1996). Characterization of a Guinea Pig Model of Toluene Diisocyanate Induced-Occupational Asthma  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science expérimentale de la santé, 150 p.

abstract:
The lungs are the most heavily utilized organs in the body. In a lifetime, the average persan will breath over 300 x 106 L of air, a volume 5000 times greater than the volumetrie intake of food or water (Phalen and Prassard, 1989). In addition to being responsible for the uptake of oxygen to maintain metabolism and the elimination of carbon dioxide produced by cellular metabolic processes, the lungs must defend against countless airborne aggressors including pollutants, allergens, viruses, bacteria and microbes. As a result of the vital role of the lung, pulmonary diseases have an enormous social and economie impact. Ofthese diseases, asthma is certainly the most important. Asthma has been estimated to affect 10-15% of the population of industrialized countries (Sears, 1990) and is known to be the only "preventable" disease for which morbidity and mortality are rising (Page, 1993). A common cause of asthma in industrialized countries is occupational exposure to certain chemicals, ofwhich toluene diisocyanate (TDI) is considered one of the most important. The study ofTDI-induced asthma in guinea pigs represents a very useful model for the investigation of the pathogenesis ofTDI-induced occupational asthma and of asthma in general. The objective of this research was to characterize the effects of TDI vapor exposure in the guinea pig lung, under the conditions established in our laboratory, through the correlation of inflammatory changes in the respiratory tract, branchial hyperreactivity to agonist challenge, and histopathological and morphometric effects in the bronchiolar epithelium. In this research guinea pigs were sacrificed for pharmacological, cytological, morphological and
morphometric evaluations one, seven and 21 days following 5 days of 4 hour per day inhalation exposure to 3 ppm toluene diisocyanate (TDI). Bronchoalveolar lavage (BAL) provided evidence of a marked infiltration of leukocytes into the airways following 5 days of exposure to TDI. When compared with concurrent contrais, a greater than four fold increase in total number of cells recovered in bronchoalveolar lavage fluid (BALF)
was observed one day after the completion of TDI exposure. Seven days post-exposure the total number of cells recruited into BALF bad decreased to approximately twice the concurrent control values while 21 days after exposure completion approximately equivalent numbers of cells were
retrieved in BALF. In addition to marked infiltration of total numbers of leukocytes, BALF results provided evidence of changes in the proportional representation of cell populations recovered from the airways of air and TDI-exposed guinea pigs. Differentiai cell counts were performed to determine the relative numbers of macrophages, eosinophils and neutrophils. When compared with corresponding controls, these counts indicated two, 20 and 50 fold increases in the numbers of macrophages, eosinophils and neutrophils, respectively, one day after exposure completion. Challenge of standardized, isolated bronchial strips with non-specifie agonists (histamine and acetylcholine) provided marked evidence of branchial hyperreactivity. Responses were most pronounced the day after exposure completion. When expressed in terms of the area under the doseresponse curves constructed from the summed right and left bronchial responses, the responses l day after exposure were approximately 3 to 4 times that observed 7 and 21 days post-exposure. Responses observed 7 and 21 days post-exposure were similar and were approximately two to three times the concurrent control values. Qualitative microscopie evaluation of all sections obtained from guinea pigs sacrificed 1, 7 and
21 days after exposure completion were performed. When compared with air controls, histopathological changes observed 1 day following exposure completion clearly indicated epithelial damage characterized by epithelial sloughing, replacement of the normal pseudostratified, ciliated columnar epithelium by stratified cuboidal epitheliod cells lacking cilia, clear submucosal
inflammation and edema. Seven days after exposure completion, the beginnings of repair were evident and were most obvious by the Jack of epithelial sloughing. While submucosal inflammation was still observed, it was present to a lesser extent than was observed the day following exposure completion. Similarly, the epithelium bad not yet returned to the normal pseudostratified, ciliated
columnar appearance. Slides prepared from animais sacrificed 21 days after exposure completion indicated obvious epithelial regeneration and a relatively normal histopathological appearance. Histomorphometric evaluations of one representative control and one TDI-exposed guinea pig sacrificed 1, 7 and 21 days after exposure completion were used to provide a semi-quantitative evaluation of the ratio of the volume of infiltrating ce lis to the submucosal surface area. The data indicated that 1 day after exposure completion the volume of the submucosa represented by infiltrating cells was approximately 3 times that the control value, while 7 and 21 days later this had decreased to approximately twice and approximately 1.5 times the control value, respectively. The characterization of the response of the guinea pig Jung to TDI vapors described in this research provides an excellent correlation between inflammatory changes in the respiratory tract, branchial hyperreactivity to agonist challenge, and histopathological and morphometric changes in
the bronchiolar epithelium. This research provides a solid foundation on which to continue investigations into the causes ofTDI-induced asthma. This mode! may be used in the future to study the mechanisms of TDI-induced asthma through pharmacological intervention with the goal of abrogating or inhibiting one or more responses observed in these studies.


identifier: Brault, Dennis  (1994). Formation d'un film biodégradable de caséinate de calcium ou de sodium par irradiation gamma.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée.

abstract:
 L'emballage et même le suremballage des produits de
consommation est une pratique courante dans les pays industrialisés. Comme ces emballages sont formés essentiellement de polymères non-biodégradables, ils causent actuellement des problèmes environnementaux. Ces problèmes environnementaux sont retrouvés non seulement dans les pays industrialisés mais aussi dans les pays en voie de développement. Cette situation a favorisé le développement de différents films, plus écologiques, à partir d'éléments biodégradables à base de polysaccharides, de protéines et/ou de lipides.

 Dans cette étude, nous proposons d'examiner la possibilité de mettre au point un film protéique biodégradable formé à partir d'un sel de la caséine. D'origine laitière, la caséine est abondante et pourrait même être récupérée des laits invendus. Le processus de polymérisation est induit par irradiation gamma. En effet, l'interaction de radicaux hydroxyl avec les tyrosines présentes dans la protéine crée une liaison covalente (bityrosine). L'ajout d'agent plastifiant (glycérol) est indispensable afin de produire un film plus souple et moins friable. La présence de glycérol n'inhibe pas la formation de bityrosine. Elle protège la protéine de la dénaturation causée par l'irradiation, augmente le pouvoir déformant et diminue la résistance à la rupture du film.

 Les essais de biodégradabilité, conduits dans nos laboratoires, ont démontré que le film produit par irradiation gamma est accessible aux attaques enzymatiques de Pseudomonas fragi.


identifier: Ostiguy, Stéphane  (1995). Clonage et Séquençage du gène secY de Streptomyces lividans 1326  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 141 p.

abstract: Afin de mieux comprendre et pour éventuellement améliorer le système de sécrétion de la bactérie Gram-positive Streptomyces lividans 66, le gène secY, codant pour la protéine SecY impliquée directement dans la sécrétion des protéines, a été cloné. Pour ce faire, une partie du gène a d'abord été amplifiée par la méthode du PCR. Le produit de PCR obtenu (600 pb) a ensuite été utilisé comme sonde pour cloner le gène complet. Une partie d'un fragment Bglii de 3.8 kb contenant le gène secY a été séquencé. La séquence en ADN a démontré que le gène secY s'étend sur 1311 paires de base et qu'il est encadré par le gène L15 en amont et le gène adk en aval. Le gène ne possède pas de promoteur et semble faire partie d'un opéron avec les gènes adjacents. La protéine SecY présente 10 segments transmembranaires potentiels et sa séquence déduite en acides aminés démontre une bonne homologie avec les SecY de, entre autres, Brevibacterium flavum, Escherichia coli et Bacillus subtilis. Le gène secY de s. lividans (secY5L) a été surexprimé chez E. coli R0112 afin de vérifier s'il pouvait complémenter la mutation secY24 de cette souche. La mutation secY24 abolit la sécrétion des protéines et la croissance de la bactérie à 42°C. La surexpression de secY5L n'a pas permis de rétablir la croissance de la souche R0112 à 42°C et a également nui à la croissance de la souche témoin DHllS (secY+) à 30°C et 42°C. Ces résultats ne permettent donc pas de déterminer s'il y a complémentation ou non.


identifier: Penzes, Catherine  (1995). Purification et étude de la protéine MsiK de Streptomyces lividans  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 156 p.

abstract:
Le transport du xylobiose et du cellobiose chez le mutant pléiotropique, S. lividans 10-164 est défectueux. Ceci est la conséquence de la mutation au niveau du gène ms1K. Afin de
faciliter la caractérisation de la protéine MsiK, codée par ce gène tns1K, un système d'expression et de purification a été mis au point chez Escherichia coli. L'objet de cette étude est donc la protéine MsiK de S. /ividans. La purification des protéines mutantes et fonctionnelles a été facilitée en amplifiant respectivement, le gène mSlK de la souche 10-164 et du plasmide piAF48, par amplification élective in vitro (PCR) dans le but d'insérer une queue de six résidus histidine à l'extrémité 5' des gènes. Les amplicons ont été clonés dans les vecteurs d'expression pT7-5 et pU702 afin de permettre une sur-expression des gènes codant les protéines chez les souches E. coli BL2l(DE3) et S. lividans 10-164, respectivement. Les protéines exprimées chez E. coli ont ensuite été purifiées par chromatographie d'affinité sur une colonne de résine Ni-NT A. L'expression de la protéine recombinante chez S. lividans 10-164 nous a permis de vérifier sur milieu RBB-xylane, l'effet de la queue de polyhistidine sur la protéine recombinante MsiK quant à son activité. Des zones d'éclaircissements (hydrolyse du xylane par les xylanases
sécrétées dans le milieu) semblables à celle produite par la souche sauvage sont présentes autour des clones positifs. Ceci démontre donc que la queue de polyhistidine n'affecte pas l'activité de la protéine in vivo. Par la suite, des anticorps polyclonaux anti-MsiK ont été produits et des expériences de liaison d'ATP ont été réalisées. Les résultats de l'immuno détection et de liaison d'A TP faits sur des échantillons protéiques purifiés d'E. coli BL21/piAF250 et sur des extraits cellulaires de S. lividans ont révélés une protéine de 41 kDa qui confinne la masse prédite par la séquence nucléotidique. Les expériences de liaison d'ATP sont en accord avec la théorie selon laquelle la protéine mutée ne lie pas l'ATP, contrairement à la protéine fonctionnelle. De plus, le fait que la protéine MsiK recombinante soit capable de lier l' ATP in vitro démontre également que la queue de polyhistidine n'interfère pas avec l'activité de la protéine. Par ailleurs, il a aussi été démontré que la protéine MsiK recombinante tronquée, produite chezE. coli BL21/piAF249 est capable de lier l' ATP. Finalement, une réaction croisée est obtenue avec les anticorps anti-MsiK et une protéine d'environ 30 kDa chez S. lividans. La capacité de liaison d' ATP par cette protéine inconnue a aussi été vérifiée et le résultat obtenu démontre que celle-ci est capable de lier l' ATP. Ceci suggère la présence d'un second système de transport énergie-dépendant chez S. lividans.


identifier: Milot, Martin  (1995). Galanines plasmatique et pancréatique à l'exercice  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science expérimentale de la santé, 110 p.

abstract:
Il est démontré que l'exercice physique d'une intensité suffisamment élevée provoque une diminution de la concentration d'insuline circulante. La diminution de la sécrétion d'insuline semble être principalement provoquée par la libération locale de noradrénaline par les terminaisons nerveuses sympathiques situées dans les îlots de Langerhans. La galanine, neuropeptide relâché dans le pancréas, pourrait aussi potentiellement jouer un rôle dans l'inhibition de la sécrétion de l'insuline à l'exercice. Au repos, l'infusion intraveineuse de galanine atténue la sécrétion d'insuline provoquée par une infusion de glucose chez le chien éveillé. De même, la stimulation électrique du nerf pancréatique chez le chien anesthésié produit une augmentation de la concentration plasmatique de galanine et de noradrénaline parallèlement à une inhibition partielle de la sécrétion d'insuline. Ces résultats rapportés dans la littérature suggèrent une implication possible de la galanine dans Je contrôle de l'insulinémie à 1 'exercice. Le but de cette étude est donc de déterminer si une augmentation de la concentration de galanine en circulation pourrait survenir suite à l'activation du système nerveux sympathique provoquée par l'activité physique. Deux études ont été réalisées chez l'humain pour évaluer la concentration plasmatique de galanine à l'exercice. Nous avons étudié le problème à l'exercice sous-maximal (60 minutes à 58% du vol max) de même que lors d'un exercice progressif maximal menant au V01 max, efforts suffisants pour provoquer une activation du système nerveux sympathique. Les concentrations plasmatiques d'adrénaline et de noradrénaline ont augmenté (p<0,05) pour les deux protocoles sans toutefois que la concentration plasmatique de galanine ne varie de façon significative. Suite à ces observations, nous avons émis l'hypothèse que le foie pouvait extraire de la circulation, la galanine sécrétée avant qu'elle n'atteigne la périphérie. Pour le vérifier, il nous fallait donc effectuer des prélèvements plus près du site de libération soit, le pancréas. Une troisième étude fut donc réalisée en utilisant le rat, permettant les prélèvements du tissu pancréatique, du sang veineux portal (VP) et du sang de la veine cave (VC). Le protocole d'exercice utilisé consistait en une épreuve de nage de 30 minutes avec surcharge de 5 % du poids corporel. Les animaux étaient aléatoirement séparés en 2 groupes selon l'injection pré-exercice. Le premier groupe recevait une injection intraveineuse (i.v.) de soluté physiologique. L'autre recevait une injection i.v. d'une solution de D-glucose(0,7g/kg) de façon à provoquer une hyperglycémie et à stimuler l'ensemble du système de régulation de la glycémie. Pour le groupe ayant reçu le glucose, une partie des animaux étaient à jeun 12 à 15 heures avant l'expérimentation alors que l'autre partie des animaux étaient nourris sans restriction. Tous les groupes étaient ens1.:1ite séparés en sous-groupes soit, exercice et repos. Des résultats significatifs ont été obtenus pour les rats en condition d'hyperglycémie et qui avaient été nourris. Après 30 minutes d'exercice, ces rats montraient une concentration . plasmatique en noradrénaline significativement plus élevée (p<O,O5) et une concentration plasmatique en galanine presque 2 fois plus élevée (p<0,05) que les rats étudiés au repos. De plus, le contenu pancréatique en galanine était aussi significativement plus élevé (p<O,O5) pour ces rats après l'exercice. Nous observons donc. chez l'humain. une absence de variation de la galanine plasmatique à l'exercice pour des prélèvements effectués en périphérie et ce.,en dépit d'une activation. significative du système nerveux sympathique.
Par contre, les résultats chez le rat en condition hyperglycémique suggèrent une libération de galanine dans le plasma suite à un exercice de 30 minutes, suffisamment intense pour activer le système nerveux sympathique. Cette augmentation est parallèle à celle de la concentration plasmatique de noradrénaline et de glucose et à la diminution de la concentration plasmatique d'insuline. De plus, le contenu pancréatique en galanine est augmenté suite à l'exercice, suggérant une néosynthèse de galanine associée à l'exercice. Ces résultats ouvrent la porte à des études sur les états hyperglycémiques, notamment chez les diabétiques de type II, pathologie fortement liée à l'obésité. Des études additionnelles sur la galanine pourraient venir ajouter des éléments physiologiques à la compréhension de la pathologie et pourraient fournir des arguments à la prescription de l'activité physique comme faisant partie de la thérapeutique à utiliser.


identifier: Domingue, Ketsia  (1995). Biodégradation aérobie des solvants chlorés aliphatiques  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 156 p.

abstract:
Les composés chlorés aliphatiques sont des polluants
majeurs retrouvés dans certaines zones industrielles. Les
microorganismes et en particulier les bactéries ont démontré
leur capacité à biodégrader plusieurs de ces produits. Une
étude a donc été entreprise sur la biodégradation de six
solvants chlorés aliphatiques en condition aérobie. Dans un premier temps, l'étude a porté sur la croissance
d'isolats bactériens en présence des solvants. cette expérience visait la mise en évidence de l'utilisation des solvants par les bactéries comme source de carbone et d'énergie. Certains de ces isolats ont montré un potentiel de biodégradation en croissant mieux en présence des solvants qu'en leur absence. Leur croissance a été déterminée en mesurant leur densité optique à l'aide d'un spectrophotomètre. Des enrichissements de cultures à partir d'échantillons de sol ont été entrepris pour augmenter le nombre d'isolats
disponibles pour effectuer cette étude. Ces enrichissements ont été fructueux et ont permis d'obtenir plusieurs autres isolats. Ils ont été retenus dans un premier temps à cause des différences phénotypiques présentées par les colonies qu'ils formaient. ces différences étaient par rapport à des colonies provenant de cultures contrôles non enrichies de solvants chlorés. La deuxième étape qui a mené à leur sélection rejoint la procédure employée pour les premiers isolats. Lorsque cultivés en milieu liquide, ces isolats montraient en effet une meilleure croissance que les cultures contrôles dépourvues de solvants. D'autres enrichissements de cultures ont été effectuées
pour l'obtention de consortiums capables de biodégrader les
solvants chlorés. Des échantillons de sols contaminés au
pentachlorophénol ont été utilisés. D'autres échantillons
provenant des alentours de la compagnie Si co, une usine de
fabrication de peinture, ont aussi été testés. Ces
enrichissements ont d'abord été effectués avec les solvants
chlorés comme unique source de carbone et d'énergie. Une
deuxième série d'expériences a été menée avec le phénol et le toluène comme co-substrats. Les isolats ainsi que les consortiums ont été testés pour leur capacité à biodégrader les solvants chlorés. Leur activité de biodégradation a été suivie par chromatographie en phase gazeuse avec un détecteur à ionisation de flamme et un autre à capture d'électron. Malgré la croissance observée en présence de plusieurs solvants, aucune biodégradation n'a pu être confirmée. Par contre, des analyses portant sur le toluène ont permis de constater sa biodégradation par plusieurs consortiums enrichis avec différents solvants chlorés. Par ailleurs, une expérience utilisant deux témoins
positifs a été faite. Ces témoins sont deux souches
bactériennes de référence dont le pouvoir à biodégrader le
dichloroéthane a été prouvé. Cette expérience exécutée dans des conditions identiques à celles utilisées pour les autres
expériences de l'étude a confirmé la biodégradation du
dichloroéthane par les deux bactéries. Elle a ainsi permis de valider la méthodologie exploitée au cours de cette étude.


identifier: Gagnon, Marie-Guylaine  (1995). Exploration des mécanismes fibrinolytiques lors d'utilisations illicites d'érythropoiétine  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science expérimentale de la santé, 98 p.

abstract:
Le dopage à l'érythropoïétine (EPO), une hormone endogène stimulant la synthèse des érythrocytes, est de plus en plus utilisé par les athlètes d'endurance pour augmenter leur performance physique. Les érythrocytes étant les transporteurs d'oxygène de l'organisme, ce type de dopage conduit à
une augmentation de la disponibilité de l'oxygène et, par conséquent, à une amélioration du VD2 max et de la performance physique. Le Comité International Olympique interdit le dopage à
l'érythropoïétine même s'il n'existe actuellement aucune méthode de dépistage. L'EPO possède effectivement un temps de demi-vie de quelques heures (environ 5 heures), des manifestations tardives (3 à 4 jours) et une homologie quasi parfaite avec sa contre-partie endogène, empêchant le dépistage de ce type de dopage par les techniques actuelles. Les travaux se sont donc orientés vers la recherche de marqueurs secondaires du dopage à l'EPO. Le traitement à l'EPO entraînant chez certains sujets une augmentation des risques de thrombose due à l'activation des systèmes de la coagulation et de la fibrinolyse, notre équipe a étudié les principales molécules de ces deux systèmes en présence d'EPO exogène. Ces études ont permis de mettre en évidence une augmentation des TDP (produits de dégradation du fibrinogène et de la fibrine) urinaires chez des sujets traités à l'EPO. Dans ce mémoire, nous avons vérifié les diverses hypothèses pouvant expliquer l'origine des TDP urinaires retrouvés en présence d'EPO exogène. Ceux-ci peuvent provenir soit d'une filtration rénale suite à une augmentation de leur concentration plasmatique, d'une augmentation de la perméabilité glomérulaire ou encore d'une augmentation de la fraction filtrée due à certains changements rhéologiques en présence d'EPO exogène. Les TOP urinaires peuvent également provenir d'une production intra-rénale de TDP suite à une modification dans la synthèse des enzymes fibrinolytiques. Ces travaux ont permis de déterminer que les TDP plasmatiques ne sont filtrés dans l'urine qu'en quantité infime et ce, quelles que soient les conditions (concentration élevée de TDP plasmatique, augmentation de la
perméabilité glomérulaire et de la fraction filtrée). Les TDP proviendraient non pas d'une filtration rénale des TDP plasmatiques mais plutôt d'une production intra-rénale de TDP suite à une modification dans la synthèse intra-rénale des enzymes fibrinolytiques. Ces travaux ont effectivement
permis de mettre en évidence que l'augmentation des TOP urinaires observée en présence d'EPO exogène s'accompagne d'une augmentation de l'u-PA (urokinase) urinaire, une enzyme fibrinolytique synthétisée par les cellules
rénales.


identifier: Forget, Marie-Annick  (1995). Étude de la portion c-terminale d'analogues à structure réduite de l'endothéline-1  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science expérimentale de la santé, 98 p.

abstract:
L'endothéline-1 (ET-1), un peptide de 21 acides aminés comportant 2 ponts disulfures, est le plus puissant vasoconstricteur connu chez l'humain. ET-1 présente également une gamme étendue d'actions physiologiques (contrôle du tonus vasculaire, production d'hormones, etc.). Ce peptide est aussi impliqué dans diverses pathologies humaines comme l'infarctus, l'asthme, l'insuffisance rénale aiguë ou chronique, etc. D'après les résultats des études pharmacologiques, l'organisme contiendrait divers sous-types de récepteurs Jour les peptides de la famille de l'ET : ET A, ET B1, ET B2 et ETc. La définition du rôle de chaque acide aminé et de sa contribution à la stabilité de l'ensemble de la structure ainsi qu'à l'activité biologique se situe au centre des études de structure-activité. L'identification de ces contributions facilitera la compréhension de l'interaction des ETs avec leurs récepteurs et conduira à la conception d'analogues sélectifs dans leur mode d'action biologique. Afin de préciser le mode d'action des Ers au niveau moléculaire, une série d'analogues ont été obtenus par synthèse en phase solide. Les dérivés peptidiques comprennent la portion 3-11 de ET-1 liée via l'acide aminocaproïque (Aca), un espaceur aliphatique flexible, à des segments Cterminaux de longueur variable (16-21, 17-21, ... , 21). Les peptides ont été étudiés sous forme linéaire ou cyclique, en présence ou en absence d'un groupement formyle sur le Trp21. En effet, nous nous intéressons aux récepteurs ET 8 et l'ajout de ce groupement chimique permettrait de discriminer entre les récepteurs ET 81 et ET 82. Le rôle des ponts disulfures dans la liaison et l'activation des récepteurs a été étudié de même que l'importance des acides aminés hydrophobes Val12, Tyr 13 et Phe 14. Le parenchyme de poumons de cobayes, un tissu produisant une réponse ET 8 a permis la réalisation d'études pharmacologiques. Nous avons observé que, parmi les analogues linéaires formylés, [Cys(Acm)3,11 Trp(For)21]-(3-11)-Aca-(17-21)ET est un agoniste partiel. L'ajout de His16, comme dans (Cys(Acm)3, 11, Trp(For)21]·(3·11)·Aca·(16·21)ET, cause une diminution de l'activité contractile
suggérant que le groupement imidazole défavorise l'interaction des analogues linéaires avec le récepteur. L'activité biologique des dérivés linéaires déformylés suggère fortement que le groupement formyle joue un rôle stabilisateur dans la structure de ces molécules. Cet effet n'est pas observé au niveau des dérivés cycliques. La réalisation d'études de modélisation moléculaire a permis de relier la structure des analogues avec l'activité contractile enregistrée. Elles suggèrent que les dérivés cycliques et linéaires adoptent des conformations différentes. Enfin, les résultats montrent que les résidus C-terminaux 18-21 sont nécessaires à l'obtention d'une activité biologique significative sur le parenchyme de cobaye et que l' Aca joue un rôle important. Finalement, nous sommes arrivés à la conclusion que ET -1 se lierait à ses récepteurs par des interactions hydrophobes. En effet, nos résultats montrent que la structure tridimensionnelle des pharmacophores s'avère plus importante que les charges présentes sur les acides aminés.


identifier: Bah, Aliou  (1994). Analyse des régions promotrices des gènes xlnA, xlnB et xlnC de Streptomyces lividans, en utilisant le gène xylE de O. putide comme gène rapporteur.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 170 p.

abstract:
 S. lividans 1326 produit trois xylanases: A, B et C. L'activité promotrice des gènes xlnA, xlnB, xlnC, a été testée en fusionnant les fragments de ces gènes avec le gène xylE dans les vecteurs de fusion, piJ4083, un plasmide à nombre de copie multiple et pXE4, un plasmide à
nombre de copie unique. Le gène xylE de Pseudomonas putida est un gène rapporteur qui code pour une enzyme, la catéchol dioxygénase (C230), qui convertit le catéchol incolore en un composé, le 2-hydroxymuconique semialdéhyde, de couleur jaune intense. Les colonies qui contiennent les
promoteurs localisés dans les constructions plasmidiques et pouvant faire exprimer le gène xylE, deviennent jaunes, lorsque vaporisées avec une solution aqueuse de catéchol. Celles, sans activité promotrice restent blanches. L'activité des promoteurs a été d'abord testée par visualisation sur Pétris, en milieu minimal supplémenté avec 1% de glucose, 1% de xylane ou 1% de xylose, puis en milieu liquide SLAB contenant 1% de glucose, 1% de xylane ou 1% de xylose. Parmi les promoteurs des gènes xlnA, xlnB et xlnC testés, certains avaient une activité en milieu contenant du xylane ou du xylose. En présence du glucose, seuls les promoteurs des fragments xlnA/Sphl-Bglll et xlnC!Pstl-Sphl n'étaient pas réprimés. D'autre part, la distance entre les promoteurs testés et le gène xylE était inversement proportionnelle à la production de C230.


identifier: Paré, Catherine  (1995). Étude de la distribution et des propriétés fonctionnelles d'un antigène spécifique des cellules NK murines à l'aide de nouveaux anticorps monoclonaux xénogénique  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 162 p.

abstract:
Les cellules natural killer (NK) sont des cellules lymphoïdes capables d'exercer une activité cytotoxique naturelle envers certaines cellules tumorales ou envers des cellules infectées par des pathogènes particuliers. Parmi les "récepteurs activateurs" d'intérêt des cellules NK se retrouve l'antigène NK2.1, qui est exprimé spécifiquement par les cellules NK de plusieurs souches de souris. Avant le début des travaux présentés dans ce mémoire, l'AcM 4L03311 produit dans notre laboratoire était le seul AcM connu reconnaissant cet antigène. Puisque cet AcM avait été produit en réponse à une alloimmunisation, sa réactivité n'était potentiellement limitée qu'à certaines souches de souris. Dans le but de mieux caractériser la distribution et les propriétés fonctionnelles de l'antigène NK2, deux hétérohybridomes hamster-souris sécrétant des AcM xénogéniques anti-NK2 ont été produits, soit les AcM A5 et F4. Ces AcM ont permis de confirmer l'hétérogénéité d'expression de l'antigène NK2, auparavant détectée par l'AcM 4L03311 parmi différentes souches de souris. De façon importante, ils ont aussi été utiles dans la recherche de la présence d'une forme homologue de l'antigène NK2 chez une souche de souris dont les cellules NK ne réagissent pas avec l'AcM 4L03311, soit la souris NZB. Chez cette souche de souris, l'AcM F4 a réagi avec une souspopulation de cellules NK dans l'analyse par cytométrie en flux et a immunoprécipité un hétérodimère à partir d'un lysat de cellules spléniques enrichies en cellules NK. La présence d'une forme homologue de l'antigène NK2 a aussi été recherchée chez le rat, mais aucune réactivité des AcM A5
et F4 avec les cellules NK de rat n'a été révélée. Des expériences de compétition entre les trois AcM anti-NK2 chez la souris BALB/c ont permis de déterminer que les épitopes reconnus par les AcM A5 et F4 sont à la fois distincts entre eux et distincts de l'épitope reconnu par l'AcM 4L03311. Toujours chez la souris BALB/c, l'épitope reconnu par l'AcM A5 possède le même potentiel activateur de la lyse que l'épitope reconnu par l'AcM 4L03311, mais l'épitope reconnu par l'AcM F4 ne semble avoir aucun effet activateur ou inhibiteur. D'autre part, des travaux effectués avec l'AcM 4L03311 nous avaient permis de formuler l'hypothèse que l'expression de l'antigène NK2 est influencée par les molécules de classe 1 de l'hôte. Des études analogues ont été entreprises avec les AcM A5 et F4 et seuls les résultats obtenus avec l'AcM F4 semblent confirmer cette hypothèse. L'ensemble des résultats obtenus avec les nouveaux AcM anti-NK2 et avec l'AcM 4L03311 seraient en accord avec l'existence d'une famille de molécules NK2 apparentées et nous autorisent à suggérer un modèle d'organisation de ces molécules. L'appartenance de ces molécules à des
familles de récepteurs NK déjà connues est discutée. La production des deux nouveaux AcM anti-NK2 A5 et F4 ouvre la porte à de nouvelles études sur les molécules NK2.


identifier: Bouchard, Bertrand  (1995). Isolement et caractérisation d'un microorganisme anaérobie effectuant la déchloration dupentachlorophénol  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 115 p.

abstract:
Le pentachlorophénol (PCP) est un biocide utilisé principalement pour la préservation du bois destiné à l'utilisation extérieure. Son emploi par les industries reliées au traitement du bois et aux sites d'entreposage a conduit à d'importants problèmes environnementaux. Un consortium anaérobie pouvant effectuer la dégradation du PCP par fermentation méthanogénique est à l'étude dans les laboratoires du Dr R. Beaudet. Ce consortium est maintenu dans des bioréacteurs à alimentation continue. Une méthodologie a été développée afin de maintenir l'activité du consortium dans des bouteilles sérologiques. Après un traitement à la chaleur, enrichissement par repiquages successifs, dilutions et étalements sur milieux solides, une souche microbienne anaérobie pouvant effectuer la déshalogénation du PCP jusqu'au 3-MCP a été isolée. Cette souche a été nommée PCP-1. Cette bactérie sporulante, non-mobile et assacharolytique est un bacille colorant Gram négatif mais apparaissant au type Gram positif en microscopie
électronique. Elle a été cultivée dans un milieu contenant du pyruvate de sodium, de l'extrait de levure, des minéraux et des vitamines. La voie de déchloration du PCP est la suivante: PCP --> 2,3,4,5-TeCP --> 3,4,5-TCP --> 3,5-DCP --> 3-MCP. La dose maximale déchlorée jusqu'au 3-MCP est de 10 mg/1 PCP, tandis qu'à 15 mg/1, la transformation s'est arrêtée au 3,4,5-TCP. L'ajout d'un support, le DEAE Séphacel, est essentiel au maintien de l'activité de déshalogénation dans des bouteilles sérologiques. Le spectre d'activité de la souche PCP-1 envers 17 chlorophénols a été étudié. Les chlores situés en position ortho sont généralement éliminés. Le chlore situé en position para du 3,4,5-TCP a été retiré et un des deux chlores positionnés en méta du 3,5-DCP et 2,3,5-TCP ont également été enlevés. Les résultats obtenus suggèrent qu'il y aurait deux systèmes enzymatiques inductifs impliqués dans la déshalogénation du PCP et des chlorophénols. Un premier système s'attaquerait aux chlores situés en position ortho tandis que le second éliminerait les chlores en position para et méta. La souche PCP-1 n'a pas d'activité de déshalogénation sur les monochlorophénols et elle ne métabolise pas le phénol. L'analyse du gène codant pour la sous-unité 16S de l'ARN ribosomal, effectuée dans le laboratoire du Dr Richard Villemur, a montré que ce microorganisme serait une nouvelle espèce bactérienne appartenant au genre Desulfitobacterium.


identifier: Lessard, Stéphan  (1995). Micronutriments alimentaires et leurs rôles dans le contrôle naturel de la cancérisation cellulaire.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 197 p.

abstract:
Plusieurs micronutriments provenant des aliments ou des
plantes semblent jouer un rôle prépondérant dans la prévention et même dans le traitement du cancer. Certains exerceraient leur effet par leurs pouvoirs antioxydants, d'autres par leurs capacités de moduler les réponses immunitaires ou les enzymes importantes de l'homéostasie cellulaire. on prétend que d'autres stabiliseraient l'ADN muté des cellules cancéreuses ou en voie de cancérisation, ou pourraient inhiber les collagénases qui permettent les métastases, etc. Les phénols, les vitamines et leurs précurseurs, les minéraux, les acides gras insaturés et les acides nucléiques sont des micronutriments alimentaires et autant de familles de composés chimiques naturels présentement à l'étude afin de mieux connaître leurs propriétés anticancéreuses. Notre travail avait comme objectifs le développement de
techniques simples et leurs applications dans l'étude de
certaines propriétés désirables des micronutriments
alimentaires dans la prévention de la cancérisation. Nous avons développé et mis au point une microtechnique
pour étudier et mesurer quantitativement le pouvoir antioxydant d'une variété de produits chimiques, micronutriments, drogues ou plantes par l'intermédiaire de la peroxydation de membranes artificielles. Nous avons également mis au point et utilisé le test de mutagénécité bactérien Umu pour étudier les propriétés mutagéniques de ces différents produits en soi ainsi que les propriétés mutagéniques de leurs métabolites hépatiques une fois transformés par le cytochrome P-450. Nous avons mis au
point une variation technologique du test Umu qui permet
d'étudier les propriétés antimutagéniques d'un produit en soi aussi bien que de ses métabolites hépatiques. En tout, nous avons étudié 56 produits différents à l'aide de ces technologies pour mieux connaître leurs propriétés biologiques. Des produits sélectionnés, 22 étaient d'origine commerciale, 12 sont vendus pour leurs propriétés thérapeutiques diverses par les magasins d'aliments naturels et 22 autres étaient des épices chez lesquelles nous avons extrait leurs composés par infusion dans 1 'eau bouillante ou dans l'éthanol. Nos résultats montrent que sur les 56 produits
sélectionnés et étudiés pour leurs propriétés antioxydantes, 14(25%) possédaient des propriétés antioxydantes fortes, 12
autres (21%) possédaient des propriétés antioxydantes de force moyenne et 24 (43%) étaient ni antioxydants, ni oxydants. Cinq( 9%) des produits étudiés possédaient des propriétés oxydantes. Nos études sur la mutagénécité montrent que sur les 56
produits étudiés, 53 (95%) ne sont pas mutagènes en soi, ni par l'action de leurs métabolites hépatiques une fois transformés par les cytochromes P-450. Nos études sur les propriétés antimutagéniques des mêmes
56 produits indiquent que 50% de ces derniers sont capables
d'inhiber de plus de 35% les propriétés mutagéniques de
mutagènes connus comme le dichromate de potassium. Nous avons observé que 19 des produits étudiés (34%) possèdent à la fois des propriétés antimutagéniques aussi bien en soi, que dans leurs métabolites hépatiques. On a également observé que les extractions aqueuses
d'épices de courtes durées semblent préférables aux extractions de longues durées ou aux extractions éthyliques pour récupérer les micronutriments qui possèdent des activités antioxydantes. Nos résultats suggèrent que ce ne sont pas nécessairement les produits qui possèdent des propriétés antioxydantes fortes qui inhibent le plus la mutagénécité et permettent de penser que les sites d'action antioxydante d'une molécule purifiée, comme le catéchol, sont différents des sites responsables de l'activité antimutagène. D'après les résultats que nous avons obtenus, l'activité
mutagénique des composés mutagènes que nous avons utilisés au cours de nos études, soit le dichromate de potassium et lequercetin, ne semble pas être relié à un mécanisme d'oxydation du bagage génétique des cellules. Ceci est suggéré parce que certains oxydants inhibent leurs mutagénécités alors que tous les produits antioxydants n'inhibent pas nécessairement leurs propriétés mutagéniques. L'analyse des résultats obtenus suggère également que de
tous les produits sélectionnés et étudiés, la ru tine, la
vitamineE, le catéchol, l'épicatéchine, le gossypol, l'origano doux, l'origano fort et la menthe seraient les produits les plus potentiellement intéressants à utiliser dans la prévention du cancer. En effet, ces produits ne sont pas mutagènes en soi ni par l'action de leurs métabolites hépatiques, ils possèdent des propriétés antioxydantes fortes et s'avèrent capables d'inhiber l'activité mutagénique de produits mutagènes. En résumé, tout notre travail a porté sur le développement de méthodologies qui nous ont permis d'étudier certaines propriétés biologiques des micronutriments. Les résultats obtenus renforcent les hypothèses que plusieurs micronutriments possèdent effectivement des propriétés biologiques favorables et même réparatrices pour les cellules en voie de cancérisation. Les recherches scientifiques confirment de plus en plus que nous sommes ce que nous mangeons et que notre alimentation et notre mode de vie jouent un rôle important dans l'éclosion des maladies. L'augmentation de plusieurs types de cancers n'est peut-être pas étrangère à notre alimentation. Alors mangeons mieux et nous vivrons mieux.


identifier: La Roche, Stéphane  (1994). Mesure de la biotoxicité de l'air intérieur dans les édifices hermétiques  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 129 p.

abstract:
 Les principaux polluants de l'air intérieur provenant de
diverses sources peuvent être subdivisés selon cinq catégories qui sont les composés organiques volatiles (COV) , la fumée de tabac, les bioaérosols, les poussières et particules et les vapeurs et gaz. Les bioessais suivants: inhibition de la bioluminescence de Photobacterium phosphoreum (Microtox®), inhibition de la biosynthèse de novo de la B-galactosidase chez E. coli (Toxi-Chromotest) et inhibition des déshydrogénases chez Bacillus cereus ont été utilisés pour mesurer individuellement et en mélanges la toxicité aiguë de plusieurs polluants de l'air intérieur à des concentrations considérées nocives par la littérature. Le formaldéhyde, la nicotine, l'acroléine et plusieurs cov ont démontré une toxicité à des concentrations en deça des valeurs considérées acceptables par les normes gouvernementales lorsque testés avec ces bioessais. Des essais comparatifs démontrent que l'inhibition de la bioluminescence (Microtox®) est significativement plus sensible. L'évaluation toxicologique d'environ 200 combinaisons de huit cov en mélanges à proportion égale (V/V) a démontré qu'il existe des effets synergiques et antagonistes reliés à plusieurs substances d'un même groupe de polluants. Des tests de toxicité sur des éluats de membranes de 0, 45 J,.~.m ainsi que du contenu de barboteurs utilisés pour échantilloner 2 m3 d'air intérieur
dans des sites considérés propres et pollués suggèrent que ces bioessais peuvent être des outils économiques et rapides pour évaluer la qualité globale de 1 'air intérieur pour
éventuellement déterminer un indice de salubrité.


identifier: Labonté, Patrick  (1995). Identification et caractérisation de la protéine codée par le gène NS2 de corona virus humain de souche OC43  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 166 p.

abstract:
L'analyse et la comparaison des génomes du corona virus respiratoire humain HCV-OC43 et du coronavirus entérique bovin BCV démontrent clairement que ces deux virus sont très proches du point de vue phylogénétique. En effet toutes les séquences connues codant pour les protéines structurales de ces deux virus ont plus de 91% d'identité entre elles. Pourtant, HCV-OC43 et BCV infectent des hôtes et des organes différents mais se cultivent in vitro sur la même lignée cellulaire. Afin de compléter la caractérisation du génome du HCV-OC43 (à l'exception de l'ARNm 1 codant pour la polymérase d'ARN) et de comparer celle-ci avec celle de BCV, nous avons analysé le gène et le produit de ce gène se trouvant en S'de l'ARNm 2. À l'aide d'amorces spécifiques, nous avons amplifié par RT-PCR la région en 5' du gène de la HE de l'ARNm 2. Nous avons démontré que cette région contient un ORF codant pour une protéine putative de 278 acides aminés avec une masse moléculaire de 32.2 kDa. L'analyse informatisée de la séquence en acides aminés de cette protéine putavive ns2 a permis d'identifier six sites potentiels de phosphorylation et aucun site de N-glycosylation. La comparaison de la protéine putative ns2 de HCV-OC43 avec la séquence de la protéine ns2 des autres coronavirus a permis de constater que la séquence de cette protéine est hautement conservée. En effet, on observe 92% d'identité entre la protéine ns2 de BCV et de HCV-OC43, et environ 50% entre les protéines ns2 de ces deux virus (BCV et HCVOC43) et celles d'autres coronavirus (MHV-JI-Thf et MHV-A59). Suite à l'expression de la protéine ns2 du HCV-OC43 dans le vecteur d'expression procaryotique pMAL1M-c2, nous avons produit chez le lapin un antisérum spécifique à cette protéine. Par immunofluorescenoe, nous avons montré
l'expression de la protéine ns2 du HCV-OC43 dans les cellules HR.T-18 infectées par HCV-OC43. Finalement, par immunobuvardage, nous avons montré que la protéine
ns2 est probablement une protéine non-structurale car nous avons montré qu'elle est absente de préparations de virus HCV-OC43 purifiés.


identifier: Loemba, Hugues Dieudonné  (1995). Étude de la réponse immunitaire humorale contre l'infection par le virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 251 p.

abstract:
Le syndrome reproducteur et respiratoire porcin (SRRP) est une nouvelle maladie porcine qui est caractérisée par des troubles de la reproduction accompagnés par des problèmes respiratoires. Ces signes respiratoires sont observés chez les porcelets à la mamelle, les porcelets sevrés et les porcs à l'engraissement et ils sont attribuables à une pneumonie interstitielle ou une pneumonie proliférative et nécrosante. Cette maladie est d'abord apparue en Amérique du nord vers la fin des années 80 et s'est répandue très rapidement dans plusieurs pays européens vers le début des années 90. L'agent causal fut pour la première fois identifié en 1991 en Hollande et désigné virus de Lelystad. Peu de temps après, des chercheurs en Europe et en Amérique du nord, et en particulier au Québec, ont isolé des virus possédant les caractéristiques morphologiques du virus néerlandais et sérologiquement associés à ce dernier. Ces virus furent isolés sur cultures primaires de macrophages alvéolaires de porcs à partir des spécimens cliniques provenant de fermes affectées par la maladie aux États-Unis, au Canada et au Québec. Le virus du SRRP fait partie du genre des Artérivirus,
classé provisoirement dans la famille Togaviridae, en regard de ses caractéristiques morphologiques. Sur le plan de son
organisation génomique et de sa stratégie de réplication, le
virus du SRRP est très proche des virus de la famille
Coronaviridae. Il existe différents variants antigéniques du virus du SRRP et certains isolats se distinguent par leur
pathogénicité particulière. Les objectifs de ce projet de recherche étaient d'étudier la réponse immunitaire humorale des porcs atteints du SRRP, d'établir la chronologie d'apparition des anticorps, d'identifier les polypeptides viraux impliqués dans l'induction de la réponse immunitaire humorale, ainsi que d'évaluer différentes techniques pouvant être utilisées pour le suivi sérologique de cette infection virale. La souche cytopathique de référence du Québec IAF-Klop fut utilisée dans cette étude et propagée sur cellules MARC-145, une lignée hautement permissive au virus du SRRP, dérivée de cellules de reins de singes. L'identification sérologique de la souche IAF-Klop a été confirmée par immunofluorescence indirecte, utilisant des anticorps monoclonaux dirigés contre la proteine N de la nucléocapside de la souche de référence américaine ATCC-VR2332. Le virus a été cloné par la technique des plages; des antisérums homologues ont été obtenus suite à l'immunisation de porcs et de lapins avec les préparations de virus purifié par ultracentrifugation isopycnique sur gradients de densité de chlorure de césium ou de saccharose. Différentes infections expérimentales ont été réalisées
chez des porcelets de cinq semaines d'âges et exempts d'agents pathogènes spécifiques (SPF), ce qui a permis d'obtenir des échantillons cliniques prélevés hebdomadairement pour l'évaluation de la réponse immunitaire humorale et le suivi de la virémie. Cinq types d'infections expérimentales ont été réalisées: 1- Une étude cohorte-sentinelle où les porcelets SPF ont
été introduits dans un élevage ayant des évidences cliniques et sérologiques du SRRP.  2- L'infection expérimentale de porcelets SPF avec une
dose unique intranasale de 105 DECP50 de la souche IAF-exp91
propagée sur cultures de macrophages alvéolaires.3- Une expérience de surinfection où des porcelets SPF
ont reçu une dose intranasale initiale de 105 DECP50 du virus du SRRP, suivie d'une dose de rappel au 35ième jour de la maladie. 4- Une expérience d'hyperimmunisation où des porcelets
SPF ont été infectés par voie intranasale, puis ont reçu des
doses de rappel à toutes les deux semaines. 5- Une infection virale mixte où les porcelets ont reçu
initialement une dose intranasale de la souche IAF-Klop du
virus du SRRP, suivie d'une dose intranasale de la souche
A/SW/IAF-5393/QC9l(H1Nl) du virus de l'influenza porcin au
septième jour post-infection. Les animaux infectés de même que les porcelets témoins,
ont été gardés pour une période d'observation de sept à quatorze semaines. Suite aux diverses infections
expérimentales, les porcs ont développé des signes cliniques du SRRP, à savoir une hyperthermie ou une subfébrilité
intermittante, une asthénie et une anorexie, une dyspnée, une conjonctivite ainsi qu'une cyanose des extrémités. Lors de la nécropsie, les principales lésions macroscopiques observées chez les porcs infectés étaient localisées au niveau des poumons. Il y avait généralement une congestion diffuse et une hépatisation du tissu pulmonaire, associées à des adénopathies médiastinales et paratrachéales satellites. Histologiquement, cette atteinte pulmonaire était liée à une pneumonie interstitielle. Des tests d' immunofluorescence indirecte { IFI), de
séroneutralisation (SN) et d'immunobuvardage (WB) ont été
effectués pour suivre la cinétique des titres des différents
anticorps et pour établir la spécificité polypeptidique de la réponse immunitaire humorale. Indépendamment du type
d'infection réalisée, peu de différences au niveau de la
cinétique de la réponse immunitaire en anticorps chez les
porcelets a été notée. En général, les IgM étaient détectés dès la fin de la première semaine de l'infection. Puis leurs titres atteignaient un niveau maximal vers le 14ième jour après exposition au virus du SRRP, pour ensuite décroître sous des valeurs non significatives au 35ième ou 42ième jour. Les IgG, pour leur part, étaient détectés au cours de la deuxième semaine de l'infection et leurs titres augmentaient rapidement pour atteindre une valeur-plateau vers le 28ième jour ou le 35ième jour; toutefois des titres élevés étaient maintenus pour plus de 3 mois après le début de l'infection. Des titres significatifs en anticorps neutralisants (>1:16) n'ont pas été observés avant la 4ième ou 5ième semaine de l'infection. Le virus fut isolé sur cultures cellulaires à partir des sérums des porcs infectés dès le 3ième jour d'infection jusqu'à la fin de la période d'observation. Ces résultats confirment ainsi la persistance du virus du SRRP, en dépis des titres relativement élevés en anticorps circulants. Les séquences correspondant aux cadres de lecture ORFs 4, 5, 6 et 7 ont été amplifiées à l'aide de la technique de
réaction de la Taq polymérase, puis clonées dans les vecteurs d'expression procaryotes pMALm-2 et pGEX-4T. Les gènes ont par la suite été exprimés dans les cellules bactériennes E.coli transformées par les plasmides recombinants. La réactivité des sérums d'animaux infectés envers les produits codés par ces cadres de lecture, a été sui vie par imrnunobuvardage. Les animaux infectés ont développé des anticorps contre les quatres protéines virales obtenues après expression des gènes amplifiés et clonés. Une réponse immunitaire humorale spécifique à chaque protéine du virus du SRRP a été mise en évidence; les anticorps dirigés contre la protéine d'enveloppe (E) codée par l'ORF5 et ceux contre le produit de l'ORF4 étaient détectables vers le 7ième jour après infection, tandis que les anticorps
spécifiques à la protéine N de la nucléocapside (produit de
l'ORF7) n'étaient décelables qu'à partir du 14ième jour
d'infection. Finalement les anticorps produits contre la
protéine de la matrice M (produit de l'ORF6) n'ont pu être mis en évidence qu'au début de la troisième semaine. Les résultats obtenus ont démontré qu'il existait une
chronologie particulière d'apparition des différents types
d'anticorps produits chez les animaux infectés et une réponse immunitaire humorale spécifique dirigée contre chacune des protéines du virus du SRRP. Toutefois, aucune corrélation n'a été observée entre les titres des anticorps détectés par immunofluorescence, les titres en anticorps neutralisants, la spécificité polypeptidique de la réponse humorale et la virémie révélée au cours de l'infection. Enfin, les tests sérologiques utilisés au cours de ce
recherche, ont permis de révéler l'efficacité de certaines
épreuves telle · que l'immunofluorescence indirecte et
l'immunobuvardage pour le suivi sérologique de l'infection par le virus du SRRP. La Technique de la RT-PCR a permis de
confirmer le statut virémique des porcs infectés ayant été
déterminé par les tests d'isolement viral à partir du sérum;
toutefois, il est nécessaire d'approfondir l'étude des
paramètres pouvant améliorer la sensibilité de cette technique pour la détection du génome viral à partir des échantillons cliniques.


identifier: Lavallée, Dominique  (1994). Étude structurale et pharmacologique de la portion médiane (11-23) du peptide CGRP  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science expérimentale de la santé, 149 p.

abstract:
 Une étude de structure-activité a été réalisée dans le but de déterminer l'importance
des acides aminés 11 à 23 de la portion médiane du hCGRPa pour
l'adoption des structures secondaires caractérisant cette région de la molécule et
pour l'activité biologique au niveau des récepteurs du CGRP. Par conséquent, une
série d'analogues et de fragments du hCGRPa a été synthétisée selon une méthodologie
de synthèse en phase solide mettant à profit les excellentes propriétés de
couplage du réactif BOP. Les analogues synthétiques ont été obtenus par la substitution
successive des acides aminés 11 à 23 avec, par exemple, la L-alanine. La
synthèse de ces dérivés sur un support réticulé a produit des peptides-résines
dont l'acidolyse a donné des quantités de peptides bruts correspondant à d'excellents rendements. L'abondance relative de certains peptides a de plus été augmentée au moyen d'un traitement basique, ce qui a permis la transformation d'un sous-produit, formé lors du clivage acide suite à une migration acyle N → 0 sur les résidus de sérine et/ou de thréonine. Une caractérisation des peptides par CLHP analytique, électrophorèse capillaire, spectrométrie de masse, analyse des acides aminés et dichroïsme circulaire des préparations de peptides purifiés par CLHP préparative a confirmé l'homogénéité de chaque peptide.

 Une évaluation pharmacologique des analogues et fragments synthétiques a été effectuée sur deux préparations tissulaires à l'aide d'essais biologiques. Selon ces essais pharmacologiques, il semble que l'arginine-11 posséderait un rôle structural de grande importance pour l'activité biologique. Par contre, les résidus Ala-13, Leu-15, Leu-16 et Ser-17 joueraient un rôle plus ou moins critique dans le maintien du caractère amphiphile de la molécule.· De plus, nos résultats ont également suggéré la participation des résidus Ser-19, Gly-20, Gly-21 et Val-22 dans une structure en coude p. L'ensemble de nos résultats démontre donc l'importance des divers résidus d'acides aminés du hCGRPa pour l'induction d'une réponse adéquate au niveau des récepteurs du CGRP. Ces informations devraient être des plus utiles pour le développement futur d'agonistes et d'antagonistes plus sélectifs pour les sous-types de récepteurs CGRP 1 et CGRP 2.


identifier: Dogbevi, Maximin Koffi  (1994). Effets des rayonnements tonisants gamma sur la qualité biochimique et microbiologique du porc et des fèves (Vigna unguiculata)  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 181 p.

abstract:
 Les effets des rayonnements ionisants sur la fonctionnalité des protéines et la qualité microbiologique du porc et des fèves ont été étudiés.

 La viande de porc et les fèves ont été irradiées à des doses de 2, 4 et 8 kGy aux débit de doses de 4.4 et 38.1 kGyfh. Les échantillons non irradiés ont servi de contrôle. Une étude sur la fonctionnalité des protéines extraites a été effectuée à l'aide d 'analyses de désamidation, désulfuration, d'hydrophobicité et de solubilité. Les résultats de ces analyses ont démontré une augmentation du dégré de désamidation en fonction de la dose d'irradiation et qui est plus importante chez le porc par rapport aux fèves; de même les traitements à un débit de doses de 38.1kGy /h ont provoqué une désamidation supérieure par rapport aux traitements à 4.4 kGyfh.

 On note qu'à l'exception des groupements sulfydriles SH
disponibles les autres propriétés fonctionnelles sont peu affectées par l'irradiaton quelque soit le type de protéines. Ces résultats pourraient s'expliquer par la faiblesse des doses et débits de doses utilisées et par la réversibilité de la structure des protéines et des réactions des protéines au cours des mesures. L'irradiation du porc et des fèves a montré toutefois qu'à faible débit de doses pour le porc et à fort débit de doses pour les fèves, on a une diminution de la quantité des SH disponibles.

 Le dénombrement des microorganismes a été effectué sur des échantillons de porc irradié aux doses de 1, 3 kGy puis
entreposé à 4°C, et sur des échantillons de fèves irradiées aux doses de 1. 5 , 3 kGy puis entreposées à 30°C à 85% d'humidité relative; et les résultats furent comparés aux comptes microbiens obtenus des échantillons témoins. Les traitements à l'irradiation ont été procédés à 20 kGyfh. Les résultats de ces analyses ont démontré une réduction de la flore de bactéries psychotrophes, mésophiles et Pseudomonas chez le porc, et de la flore de moisissures chez les fèves; en plus d'une augmentation importante de leur durée d'entreposage en fonction de la dose utilisée.


identifier: Coutsinos, Zoï  (1994). Étude des modes d'induction d'une immunité mucosale contre le virus de l'immunodéficience humaine chez la souris et le lapin  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 258 p.

abstract:
 Dans la dernière décennie, des efforts sans précédant à l'échelle mondiale ont été déployés pour comprendre et combattre le virus de l'immunodéficienoe humaine (Vlli) et la maladie qu'il induit. Bien que les campagnes de prévention et d'information aient été importantes, le nombre de cas ne cesse d'augmenter. L'absence d'une cure et l'issue fatal du syndrome de l'immunodéficience acquise(SIDA) font que le développement d'un vaccin s'impose comme une nécessité des plus grandes.

 Les modèles expérimentaux de vaccin contre le Vlli et d'autres lentivirus, notamment le SIV et le FIV, qui sont présentement en évaluation sont constitués soit de particules virales atténuées ou inactivées, de virus recombinants exprimant certains gènes du VIH, de peptides synthétiques dans des épitopes choisis, d'anticorps anti-idiotypiques, de sous-unités virales naturelles ou recombinantes et d'immunosomes-VIH et -SIV. Jusqu'à présent, la majorité des études de vaccination dans lesquelles une immunité protectrice a été rapportée dans les modèles chimpanzé-VIH, macaque-SIV et chat-FIV, les auteurs ont suivi des protocoles d'immunisation parentérale et l'épreuve a été intraveineuse. Or, bien que le VIH puisse être transmis par le sang et les dérivés sanguins (voie parentérale), les contacts homo- et hétérosexuels représentent la voie principale de transmission du virus. na été clairement démontré que le virus peut pénétrer les muqueuses génitales et colorectales même si celles-ci sont dépourvues de lésions. En général, les muqueuses représ~ntent une barrière physique et une barrière immunologique qui protège avec efficacité l'organisme contre les pathogènes rencontrés en ces lieux. Etant donné que l'immunité au niveau des muqueuses n'est pas stimulée par les protocoles d'immunisation conventionnels, et vue la transmission sexuelle du VIH, nous avons émis l'hypothèse selon laquelle l'induction d'une immunité mucosale associée à l'immunité humorale et cellulaire pourrait s'avérer essentielle à la protection contre l'infection par le VIH. Peu de travaux ont été publiés concernant les conditions optimales d'immunisation capables de stimuler le système immunitaire dans sa totalité.

 Dans notre projet, utilisant les immunosomes-VIH comme vaccin, nous avons voulu définir les paramètres requis pour obtenir une stimulation maximale à la fois de l'immunité mucosale et systémique chez les animaux de laboratoire. Nous avons d'abord évalué, chez la souris, les paramètres tels que le nombre, la voie, le type, la durée des immunisations ainsi que l'intervalle entre chacune d'elles. Différentes combinaisons de vaccinations mucosale-parentérale et parentérale-mucosale ont été aussi analysées. Les protocoles qui nous ont semblé les plus performants ont été ensuite évalués chez le lapin. Nous avons déterminé le titre et l'isotype des anticorps qui reconnaissent spécifiquement le VIH dans les échantillons prélevés dans le sang et dans les différents compartiments mucosaux. De plus, l'activité neutralisante des anticorps de certains échantillons a été évaluée par deux méthodes différentes.

 Nous avons montré que les immunisations parentérales seules ne stimulent pas l'immunité mucosale, malgré qu'elles induisent la production d'anticorps sériques. Au contraire, il est possible d'induire à la fois une forte réponse systémique et mucosale par un protocole à interventions mucosales seulement. Cette réponse, qui est dépendante de la fréquence et la durée des immunisations, est encore plus élevée lorsque les interventions mucosales et parentérales sont combinées. En général, les protocoles où les immunisations mucosales précèdent l'intervention intramusculaire semblent être plus efficaces à cet effet. Par ailleurs, le système immunitaire est vigoureusement stimulé lorsqu'une intervention intradermique suit les immunisations mucosales et intramusculaire. Ceci est démontré par les titres considérables des anticorps de tous les isotypes au niveau du sérum et des différents compartiments mucosaux. Les anticorps qui sont induits reconnaissent spécifiquement le Vlli et sont capables de neutraliser l'infectivité du virus in vitro. Nos résultats montrent que les immunisations mucosales et par voie intradermique devraient être sérieusement considérées dans l'établissement de protocoles d'immunisation contre le voe chez l'humain.


identifier: Mahrour, Arezki  (1995). Effets de l'irradiation gamma sur la qualité microbiologique et chimique du poulet  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 292 p.

abstract:
Les salmonelles sont des bactéries pathogènes qui
infestent la majorité des viandes de volaille commercialisées à travers le monde, causant ainsi des maladies infectieuses. Pour éliminer les germes pathogènes et augmenter la durée de conservation du poulet, l'appel au procédé d'irradiation est une solution raisonnable qui est acceptée dans plusieurs pays et préconisée par d'autres. Toutefois, 1 'irradiation à des doses requises pour la destruction totale des germes pathogènes peut générer parfois des modifications chimiques et organoleptiques dans certains produits tels que la viande de poulet. Afin de remédier à ces modifications, préconise d'utiliser des pré-traitements notre étude associés à l'irradiation. L'utilisation d'une combinaison de traitements: irradiation et marinade à base de plantes contenant des substances antioxydantes naturelles et irradiation avec emballage sous vide. Dans le cadre de cette étude, nous évaluerons l'efficacité de la dose d'irradiation dans la destruction des germes pathogènes (Salmonella), l'amélioration de la durée de conservation du poulet et l'effet de cette dose d'irradiation sur l'oxydation des lipides qui génèrent de mauvaises odeurs et saveurs. Des échantillons de cuisses de poulet frais, emballées
sous air et sous vide sont comparés avec des cuisses de poulet marinées dans une préparation (marinade) composée de jus de citron, de thym et de romarin et traités par des rayonnements ionisants au 60co. Cette comparaison s'est effectuée au cours de l'entreposage sous réfrigération à 4°C pendant 1 à 15 jours. La qualité du poulet est évaluée par des analyses
bactériologiques, chimiques et organoleptiques sur la viande
traitée à 0, 3 et 5 kGy. La qualité au cours de l'entreposage est vérifiée aux jours 1, 3, 6, 9, 12 et 15. L'examen des résultats montre, en ce qui concerne
l'analyse microbiologique, que le poulet témoin (0 kGy) est
très contaminé par les salmonelles (30 à 50%). L'irradiation
a un effet significatif sur le comptage des colonies aérobies (PSO.OS). Pour chaque traitement, le nombre de microorganismes viables diminue avec l'augmentation de la dose d'irradiation. La marinade a un effet synergique avec l'irradiation pour réduire le nombre total de microorganismes. L'application d'une dose de 3 kGy permet de réduire les microorganismes mais ne détruit pas entièrement les salmonelles. Cependant, une dose de 3 kGy de la viande marinée a un effet de synergie et permet de détruire les salmonelles et de prolonger la durée de conservation jusqu'à 12 jours. Par contre, l'application d'une dose de 5 kGy permet de réduire considérablement la flore totale, de détruire entièrement les salmonelles et d'augmenter ainsi la durée de conservation du poulet jusqu'à 15 jours. L'analyse chimique par chromatographie en phase gazeuse
des lipides neutres et des phospholipides a révélé certaines
modifications au niveau des acides gras : pour les lipides
neutres, l'acide palmitique (C16=0) et l'acide stéarique
(C18=0) qui représente 30 à 35 % des acides gras saturés du
poulet diminuent en fonction de la dose d'irradiation et de la durée du stockage. L'ac ide pal mi toléique ( C 16= 1) et l'acide oléique (C18=1) qui sont des monoinsaturés, représentant 57 à 61 % des acides gras totaux, augmentent légèrement en fonction de la dose d'irradiation et de la durée du stockage. Les acides gras polyinsaturés, entre autres l'acide linoléique (C18=2), l'acide linolénique (Cl8=3) et l'acide gadoléique (C20=2) représentant 10 à 12 % diminuent considérablement et semblent être les plus radiosensibles. Les phospholipides qui contiennent plus d'acides gras
polyinsaturés que les lipides neutres montrent que ceux-ci sont plus affectés par l'irradiation. La marinade semble toutefois montrer des fonctions antioxydantes et antibactériennes éprouvées, et avoir une meilleure protection pour le C18=2. En général, la concentration des acides gras, aussi bien
des lipides neutres que des phospholipides, diminue durant le stockage. La durée du stockage, à elle seule, compte pour 85% des variations observées sur les acides gras. Lors de l'évaluation sensorielle, (analyse effectuée un
jour après l'irradiation), les membres du jury, qui ont évalué l'apparence, l'odeur et la flaveur, ont éprouvé des difficultés à différencier le poulet irradié du non-irradié (témoin). Aucune différence significative n'a été trouvée (P>O.OS) entre le poulet mariné, le poulet irradié sous vide et le témoin non irradié. Toutefois, le poulet irradié sous air à 5 kGy était significativement différent (p~O.OS) du contrôle pour l'odeur et la flaveur.