identifier: Dubé, Charles-David  (2008). Expression différentielle des chimiokines et de leurs récepteurs lors des réponses alloréactives directe[s] et indirecte[s]  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 67 p.

subject: lymphocyte

subject: T

subject: C54

subject: CD8

abstract: L'activation  des lymphocytes T CD4+ alloréactifs  peut se faire par une reconnaissance directe ou indirecte des molécules du complexe majeur d'histocompatibilité allogéniques et  la migration  de ces cellules  au gretTon ou aux  organes  lymphoïdes secondaires  est hautement dépendante du système des chimiokines et de leurs récepteurs. En utilisant un modèle murin unique établi sur la base d•un seul clone de lymphocyte T (2.1 02) dans lequel les voies d'alloréactivité  directe et indirecte peuvent être étudiées séparément, nous avons démontré que les lymphocytes T effecteurs sont d'abord  détectés dans l'allogreffe lors de la voie directe contrairement à la voie indirecte où les lymphocytes T effecteurs sont  d•abord  détectés  dans  les  ganglions  drainants  avant  leur  migration  au  greffon. L'hypothèse  que la sensibilisation  des lymphocytes T naïfs au cours de la voie directe peut prendre place à l'extérieur  des organes lymphoïdes secondaires a donc été émise. La présente  recherche a été effectuée  en  caractérisant  l'expression  des chimiokines  et de leurs  récepteurs  pendant  les  premières  phases  du  rejet  d•allogreffes.  Des  analyses d'expression  de l'ARN  messager ainsi que  des analyses d'immunohistochimie ont été réalisées   sur   des   allogreffes   de   peau	prélevées   à  différents   temps   suivant   la transplantation.   Les  résultats  démontrent   que  trois  jours  suivant  la  transplantation, plusieurs chimiokines et récepteurs de chimiokines sont exprimés différemment selon les deux voies d•alloréactivité.  Plus précisément. les chimiokines  induites par I'IFNy et les récepteurs CCR 1  et CCR7 sont régulés à la hausse de façon précoce dans la voie directe. En  plus. nous démontrons  que  les lymphocytes  T infiltrant  le greffon  au cours  de  la réponse directe expriment CCR7 à leur surface. En conclusion, les lymphocytes T naïfs sont recrutés de façon précoce au greffon dans la voie directe. au même moment où les mécanismes  effecteurs   menant  au  rejet  s'enclenchent.  Ce  recrutement  pourrait  être provoqué par la production de CCL 19 par les cellules dendritiques activées au greffon. Ces   observations   supportent   rhypothèse  de   ractivation    des   lymphocytes   T   naïfs alloréactifs à lïntérieur de la greffe lors du rejet par la voie directe.


identifier: Dubé, Évemie  (2010). Implication des claudines et de la barrière hémato-épididymaire dans la fertilité masculine humaine  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 184 p.

type:
Thèse
Non évalué par les pairs

subject: epididyme

abstract:
L'infertilité  masculine est un problème de santé qui affecte un grand nombre de couples consultant   pour   des   problèmes   de   fertilité.   Plusieurs   évidences   suggèrent   qu'un dysfonctionnement  au niveau de l'épididyme  serait impliqué. En effet, au cours de leur passage dans l'épididyme,  les spermatozoïdes  subissent  une maturation  qui leur permet d'acquérir  leur motilité et leur pouvoir fécondant. Cette maturation est possible grâce à la présence d'un  microenvironnement  spécifique dans la lumière de l'épididyme  avec lequel les spermatozoïdes  interagissent. Ce microenvironnement est en partie créé par la barrière hémato-épididymaire.  Cette  barrière  permet également  de protéger  les spermatozoïdes contre  les  attaques   du   système   immunitaire.   La  barrière   hémato-épididymaire   est composée de jonctions serrées entre les cellules principales. Ces jonctions comprennent différentes  protéines,  dont  les  claudines  (CLDNs).  Les  CLDNs  sont  responsables  de l'étanchéité  de la barrière, mais aussi de la formation de pores qui permettent un transport sélectif d'ions  au travers de la barrière. Très peu d'informations existent sur la barrière hémato-épididymaire humaine. Nous avons d'abord  identifié les différentes composantes de cette  barrière à l'aide  de  microréseaux.  Nos résultats  ont  démontré  que  la barrière hémato-épididymaire 	humaine 	est 	composée    d'un 	grand 	nombre 	de   protéines jonctionnelles.  Nous  avons  confirmé  la localisation  de plusieurs  de  ces  protéines  aux jonctions serrées par immunohistochimie.  Nous avons ensuite regardé si la barrière est compromise  en  cas  d'infertilité  masculine,  plus  particulièrement   chez  des  patients souffrant   d'azoospermie   non   obstructive.   Chez   ces   patients,   plusieurs   protéines jonctionnelles  sont  exprimées,  mais  certaines,  par  exemple  CLDNl 0,  ne  le sont  pas exclusivement aux jonctions serrées, suggérant que la barrière est présente, mais qu'elle est dysfonctionnelle.  De plus, chez ces patients, plusieurs protéines de canaux d'eau  et d'ions   sont  affectées  suggérant  que  le  transport  transcellulaire  est  altéré  en  plus  du transport   paracellulaire.   Nous  avons  ensuite  développé   des   lignées  cellulaires,   les premières  à  ce jour  de  l'épididyme  humain adulte, afin  d'étudier  le  rôle de certaines CLDNs dans l'étanchéité  de la barrière à l'aide de petits ARN interférants. Cette étude a permis de montrer que les CLDNl, 3, 4 et 7. sont essentielles pour la fonction de barrière des jonctions serrées. Nous avons ensuite regardé l'état de la barrière chez des patients azoospermiques obstructifs  par  RT-PCR  en  temps  réel  et  par  immunohistochimie. L'expression des CLDNJ,  4 et JO, de CDHl et de TJPl  est affectée chez ces patients. Il est cependant très  difficile  d'obtenir  des  tissus épididymaires provenant de  patients azoospermiques obstructifs. Nous  avons donc  développé des  lignées cellulaires afin d'approfondir l'étude  de ce type d'infertilité.  Les résultats obtenus ont montré que la formation et  le  maintien  des  jonctions  serrées  sont  altérés  en  cas  d'azoospermie obstructive. Ces altérations s'étendent même jusqu'aux jonctions adhérentes et lacunaires. Dans  l'ensemble,   ces   résultats  démontrent  l'importance   de   la   barrière  hémato
épididymaire dans le développement et dans le maintien de'la fertilité masculine.


identifier: Dubeau, Danielle  (2009). Étude de la production de rhamnolipides par Burkholderia  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 124 p.

subject: biosurfactant pseudomonas aeruginose galleria mellonella

abstract:
Les  rhamnolipides  sont  des  molécules  amphiphiles   qui   possèdent  d'excellentes propriétés tensioactives. Grâce à leur biodégradabilité et à leur absence de toxicité, ce sont des candidats très prometteurs  comme alternative  aux surfactants synthétiques pour une variété d'utilisations  industrielles ainsi que la biorestauration  de sols contaminés. Les rhamnolipides ont  été exhaustivement étudiés chez Pseudomonas aeruginosa  à cause de leurs rôles dans certains comportements multicellulaires de cette bactérie, tels le développement de biofilm, la motilité  « swarming » ainsi que comme facteurs de virulence. Nous avons découvert chez 8. pseudomallei,   un   pathogène  important,   ainsi  que  chez B.   thai/andensis,   une  espèce génétiquement similaire à cette dernière mais non-pathogène, des gènes orthologues à rh/A, rh/B et rh/C, qui sont responsables de la production de rhamnolipides chez P. aeruginosa.  De plus, nous avons aussi retrouvé  des orthologues  de ces gènes chez B. cenocepacia  et B. ambifaria, deux espèces pathogènes opportunistes  que l'on  retrouve  plus particulièrement chez les individus  atteints  de fibrose kystique. Contrairement  à  P. aeruginosa,  ces quatre espèces contiennent les trois gènes nécessaires à  la production  de rhamnolipides  dans un même opéron. De plus, chez 8. pseudama/lei et 8. thailandensis, on a constaté qu'il existe deux copies  identiques  paralogues  de  cet  opéron.  Nous  avons  investigué  la  production   de rhamnolipides par ces espèces bactériennes dans différentes conditions de culture, incluant des milieux riches et minimaux ainsi qu'avec différentes sources de carbone.

Deux des espèces de Burkha/deria  étudiées, B. pseudamallei  et 8. thailandensis, sont capables de produire des rhamnolipides similaires à ceux produits par P. aeruginosa, sauf qu'ils possèdent des chaînes plus longues d'acides gras hydroxylés en position 3. Le contenu en dirhamnolipides  par rapport  aux monorhamnolipides  est beaucoup plus élevé chez Burkholderia que chez Pseudomonas. Cependant, nous n'avons pas encore trouvé de conditions favorables pour la production de rhamnolipides chez B. cenocepacia et B. ambifaria.

En inactivant  les deux copies du gène rh/A chez B. thailandensis,  lesquels sont responsables de la synthèse des précurseurs des rhamnolipides, on a démontré que les deux opérons rh/ sont fonctionnels  quoiqu'une des deux copies semble contribuer de façon prédominante à la production totale. Finalement, avec un double mutant  rh/A qui est incapable de produire  des rhamnolipides, on a démontré que la motilité « swarming » de B. thailandensis
dépend de la fonctionnalité de ses deux opérons rhl.


identifier: Duchemin, Matthieu  (2007). Validation des outils immunotoxicologiques pour l'étude des effets biologiques des contaminants chimiques en milieu marin  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 239 p.

subject:
bivalve
immunotoxicologie
xenobiotique
hemmocyte
crassostrea  gigas
mytilus  edulis
huitre
moule
contaminant
polluant
reproduction
saison
biomarqueur

abstract:
Les activités industrielles, agricoles ou urbaines de 1'homme exercent une pression chimique sur l'environnement marin. Lors d'accidents, mais le plus souvent lors de contaminations chroniques des effluents anthropiques, cette pression peut engendrer des effets toxiques de 1'échelle moléculaire à 1'échelle écosystémique perturbant le fonctionnement de l'écosystème marin côtier. Le risque environnemental de ces substances chimiques est caractérisé à 1'aide de biomarqueurs. Ces outils permettent la détection de ces polluants ou de leurs effets toxiques, la prédiction de ces effets sur les écosystèmes et la surveillance de leur évolution. Depuis une vingtaine d'années les biomarqueurs du système immunitaire sont utilisés pour diagnostiquer des effets immunotoxiques de nombreux groupes de polluants, sur plusieurs espèces sentinelles des écosystèmes terrestres et aquatiques, notamment chez les bivalves. Néanmoins, plusieurs facteurs endogènes et environnementaux peuvent moduler le fonctionnement du système immunitaire d'un individu et ainsi confondre le signal immunotoxique du polluant. Dans le cadre d'une collaboration franco-canadienne entre deux réseaux de recherche en écotoxicologie, le Réseau de recherche en écotoxicologie du Saint Laurent (RRESL) et le groupement de recherche « interactions moléculaires et physiologiques des contaminants du milieu marin (GDR IMOPHYS), ce travail de doctorat s'est  attaché à étudier 1'impact  de certains facteurs confondants, en vue de valider 1'utilisation  de 1'outil immunotoxicologique dans 1'évaluation du risque environnemental en milieu marin.
La stratégie  de 1 'étude  s'est  orientée selon  trois  axes,  en  utilisant  deux  espèces modèles communes dans 1'évaluation environnementale de 1'écosystème marin, de par leurs caractéristiques écologiques et  leur  importance économique, 1'huître  creuse, Crassostrea gigas, et la moule bleue, Mytilus edulis. Un premier axe méthodologique s'est  attaché à comparer différentes techniques et méthodes d'analyses des paramètres des cellules de la défense immunitaire chez les bivalves, les hémocytes, à développer un nouveau protocole d'exposition individuelle et à mettre au point un indice global de la réponse immunotoxique. Un second axe, écophysiologique, a cherché à étudier l'impact  des facteurs endogènes et saisonniers sur le fonctionnement individuel du système immunitaire chez ces deux espèces de bivalves. Un dernier axe, a enfm étudié l'impact de ces facteurs confondants sur le signal immunotoxique émis par des xénobiotiques caractérisant des activités anthropiques, en condition d'exposition individuelle.

L'axe méthodologique a montré l'importance critique du site anatomique de prélèvement des hémocytes pour des études immunotoxicologiques. À la suite d'ateliers internationaux d'harmonisation de méthodes d'analyses des paramètres immunitaires, un ensemble de protocoles, à standardiser, a été proposé dans le cadre de suivi de sites ateliers d'un  réseau de  recherche transatlantique en écotoxicologie (Réseau de Recherche sur les bivalves). Un indice cumulé immunotoxicologique a été développé, offrant une vision globale de la réponse immunotoxique. Enfin, cet axe a permis la mise au point un nouveau protocole opérationnel d'exposition  individuelle, adapté à l'évaluation du risque chimique en milieu marin, autorisant une standardisation des conditions d'exposition, l'ajout de la mesure d'un trait de vie adapté à des expositions aigues ou chroniques et l'augmentation de la sécurité chimique pour 1'utilisateur.
Dans le deuxième axe écophysiologique, chez Crassostrea gigas, comme chez Mytilus edu/is, les paramètres immunitaires ont montré des variations saisonnières. Ces variations sont nettement marquées pour la fonction de phagocytose, allant du simple au double. Le minimum de phagocytose coïncidait à la période de ponte chez des huîtres diploïdes, chez des individus dont le cycle reproducteur était artificiellement modifié, des triploïdes, et également chez les moules qui pondent deux fois dans un cycle saisonnier. Grâce à l'observation histologique des  gonades, le sexe  est  apparu  comme  un  facteur  confondant significatif pouvant induire des différences d'immunocompétence de 20%-30% entre les mâles et les femelles. De même, alors que les eaux se réchauffent, la diminution progressive des paramètres immunitaires, jusqu'à la ponte, s'explique par le développement des gamètes. Par contre, l'évolution  saisonnière des paramètres physico-chimiques de la colonne d'eau  n'a révélé que peu moduler la réponse immunitaire.
Enfin, le dernier axe a montré que le signal immunotoxique de polluants pouvait être brouillé en ne discriminant pas les individus testés selon leur sexe. De même, la sensibilité immunotoxiques aux polluants changer radicalement, selon le cycle reproducteur et les autres facteurs saisonniers. L'importance de ces facteurs confondants dans l'évaluation environnementale d'activités anthropiques croissantes ou rythmiques a été mise en évidence avec  des  doses  de  polluants  actuellement  mesurés  dans  l'environnement,  seuls  ou  en mélanges.
Par  cette  approche  méthodologique,  écophysiologique  et  écotoxicologique  des biomarqueurs du  système  immunitaire, ce  travail  de  recherche appliquée  a  finalement, contribué à progresser dans la validation et l'utilisation des outils immunotoxicologiques pour l'évaluation du risque chimique et environnementale en milieu mann. D'autres facteurs biologiques pourraient également confondre le signal immunotoxique et le passage à une échelle plus  grande de  conditions contrôlées est  maintenant possible. Mais ces résultats ouvrent  également  des  perspectives  de  recherche  plus  fondamentales  sur  le  rôle  des hémocytes dans la physiologie des bivalves et la régulation de la fonction neuro-immuno endocrine. Les résultats obtenus pourront pennettre une gestion pragmatique, durable et objective des activités anthropiques qui perturbent chimiquement le milieu marin côtier. La filière conchylicole pourra également chercher à appliquer ces nouvelles connaissances sur la qualité du milieu et de la ressource biologique au profit de l'amélioration de la qualité de la production, par exemple.


identifier: Dumais, Jean-Philippe  (2010). Étude de la régulation de la production des 4-hydroxy-3-méthyl-2-alkylquinolines chez Burkholderia ambifaria et B. thailandensis  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 128 p.

abstract:
La bactérie  Pseudomonas aeruginosa produit plusieurs types de molécules-signal impliquées dans la communication  intercellulaire. Ces molécules, qui incluent les 4-hydroxy-2- alkylquinolines (HAQ), jouent un rôle dans la régulation de l'expression  de plusieurs gènes de virulence.  L'opéron   pqsABCDE  est  essentiel  pour  la  biosynthèse  des  HAQ.  Nous  avons récemment  découvert  que  certaines  espèces de  Burkholderia, notamment  B. ambifaria et  B. thai/andensis,  produisent   des   HAQ   méthylés :   des   4-hydroxy-3-méthyl-2-alkylquinolines (HMAQ).

B. ambifaria est une bactérie à la fois un pathogène opportuniste chez les patients immunodéprimés dans le cas d'un  isolat clinique, et un agent protecteur se liant à la rhizosphère des  plantes  dans  le  cas  d'un   isolat  environnemental.  Cette  bactérie  est  regroupée  dans  le
« Burkho/deria cepacia complex >>(Bec), un groupe comprenant à ce jour une dizaine d'espèces phylogénétiquement  similaire. B. thai/andensis est une espèce bactérienne  avirulente phylogénétiquement  très  reliée  à  B.  pseudomal/ei, un  pathogène  humain  responsable  de  la mélioïdose.  La production  de  HMAQ  par B. thailandensis est  le résultat de l'expression  de l'opéron hmqABCDEFG, homologue à pqsABCDE de P. aeruginosa, mais contenant deux gènes additionnels,  hmqF et hmqG. Ce dernier est  responsable  de la méthylation  des  molécules  de HAQ. Une autre différence importante entre les deux opérons est leur régulation. Chez P. aeruginosa, le gène mvjR est localisé à proximité de 1 'opéron  pqs et code pour un régulateur transcriptionnel   de   type   LysR   contrôlant   l 'expression   de   pqsABCDE.  Par  contre,   chez Burkho/deria, aucun régulateur de ce type n'est  présent à proximité de l'opéron  hmq, et il ne semble pas y avoir de séquence de liaison de type LysR dans sa région promotrice, suggérant que la régulation de cet opéron est distincte du système de régulation de P. aeruginosa.

Le but de cette étude est d 'identifier les gènes impliqués dans la régulation de l'opéron hmq chez B. thai/andensis. Pour ce faire, j'ai utilisé une approche à deux volets.  Premièrement, j'ai effectué un criblage dans lequel le critère de sélection était une morphologie similaire à une souche ne produisant pas de HMAQ.  Dans l'autre  approche, j'ai construit un rapporteur hmqA
/acZ génomique   pour  B.  thailandensis, suivi  d'une   mutagénèse  aléatoire  du  génome  par

transposon.  Après un criblage en utilisant un phénotype  -galactosidase atténué, j'ai identifié les gènes affectés dans chacun des mutants intéressants par une technique de ligation aléatoire et par amplification  PCR.  Après  les  criblages,  d'environ   70000  colonies  de  B. thailandensis pour chacun,  j'ai  quantifié  la  production  de   -galactosidase  pour  confirmer  son  atténuation  ou inhibition et j'ai  retenu les candidats intéressants.  La production de HMAQ par les candidats a été quantifiée par analyse LC/MS. Les gènes impliqués dans la production de HMAQ ont été identifiés, et parmi la variété de gènes identifiés se trouvent des régulateurs transcriptionnels qui
pourraient avoir un effet direct sur la production des HMAQ.


identifier: Dupéré-Minier, Geneviève  (2009). Implicatiion du CD45 dans l'apoptose des lymphocytes T  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 324 p.

subject: caspase mort cellule cd45

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Le CD45 est une tyrosine phosphatase transmembranaire de type 1 retrouvé chez toutes les cellules hématopoïétiques nucléées. Le CD45 représente jusqu'à  10% de toutes les molécules de surface et son activité phosphatase représente plus de 90% de l'activité phosphatase totale de la cellule. Cette phosphatase est un important régulateur de voies de signalisation chez les cellules du système immunitaire. Les travaux de notre laboratoire sur  l'induction  de  l'apoptose  par des  agents  perturbant  le potentiel  mitochondrial  ont permis de mettre en évidence l'importance  de la tyrosine phosphatase CD45. En effet, les résultats obtenus dans notre laboratoire montrent que le CD45 est impliqué dans la condensation de la chromatine et la fragmentation  de l'ADN des cellules T induites en apoptose par des agents toxiques. Contrairement aux cellules T normales (CD45+), les cellules déficientes pour l'expression du CD45 (CD45-) sont résistantes à l'apoptose nucléaire. Bien qu'il  y ait absence d'apoptose  nucléaire chez les cellules CD45-, la voie apoptotique  mitochondriale  semble  enclenchée.  En  effet,  il  a  été  démontré  chez  les cellules CD45+ et CD45- une augmentation du calcium intracellulaire, une dissipation du potentiel membranaire mitochondriale, la libération du cytochrome c, l'activation de la caspase-3 et le clivage du DFF45. De plus, l'isolation des différentes fractions cellulaires a  permis de montrer une diminution  de la localisation  nucléaire de la caspase-3  et du DFF40.  Nous  avons  également  préalablement  démontré  que  le  CD45  joue  un  rôle important  dans  l'apoptose  nucléaire  par  la  régulation  de  l'homéostasie  ionique  de  la cellule. Le but de ce projet de doctorat était de caractériser  l'apoptose  chez les cellules déficientes pour l'expression  du CD45 afin d'élucider  les mécanismes de régulation du CD45 dans l'apoptose nucléaire chez les cellules T.

Le premier volet consistait à explorer l'importance de l'expression du CD45 sur les mécanismes de régulation de l'apoptose  nucléaire. Nos résultats ont démontré un clivage normal de deux molécules inhibitrices de l'apoptose nucléaire, PARP-1 et NuMa chez les cellules CD45-. Par contre, chez ces cellules, nous avons observé un clivage sélectif des pores nucléaires. En analysant le DFF40, l'endonucléase  responsable de la fragmentation de  l'ADN  lors  de  l'apoptose,   nous  avons  confirmé  par  immunofluorescence  que  sa localisation nucléaire était perturbée chez les cellules CD45-. Nous avons aussi démontré qu'en absence du CD45, l'oligomérisation du DFF40 est perturbée. De plus, le DFF40 est exprimé  sous  différentes  formes  oligomériques   après   induction  de  l'apoptose   qui diffèrent selon l'expression  du CD45. Nous avons également identifié des modifications post-traductionnelles  chez  le  complexe  OFF  où  la  phosphorylation  sur  les  résidus tyrosine du DFF45 est inhibée et l'acétylation  du DFF40 augmentée chez les cellules CD45-. Le CD45 joue donc un rôle important dans l'apoptose  nucléaire et semble agir, entre autres, sur les mécanismes de régulation du DFF40.

Le deuxième volet consistait à évaluer le rôle du CD45 dans l'apoptose  nucléaire en caractérisant les principales voies de signalisation en aval du CD45 et en évaluant des événements impliqués dans l'apoptose. Nos résultats ont premièrement démontré que l'absence du CD45 inhibe la production d'espèces  réactives oxygénées (ROS), fortement induite chez les cellules normales, CD45+. L'activation  des MAPKS p38, Erk et JNK est spécifiquement  régulée par l'expression  du CD45. De plus, les protéines kinases p38, JNK,   Akt  et  PKC8,  situées  en  aval  de  la  régulation  du  CD45,  détiennent   une augmentation de leur activité en absence de la molécule CD45 suite à l'induction de l'apoptose.  Par contre, l'exposition  d'inhibiteurs  spécifiques  de ces kinases ne rétablie pas la fragmentation  de 1 'ADN  chez  les cellules  CD45-.  Fait intéressant, nous avons montré que le facteur de transcription NF-KB est constitutivement actif chez les cellules CD45-. Toutefois,  l'utilisation  d'un  inhibiteur  spécifique  à l'activation  de  NF-KB ne rétablie pas l'apoptose  nucléaire chez les cellules CD45-. Ces résultats suggèrent donc que le CD45 détient un rôle important dans l'apoptose  nucléaire en régulant plusieurs molécules qui jouent un rôle sur les mécanismes intramoléculaires régulant l'apoptose
nucléaire.


identifier: Dupras, Charles  (2009). Modulation apoptotique de paramètres épigénétiques : Implication de l'histone désacétylase 5 et des histones H3  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 119 p.

subject: hdi apoptose hdac

abstract:
Plusieurs inhibiteurs d'histone  désacétylases  (HDI) non-spécifiques sont  présentement en essais cliniques comme adjuvants à la chimiothérapie pour le traitement de certains cancers. Des études  préalables ont démontré  une capacité  des HDI à induire 1'apoptose avec une spécificité accrue pour les cellules tumorales.   Plusieurs hypothèses ont été suggérées pour expliquer  le  mode  d'action   par  lequel  les  HDI  non-spécifiques  peuvent  renverser  la résistance  à  la  mortalité,  sans  toutefois  qu'aucun   consensus  ne  soit  encore  clairement avoué.  Une compréhension plus fine des voies signalétiques empruntées par ces inhibiteurs pour 1'induction  de 1'apoptose  permettrait  de  cibler encore plus précisément  les cellules tumorales et de minimiser les effets secondaires  encourus par les HDI à large spectre.  En ce sens,  nos travaux  cherchaient  à établir  des  liens entre la modulation  des paramètres épigénétiques pouvant survenir durant 1'apoptose normale induite par des inducteurs non HDI et la modulation de paramètres épigénétiques  pouvant être induits  par les HDI.   En premier lieu, nous avons voulu vérifier si l'hyperacétylation  des histones est réellement une caractéristique  propre aux cellules  apoptotiques.    En second lieu   nous  avons analysé la modulation de l'expression de plusieurs histones désacétylases (HDAC) durant l 'apoptose. En  troisième  lieu,  nous  avons  observé  l'influence du  traitement  des  cellules  avec  la trichostatine  A  (TSA),  un  HDI  bien  caractérisé,  sur  certains  paramètres  épigénétiques comme  l'acétylation   des  histones,  la  phosphorylation  des  histones  et  l'expression   des HDAC.  Ces travaux sur l'implication des mécanismes épigénétiques durant l'apoptose ont permis  de  démontrer  la  modulation  caspase-3-dépendante  de  l'expression  de  l'histone désacétylase  5 (HDAC5)  et  la  déphosphorylation   massive  des  histones  H3  lorsque  les cellules sont traitées avec différents inducteurs de 1'apoptose.   Bien que 1'hyperacétylation des histones ne soit pas une caractéristique des cellules apoptotiques, la TSA entraîne aussi et de façon précoce, bien avant 1'induction de 1'apoptose, la déphosphorylation  des histones H3.   Selon nos travaux, il est donc possible que les HDI agissent, soit en reproduisant la modulation 	apoptotique   de   l'expression 	de   la   HDAC5, 	soit   en	reproduisant   la
déphosphorylation apoptotique des histones H3.


identifier: Dussault, Dominic  (2008). Étude des mécanismes de radiorésistance de la bactérie Pantoea agglomerans  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 117 p.

subject: irradiation ionisation bacterie membrane

abstract:
Dans un contexte d'une  population sans cesse grandissante et de la diminution des terres arables, la production alimentaire doit être de plus en plus efficace pour assurer un meilleur  rendement.  Avec la mondialisation  de l'alimentation, les distances  parcourues par  les  denrées  sont  augmentées,  ce  qui  accroît  les  risques  de  contamination  et  de dégradation. Pour palier à cette problématique, il est primordial de trouver de nouvelles technologies  afin d'accroître la salubrité  alimentaire.  De meilleurs  procédés  de conservation des aliments tels l'irradiation  ionisante peut s'avérer  une solution judicieuse. Dans cette optique, 1'étude des mécanismes de radiorésistance bactérienne s'avère intéressante afin d'améliorer les procédés de fabrication et de conservation. L'objectif  de ce projet de maîtrise  était  la compréhension  des mécanismes  de résistance  bactérienne face à ce traitement de pasteurisation à froid. En 2004, Lacroix et Lafortune ont isolé une souche  de bactérie  résistant  à une dose  d'irradiation   gamma  de  7 kGy.  Ce microorganisme fut identifié comme étant Pantoea agglomerons. Cette entérobactérie est
5 fois plus radiotolérante qu'Escherichia coli et est présente dans la flore de certains végétaux; il est donc possible de la retrouver  dans les aliments  contenant  des légumes frais. Pour ces raisons, P. agglomerons a servi de modèle dans cette étude.

Les résultats obtenus ont montré que plusieurs mécanismes sont responsables de la résistance  ou  de  l'adaptation   au stress  causée  par  l'irradiation. Selon  la littérature, l'effet  létal de l'irradiation  serait provoqué par l'oxydation  massive des protéines bactériennes. D'après  les résultats obtenus, 1'irradiation par des rayons gamma semble augmenter la concentration  de pigments caroténoïdiens. Toutefois, la concentration  n'est pas   nécessairement    toujours   liée   à   la   radiorésistance    bactérienne.    De   plus,   la concentration en acides gras composant la membrane bactérienne semble être influencée par  ce  traitement.   Une  augmentation   des  acides   gras  insaturés   ayant   un  pouvoir antioxydant pouvant provenir d'une  modification enzymatique bactérienne a pu aussi être observée. Les résultats ont aussi montré que 1'irradiation a un effet significatif sur la composition en muropeptides  composant le peptidoglycane.  Enfin, certains mécanismes de  protéines  chaperonnes,  plus  précisément  GroEL/GroES et  DnaK/DnaJ/GrpE,  sont induits suite à l'exposition aux rayons ionisants. En conclusion, les mécanismes de radiorésistance ne semblent pas spécifiques aux stress causés par l'irradiation ionisante. Le processus selon lequel l'irradiation déclencherait un dispositif de radiorésistance typique chez la bactérie semble être plutôt associé à l'activation de plusieurs mécanismes de défenses de la cellule incluant les machines d'adaptation  cellulaires répondant aux stress environnementaux.


identifier: Dussault, Sophie  (2010). Effet des pesticides d'origine agricole provenant de sous bassins de la rivière Yamaska sur le système immunitaire et les antioxydants du ouaouaron (lithobates catesbeianus)  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 102 p.

subject: grenouille splenocyte atrazine metolachlore

abstract: Le sort planétaire des amphibiens s'avère des plus inquiétants depuis quelques années. Afin de mieux  comprendre la situation,  nous avons choisi d'étudier  l'impact des agripesticides sur le système  immunitaire,  ainsi que les antioxydants de la peau du ouaouaron (Lithobates catesbeianus). En effet la pollution de l'eau  pourrait affecter ces systèmes et favoriser une baisse  de  la résistance des amphibiens, les rendant plus vulnérables  à diverses maladies, ce qui expliquerait en partie leur déclin. Le système immunitaire est composé de plusieurs cellules dont les macrophages et les lymphocytes, mais  aussi de peptides retrouvés au niveau de la peau. Les  cellules cutanées sont protégées par des antioxydants qui préviennent l'accumulation de radicaux libres. Parmi ces antioxydants, les rétinoïdes jouent un rôle important dans la régénération cellulaire. Les caroténoïdes et la vitamine E, pour leur part, vont entre autres capter les radicaux libres, ce qui est primordial pour la santé des  amphibiens.  Le but de cette étude est d'établir si le niveau de pollution agricole affecte ces différents systèmes. Pour débuter, 1'échantillonnage de ouaouarons a  été effectué dans 6 bassins versants de la rivière Yamaska. Dans un premier temps, À partir des cellules de la rate, les biomarqueurs immunitaires suivis ont été: la viabilité, la phagocytose et la flambée oxydative. Ensuite, l'analyse  de la présence de 8 peptides dans la peau (ranatuerine  1, 2, 2Ca, 3, 5, 7 et 8) a été obtenue par HPLC-MS-MS et PCR temps réel. Dans un second temps, la concentration d'antioxydants présente dans la peau a été analysée par CLHP. Les résultats obtenus démontrent que l'ensemble des systèmes de défenses


identifier: Edwards, Sara I.  (2009). Regulation of gap junction alpha 1 binding proteins in the adult rat epididymis and their influence on androgen-dependent gap junction alpha 1 localization  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 135 p.

subject: epididyme androgene

abstract:
Spennatozoa acquire  motility  and fertility  by passing  through  the epididymis. The epididymal epithelium is maintained  by androgens and  testicular  factors  secreted  by the testes.  It  is  thought  that  epithelial   regulation   by  these  testicular  factors  influences  gap junctional  intercellular communication and involves signal  transduction pathways.
Little   information  exists   regarding    signal   transduction  pathways    or   on   the regulation  of gap junctions  (GJ) in the epididymis. However,  previous studies from this Jaboratory  have  shown  that  the  targeting  of  the gap  junction  protein  alpha  1  (GJA 1) is reliant  on  testicular  androgens in  the  initial  segment  of  the  rat  epididymis (Cyr  et  al.
1996).

The first objective  of this study was to characterize the expression  and localization of signalling effectors  cAMP-dependent protein  kinase  A catalytic  subunit  (PKAcat) and cellular   Rous   sarcoma   oncogene  (c-Src)   m   the   adult,   rat   epididymis. Immunocytochemical  and  Western   blot  analyses   demonstrated  that  c-Src  and  PKAcat were  present  in ali  four  segments of  the  epididymis. C-Src  Jocalization  was  segment specifie.  These data suggest  that PKAcat and c-Src can mediate  signalling cascades  in the rat epididymis.
The  second  objective  of  this study  was  to detern1ine  the effect  of androgens on GJA 1 protein synthesis and phosphorylation in the initial segment  and caput epididymidis using  an  orchidectomy  mode!  and  Western   blot  analyses.   This  was  done  in  order  to understand  the androgen-dependent targeting  of GJA 1. The  proteins  c-Src,  PKAcat  and tight junction  protein  1  (TJP1) were a Iso investigated, since studies  have shown  that they regulate  GJA 1   (Toyofuku et  al.  1999;  Giepmans et al.  2001 a;  Giepmans et  al.  2001 b; Duffy et al. 2004;  Yogo et al. 2006).  GJA 1  expression was testicular  factor-dependent in the   initial   segment   and   caput,   and   its  phosphorylation  state   was   testicular   factor dependent   in  the  caput,  but  not  the  initial  segment. These  results  indicate   that  GJA 1 targeting  is independent of its protein  synthesis  and phosphorylation status. Western  blot analyses  demonstrated that  c-Src  was  testicular  factor-dependent in the  initial  segment and androgen-dependent in the caput.  The ratio of active  to inactive  c-Src was androgen dependent   m  the  caput,   but  remained   constant   m  the  initial   segment. Immunocytochemical  analysis   indicated   that  c-Src  cellular   targeting   was  altered   with orchidectomy and was dependent on testicular factors. These results indicate that despite a  decrease  in total c-Src, c-Src is still active  in orchidectomized  animais and  therefore capable  of regulating GJA1. PK.Acat expression  decreased  in orchidectomized  animais maintained with testosterone in the caput. Orchidectomy did not influence the cellular localization of PK.Acat. No differences  were observed  in any treatment group for TJPI. These   results  suggest   that  neither   PK.Acat nor  TJP l    influence  GJA 1      intracellular targeting.
The third objective of this study was to determine if a direct association  between GJA l   and  c-Src,  PKAcat  or  TJPI,   played  a  role  in  GJA l 's  intracellular  targeting. Coimmunoprecipitation  analyses were done on tissue lysates from the initial segment and caput epididymidis  using an orchidectomy  mode!. In the initial segment, an association was observed between GJAI and c-Src and GJAI and TJPI, which was treatment independent. In the ca put, a weak association was observed between GJA l  and TJP l  in ali  treatment  groups.  There  was  no  association  between  GJA l   and  PK.Acat in either segment. These results suggest that GJA 1   is regulated in a segment-specifie  manner and that c-Src and TJPI  may play a role in GJ inhibition.
This study contributes severa! ideas to epididymal  cell biology. It demonstrates

that signalling pathways may contribute to segment-specifie  physiological differences  in the epididymis. The study suggests that tight and gap junctions could form a junctional nexus in the epididymis. The data provide evidence that gap junctions are regulated in a segment-specifie manner to contribute to epithelial diversity.


identifier: El-Far, Mohamed  (2005). Molecular studies on the densovirus of Mytbimna loreyi, MIDNV a candidate for biological control  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 229 p.

subject: densovirus virus

abstract:
Densoviruses  of arthropods belong with the parvoviruses of vertebrates to the Parvoviridae family. These isometric viroses, with a diameter between 22 to 25 nm, contain genomes of 4-6 kb of linear, single-stranded  DNA. The limited number of coding genes implies a high dependence on a coding complement from their hosts and may explain their narrow host range. Densoviruses are potential biological control agents due to their specifie and acute effect. Yet, their use in biological control has been delayed for a long time since early unconfirmed reports claimed that these insect viroses infect vertebrate cells in culture. However, the advance in molecular biology research makes it increasingly clear that many differences exist between vertebrate and invertebrate biology. In tum, viroses that are obligatory parasites of invertebrates are adapted to the distinct biology of their hosts, thus fitness of these insect viroses to vertebrates is not anticipated.  On the other band, sorne vertebrate  viroses such as bunyaviruses and flaviruses, that are transmitted to their hosts through an insect vector, can readily replicate and survive for long periods in their intermediate insect hosts without damage. However, these viroses have RNA genomes that carry several viral accessories, which makes the virus Jess dependent on the cell machinery.

Little is known about the biology of densoviruses, although in recent years several densovirus genomes have been cloned. In the current work, two new densoviruses have been characterized  and their expression and tropism mechanisms have been explored. The first objective of this thesis was to study the molecular biology of three densoviruses; Mythimna loreyi, Galleria mel/one/la and Helicoverpa armigera densoviruses (MlDNV, GmDNV and HaDNV), respectively. These viroses were isolated from lepidopteran pests that are economically  important  in  agriculture.  Their  genomes  were  cloned  and  the complete sequence and genomic organization were determined. They have genomes of about 6 kb and ITRs of around  550  nts which are the longest among all parvoviruses.  A high level of sequence  identity (90%) was found among them. The cloned genomes were shown to be infectious both in vitro and in vivo by initiating infections typical to that of the wild-type virus, after  transfection.  Studying  their expression  showed  that they employ alternative
splicing and leak.y scanning  mechanisms to produce three nonstructural  proteins (NS1-3) from one viral transcript. These viruses use a leak.y scanning mechanism to produce a set of four structural proteins (VPs) from one transcript produced from the complementary strand without employing splicing or internai ribosome entry sites.

The second objective  was to localize the allotropie determinants  that control the tropism of GmDNV and MIDNV. The two viruses share over 90% sequence  identity but differ in their host preference. MIDNV is polyspecific, infecting severallepidopteran species, whereas GmDNV is restricted toits host Galleria mel/one/la. The two infectious clones, pMI28 and pGml  ofMIDNV and GmDNV, respectively,  were used to swap a number of domains  that covered  the whole genome to obtain chimeric  genomes.  We established  a cellular system, consisting oftwo cell types, LD652 thatis permissive for both viruses and T-ni03 that is permissive for MIDNV only, as markers to distinguish these phenotypes. The data obtained  after transfection of the different viral chimerae in these cells showed that neither the coding sequences nor the viral origin of replication were responsible in controlling the virus tropism. The transfer of the MIDNV VP promoter into GmDNV background extended the tropism ofGmDNV to T-ni03 cells. However, the full expression ofGmDNV in these cells needed also the trans-activation ofthe viral NS proteins. These data showed that the in vitro tropism ofthese densoviruses is controlled bythe two viral promoters ofNS and VP, respectively, in contrast to the allotropie determinants ofvertebrate parvoviruses.

The third objective  was to study in vitro the safety of densoviruses  MIDNV and GmDNV as a first step before proceeding towards homologation (regulatory standards for biological control agents). Both infection by virus preparations and transfection by the viral infectious clone were carried out on severa!mammalian cell types, COS-7, 293 T and  PT as weil as L929. Using indirect immunofluorescence  assays, no virus replication could be detected in mammalian cells. However, in insect cells, virus antigens were readily detected after infection and transfection. Molecular studies were also carried out to define the level at which the virus replication was blocked. These tests were performed specifically  with
L929 cells since they were previously reported to be permissive for densovirus infection. Virus transcription in these mammalian cells was not detected even after the transfer of the virus genome into the cells by transfection. Viral DNA could integrate into L cell chromosomes after transfection but not after infection, which indicates a blockage in the virus DNA transfer to the nucleus. However, after integration no viral transcription could be detected. Thus, our results contradict the previous reports about the permissiveness of mammalian cells to densoviruses.

The collective data presented in the current thesis contribute to the understanding of the biology of densoviruses. These viruses use unique expression strategies compared to other members of Parvoviridae. They do not infect mammalian cells in culture, and hence, in vivo homologation tests that are required before proceeding to field applications are
expected to be successful.


identifier: Faust, René Okamba Ondzia  (2009). Évaluation du potentiel vaccinal d'un adénovirus recombinant non réplicatif exprimant l'adhésine P97 de Mycoplasma hyopneumoniae contre la pneumonie enzootique porcine  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 208 p.

subject: vaccin

abstract:
Mycoplasma  hyopneumoniae est l'agent étiologique de la maladie connue sous le nom de  pneumonie  enzootique  porcine  (PEP)  qui,  de  part  ses  effets  néfastes  sur  les performances  zootechniques,  cause  des  pertes   économiques  considérables  dans l'industrie porcine à travers le monde. Les stratégies de lutte contre M. hyopneumoniae comprennent des mesures non vaccinales (antibiothérapie et mesures d'hygiènes) et la vaccination. Toutefois, malgré leur application, on ne parvient toujours pas à réduire la prévalence	de   l'agent   pathogène	dans	les   élevages.   Les	vaccins   disponibles commercialement sont essentiellement de type bactérine c'est-à-dire fabriqués à partir de souches inactivées du mycoplasme. Il est admis que ces vaccins améliorent les performances zootechniques (par exemple  le gain de  poids moyen quotidien et  la conversion  alimentaire)  et   réduisent	les	   lésions  pulmonaires	causées  par   M hyopneumoniae.  Ces vaccins présentent cependant des limitations : ils n'éliminent pas l'agent pathogène dans les tissus pulmonaires et ne protègent pas les porcs contre les infections subséquentes.
M. hyopneumoniae  initie sa pathogénèse en s'adhérant intimement aux cellules épithéliales respiratoires. Puisque l'infection est restreinte au niveau des voies respiratoires, il est probable qu'un vaccin stimulant une réponse immunitaire locale, à la fois humorale et à médiation cellulaire, puisse être effectif contre l'agent pathogène. Ainsi, nos travaux s'inscrivent dans cette démarche et visent à développer un vaccin sous-unitaire contre M.  hyopneumoniae.  Pour ce faire, la portion C-terminale de la protéine adhésine P97 (P97c) a été considérée comme antigène vaccinal car elle médie l'adhérence du microorganisme aux cellules épithéliales ciliées du tractus respiratoire. Un adénovirus Humain de sérotype 5 (AdV5) a été considéré comme vecteur de la P97c pour son fort tropisme pour les cellules du tractus respiratoires. De plus, ce vecteur est aussi connu pour sa capacité à induire, contre le transgène, une réponse immunitaire de type Thl  (à médiation cellulaire) et de type Th2 (humorale) tant au niveau systémique que des muqueuses respiratoires.
Après avoir construit  notre vecteur vaccinal, 1 'AdV5  recombinant  non réplicatif exprimant  la P97c (rAdP97c),  l'expression  de la P97c à tout abord été confirmée in vitro par immunofluorescence  indirecte et immunobuvardage  de type Western. Par la suite,  nous  avons  démontré  que  l'immunisation   des  souris  avec  rAdP97c  par  voie intranasale et intramusculaire  induisait  une réponse en anticorps anti-P97c, composée d'IgGl et d'IgG2a,  à la fois au niveau systémique et des muqueuses  respiratoires. De plus, cette réponse était capable d'inhiber  la croissance de M. hyopneumoniae in vitro. Suite à la vaccination des porcs par voie intranasale avec le rAdP97c et à l'infection  par la souche  virulente  232  de M. hyopneumoniae, nous  avons  constaté  que  le  vecteur rAdP97c induit une réponse immunitaire spécifique contre la P97c. En effet, une forte réponse  humorale  a été  détectée  au  niveau systémique,  dans  les salives  et  dans  les lavages  broncho-alvéolaires  (LBAs). Une réponse à médiation  cellulaire  caractérisée par la sécrétion  d'INF-y  a également  été révélée. Il a été intéressant  de noter que les porcs vaccinés avec le rAdP97c présentaient une réduction significative des lésions pulmonaires macroscopiques et microscopiques ainsi qu'une  diminution  de la quantité de  1 'agent   pathogène  dans  les  LBAs  et  les  poumons  par  rapport  aux  porcs  non vaccinés/infectés. Toutefois, le rAdP97c s'est avéré moins protecteur que le vaccin commercial  « Suvaxyn®  MH-One ». Ce dernier s'est  montré également  plus efficace que le vecteur rAdP97c  en termes d'amélioration  du gain de poids moyen quotidien (GMQ) et de prévention de la réponse inflammatoire causée par M. hyopneumoniae.
En conclusion, nos travaux ont montré que notre système vaccinal, rAdP97c, a un effet partiellement protecteur comparativement  au vaccin commercial qui lui est multi antigénique.  Néanmoins,  ce système  pourrait  représenter  une alternative  intéressante aux vaccins actueils, si l'on  y ajoute d'autres  antigènes immunodominants  de l'agent
pathogène.


identifier: Fernandes, Sandra  (2011). Comparaison des déterminants génétiques de l'allotropisme in vitro des souches prototypes du Parvovirus Porcin  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 238 p.

subject: ppv

abstract:
Le parvovirus porcin (PPV) est un virus ubiquitaire responsable de diverses pathologies de reproduction porcine regroupées sous l'acronyme SMEDI (mortinatalité, momification foetale, mort embryonnaire, et infertilité). Ce syndrome est une source importante de pertes économiques dans les élevages de porcs domestiques et peut faire des ravages dans les populations sauvages de sangliers. Malgré les nombreuses années écoulées depuis son identification, les mécanismes qui régissent l'allotropisme in vivo et in vitro de ce virus demeurent obscurs. Le cycle infectieux du PPV n'a été que très peu étudié au niveau cellulaire, la plupart des informations concernant sa réplication étant dérivées des travaux sur des virus qui lui sont apparentés.

Afin de mieux définir les mécanismes impliqués dans le contrôle de l'allotropisme du PPV in vitro, nous avons établi et caractérisé un système modèle basé sur la comparaison des deux souches prototypes de ce virus; soit l'une des souches vaccinales, NADL-2, et l'une des souches hautement virulentes chez l'animal, Kresse. Ces souches diffèrent au niveau de leur séquence par 13 nucléotides répartis sur l'ensemble du génome et par la présence d'une répétition de 127 nucléotides en aval des régions codantes. Le système modèle est composé d'une lignée de cellules porcines hautement susceptibles à l'infection par le PPV et de trois lignées de cellules bovines, établies à partir d'une culture primaire. Ces lignées démontrent divers phénotypes (permissif, semi permissif ou restrictif) suite à l'infection par l'une ou l'autre des souches virales. Dans la lignée permissive porcine, l'efficacité de la réplication du génome diffère entre la souche vaccinale et la souche pathogène du PPV.

Dans un premier temps, nous avons comparé diverses étapes du cycle de réplication afin d'identifier celles qui étaient déterminantes pour l'allotropisme du PPV. Nous avons observé que la réplication virale était bloquée au niveau des étapes précoces lors des infections restrictives et que l'efficacité des étapes intermédiaires et tardives du cycle infectieux influençait le degré de permissivité et donc la productivité finale de l'infection.

Dans un deuxième temps, nous avons développé un système de clonage permettant la manipulation du génome du PPV afin de générer une banque de souches chimériques. La comparaison de l'infection par ces chimères a ensuite permis de cibler les différences génétiques  qui  modulent  l'efficacité  de  la  réplication  virale  et  qui  sont impliquées dans le contrôle l'allotropisme in vitro. Ainsi, une interaction entre la séquence répétée  et  un  fragment  du  gène  des  protéines  structurales altère  l'efficacité  de  la production virale. Enfin, un essai de compétition entre les différentes chimères a permis de cibler des éléments génétiques agissant à titre de déterminants ultimes de l'efficacité de la réplication du PPV.

Somme toute, cette caractérisation de divers déterminants de l'allotropisme et de l'efficacité de la réplication virale constitue une étude de base qui permettra ensuite l'étude plus détaillée des interactions du PPV avec la cellule hôte.


identifier: Flandin, Jean-Frédéric  (2007). Rôles des Toll-like receptors (TLRs) dans la reconnaissance des promastigotes de Leishmania donovani par le macrophage  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 236 p.

subject:
leishmania donovani
macrophage
promastigote
tlr3
recepteur

abstract:
La leishmaniose  représente  une maladie  grave et endémique  dans plusieurs pays en voie de développement et, à ce titre, représente un grave problème de santé publique.    La forme  la plus grave de cette  parasitose, la leishmaniose  viscérale, est causée  par le parasite L. donovani.   Le macrophage, cellule-hôte de ces parasites, joue un rôle primordial dans la réponse immunitaire, et l'interaction  entre les promastigotes de Leishmania et le macrophage est une étape clé pour le déroulement de l'infection.
Alors que les promastigotes de L. donovani pénètrent silencieusement dans les macrophages   naïfs   afin   d'établir    l'infection,    les  macrophages   activés   à  l'IFN-y déclenchent   une  réponse  immunitaire  permettant  le  contrôle  des  parasites.     Cette observation  nous a permis d'émettre  l'hypothèse qu'un  récepteur de recotmaissance du promastigote deL.  donovani est induit par l'IFN-y.  Dans la première publication, nous avons démontré que TLR3 est le seul TLR dont l'expression est induite par l'IFN-y.  De plus, nous avons démontré que ce récepteur est primordial pour la sécrétion de NO et de TNF-cx.  par  les  macrophages  activés  à  l'IFN-y  en  réponse  aux  promastigotes  de L. donovani,   et  donc  dans  l'activité  leishmanicide  de  ces  cellules.     Finalement,  nos résultats confirment le rôle de TLR2 dans la reconnaissance des unités répétées des phosphoglycans  de Leishmania et l'implication des TLRs dans l'internalisation des promastigotes.
En  réponse  à  un  pathogène,   les  macrophages   induisent  1'expression  de plusieurs gènes importants pour le contrôle de 1'infection.  Dans le deuxième papier présenté, nous avons étudié 1'effet d'une stimulation de L.donovani sur 1'expression des différents  TLRs.  Nos résultats démontrent que les promastigotes induisent l'expression de TLR3 suite à leur phagocytose  par les macrophages  naïfs.   En plus, 1'utilisation  de divers  signaux  phagocytiques   démontre  que  l'induction  de  TLR3  fait  partie  d'un mécanisme général du macrophage -découlant de la phagocytose, permettant a1ns1 d'identifier TLR3 comme un« senseur» de particules ingérées.
Les travaux  réalisés  lors de ces études  démontrent  que TLR3  est important pour identifier les particules ingérées.   Ainsi, son rôle dans la reconnaissance et le déclenchement d'une  réponse immunitaire adéquate envers L. donovani est primordial.


identifier: Fortin, Marie-Hélène  (2011). Stratégies technologiques utilisées pour améliorer la viabilité et la rétention de bactéries probiotiques dans le fromage cheddar frais.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 185 p.

subject: bifidobacterium encapsulation polymere immobilisation cellulaire microencapsulation

abstract:
La population mondiale devient de jour en jour plus conscientisée aux problèmes que peuvent entraîner de mauvaises habitudes de vie comme un manque d'exercices ou une alimentation riche en gras et sucres, mais pauvre en tïbres et vitamines. Les gens ayant connaissance de ces enjeux deviennent souvent plus consciencieux dans leurs choix de vie et plus critiques sur ce qui se retrouve dans leur assiette.

Les  produits  nutraceutiques  répondent  à cette  demande  croissante  de  « produits santé »,  en  garantissant  des effets  bénéfiques  sur  une ou  plusieurs  fonctions  du corps, ce qui aura comme effet d'améliorer  l'état de santé et le bien-être et/ou de diminuer le risque de maladie (Mattila-Sandholm  et Saarela, 2003). Plusieurs types d'aliments  peuvent être retrouvés en tant que produit nutraceutique; dans le cadre de  cette  étude,  nous  nous  sommes   penchés  sur  le  cas  du   fromage  cheddar supplémenté en probiotiques.

La problématique  retrouvée dans le fromage est que les probiotiques  ne sont pas retenus dans la matrice fromagère à de hauts niveaux, mais sont plutôt perdus dans le lactosérum  tout au long de la fabrication.  De plus, les essais déjà  réalisés  par d'autres  équipes de recherche démontrent que les probiotiques ne résistent pas bien aux  périodes  de conservation,  à cause  de  l'action  des ferments  lactiques,  de  la salinité, de l'acidité et de la présence d'oxygène  dans le fromage.

Pour tenter de résoudre ces problèmes, différentes  approches ont été testées dans cette étude :  l'ajout  des  probiotiques  à différents  moments  lors de  la fabrication fromagère, un changement dans le taux d'inoculation, l'entreposage  des fromages sous  formes  de  grains  et  de  blocs  et  la  microencapsulation   des  cellules.  La microencapsulation  devrait  permettre  d'augmenter   la  rétention  des  probiotiques dans le caillé, de même que la viabilité des bactéries tout au long de la durée de vie du fromage, en plus d'améliorer  la résistance aux enzymes digestives et à la grande acidité de l'estomac. Des résultats concluants  pour l'une  ou l'autre  des stratégies technologiques testées  permettraient donc  d'avoir des  pistes  de solutions pour  des entreprises alimentaires qui  seraient  aux  prises  avec  des  problèmes  de  viabilité  de souches   probiotiques  plus  sensibles  au  cours  de  la  fabrication  ou  conservation d'aliments.

La souche  probiotique utilisée  pour les essais  a été sélectionnée selon  sa sensibilité à diverses  conditions retrouvées  dans  le fromage : Bifidobacterium longum  15708. Les stratégies technologiques testées  n'ont  pas permis  d'améliorer  suffisamment la viabilité  de  la  souche  au  cours  de  la  production et  de  l'entreposage du  fromage cheddar  pour  permettre l'utilisation commerciale à cette  fin. Les défis  à relever  au cours  de cette  étude  ont  démontré que  le choix  de la souche  probiotique pour  les industries   alimentaires  est  très  important,  puisque   la  survie   des  bactéries   dans l'aliment  peut  être  très  difficile,  surtout   dans  le  cas  d'une souche   probiotique sensible aux conditions retrouvées dans l'aliment.


identifier: Francoeur, Eugène  (2008). Caractérisation des domaines de liaison de l'Endothéline-1 sur le récepteur ETa au moyen de sondes mono- et bisubstituées avec un dérivé photoréactif  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 77 p.

abstract:
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L'endothéline  (ET), un des plus puissants agents vasoconstricteurs connus à ce jour est un peptide de 21 acides aminés porteur de deux ponts disulfures caractéristiques. Ce peptide agit via les récepteurs ETA (ETAR) et ET8 (ET8R) au niveau de plusieurs organes afin d'induire des réponses telles que la constriction de vaisseaux sanguins et de 	muscles    lisses    ou    la    sécrétion    hormonale.    Ce    peptide-hormone    est vraisemblablement impliqué dans diverses pathologies comme  l'hypertension, l'infarctus  du myocarde et l'asthme.  Beaucoup de recherches sont donc menées afin de comprendre les mécanismes d'actions,  à l'échelle  moléculaire, du système de l'endothéline et des évènements qui sont à l'origine  de disfonctionnement relié à ce peptide.

Afin d'en  apprendre davantage sur la nature de la liaison de l'ET-1  avec le ETAR, nous avons procédé à des essais de marquage par photoaffinité de ce récepteur et pour y parvenir nous avons appliqué une stratégie de synthèse de l'ET-1 établie à partir des données de structure-activité recueillies dans la littérature. Nous avons ainsi produit des analogues présentant  un ou deux résidus photoactivables p-benzoyl-phenylalanine (p-Bpa) d'orientation Lou  Den  position 4 et/ou 12. C'est à la suite de caractérisations physiques 	(CLHP   et 	MS) 	et 	biologiques 	(essais 	de	liaison	et 	bioessais
pharmacologiques) de  ces  sondes  que  nous  en  sommes  venus  à sélectionner  les

peptides [L-Bpa4, Nle7]hET-1, [Nle7, L-Bpa 12]hET-1 et [L-Bpa4, Nle7  L-Bpa 12]hET-1 pour nos travaux. La stéréochimie s'est  révélée déterminante puisque l'incorporation de D-Bpa en position 4 et/ou 12  a eu un impact néfaste au niveau de la liaison au récepteur, ou de l'activation de celui-ci.

L'incorporation  d'un  isotope radioactif (1251) sur la tyrosine-13 de la sonde a permis d'assurer  le suivi de celle-ci lors des différentes étapes menant à la production et la caractérisation du complexe de photomarquage constitué d'une  des 3 sondes et du ETAR. A l'aide  d'expériences  de clivage du complexe par digestions chimiques ou enzymatiques, il a été possible d'identifier  le domaine de liaison de l'ET-1  dans le récepteur. Ainsi, la sonde [L-Bpa 4,  Nle7]hET-1 semble établir un point de contact au niveau du segment His66-Trp146 Ensuite, la réaction de marquage par photoaffinité de ce récepteur s'est  effectuée aux abords de la région délimitée par les acides aminés Phe147 et Lys166 du ETAR lorsque qu'était  utilisé l'analogue  [Nle7,  L-Bpa 12]hET-l. . Enfin, ces expériences impliquant la sonde bivalente [L-Bpa4,  Nle7,  L-Bpa12]hET-1 ont permis  d'établir que le site de liaison était situé à l'intérieur de la séquence Gly42- Arg183 du récepteur. Ces résultats laissent supposer que le phénomène de liaison de l'ET-1  au niveau du ETAR implique les domaines transmembranaires (TM) 1, II, III ainsi que la première boucle extracellulaire (EC). Ces résultats se veulent complémentaires aux données mises de l'avant par des expérimentations impliquant l'utilisation d'ETAR  mutés ou chimères ou d'analyses  par modélisation moléculaire qui offrent une appréciation indirecte ou virtuelle du phénomène.


identifier: Frouin, Héloise  (2009). Contamination et impact immunologique chez trois espèces de phoques du Saint-Laurent (Phoca Vitulina, Halichoerus Grypus et Phoca Groenlandica)  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 281 p.

subject: pbde bpc hap immunotoxicologie toxicite toxicologie organoetain immunologie contaminant

abstract:
L'utilisation croissante de substances polluantes par l'homme, leur présence persistante dans l'environnement marin malgré leur réglementation et leurs effets sur les organismes aquatiques constituent l'un des problèmes majeurs du XXIème siècle. Pour étudier l'impact des contaminants sur le système immunitaire des pinnipèdes, il était nécessaire dans un premier temps de mieux comprendre l'immunologie et l'exposition aux contaminants chez différentes espèces de phoques comme les phoques communs (Phoca vitulina), gris (Halichoerus grypus) et du Groenland (Phoca groenlandica).
Dans cette thèse nous avons déterminé que des changements en lien avec l'âge se produisaient dans le système immunitaire inné des pinnipèdes. Tandis que l'activité et l'efficacité phagocytaire augmentaient durant la lactation chez les phoques nouveau-nés, suggérant un système immunitaire compétent; chez les femelles adultes de phoque commun,  l'activité  phagocytaire  diminuait  avec  l'âge. Ces  résultats  suggèrent  que
dépendamment de l'âge, la capacité des organismes à répondre aux pathogènes varie. De plus, des expériences réalisées in vitro chez un phoque gris ont permis de démontrer que les réponses différaient selon que les lymphocytes T provenaient du thymus, d'un
ganglion lymphatique ou du sang, permettant d'envisager de déterminer une action spécifique d'un polluant donné sur la prolifération des lymphocytes T d'un tissu cible.
Dans  un  deuxième  volet,  un  modèle  biologique  fut  choisi,  le  phoque  du
Groenland, pour étudier le transfert des contaminants entre une mère et son jeune
durant la lactation. Nos résultats démontrent que le transfert des pesticides, PBDE et BPC sont régis par leur liposolubilité, et qu'un transfert sélectif se produit durant la production du lait conduisant à des patrons de contaminants différents entre la mère et son jeune. De plus, l'analyse de PBDE dans le gras et le sérum des trois espèces de phoques  de  l'Estuaire  et  du  Golfe  du  Saint-Laurent ont  mis  en  évidence  que  les nouveau-nés provenant de l'Estuaire sont cinq fois plus contaminés que ceux du Golfe. Finalement, nous  avons  établi  qu'il  est  envisageable  d'utiliser  les  isotopes  stables d'azote  pour  évaluer  le  transfert des  butylétains  à  travers  le  réseau  trophique  de l'Estuaire du Saint-Laurent.
Dans un troisième temps, nous avons mis en évidence lors de travaux in vitro
réalisés chez le phoque commun que les fonctions immunitaires testées (phagocytose, prolifération  lymphoblastique  et  activité  cytotoxique  des  cellules  NK)  étaient  plus touchées par l'exposition aux butylétains chez les adultes que chez les nouveau-nés. Cependant, en présence  de  congénères de  PBDE la  flambée oxydative, le  niveau intracellulaire de thiols et l'activité et l'efficacité phagocytaire présentaient des réponses similaires  entre  les  adultes  et  les  nouveau-nés  et  une  lignée  cellulaire  issu  d'un lymphome B de phoque commun. Avec cette dernière, nous avons pu démontrer qu'à des niveaux environnementaux (retrouvés dans le sang des pinnipèdes), le B[a]P, le sélénium, le vanadium et l'arsenic induisaient aussi bien des effets immunotoxiques (diminution de la prolifération lymphoblastique et de la phagocytose) que génotoxiques (induction de micronuclei).
Dans l'ensemble, nos travaux suggèrent que le système immunitaire du phoque commun peut-être affaibli suite à l'exposition permanente aux contaminants retrouvés dans son environnement. De plus, il ressort que les nouveau-nés sont exposés aux contaminants durant un stade critique de leur développement.


identifier: Fu, Yan  (2008). Characterization of the receptors involved in adrenomedullin clearance in the lungs  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 202 p.

subject: adrenomedulline poumon calcitonine

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.
Adrenomedullin  (AM),  a  52-amino acid  peptide,  is  mostly  produced  in  adrenal,  lung, kidney, and heart tissues. The  main physiological action  of AM appears  to be as a potent vasodilator. So  far,  AM  was  shown   to  bind  to  two  different   receptor  subtypes, AM1. produced   by  the  association  of  the  calcitonin-receptor-like  receptor   (CLR)   and   the receptor-activity-modifying protein  2 (RAMP2)  and  AM 2,   obtained  by  linking  CLR  to RAMP3.  No significant   physiological   differences upon  activation  of the AM1  and  AM 2
receptors   were  identified, thus  the  functional   significance of  this  receptor  redundancy

remains   unclear.   Receptor   binding   studies   revealed   that  the  greatest   density   of  AM binding  sites  in a variety  of rat tissues  was in the heart and lungs. Hence,  this peptide  is weil  designed   to  be  a  lead  compound   for  the  development  of  imaging radiopharmaceuticals of these organs.

Currently, only one agent  is used in clinical  imaging of the pulmonary  circulation: 99mTc macroaggregated  albumin   (MAA).   However,   this   agent   is  lm•ger  than   most  small pulmonary  vessels. As a result, the central  problem about MAA in the clinical imaging application  is its  limited  sensitivity to  investigate  small  vascular  defects.  To  provide  a more powerful  tool for diagnostic purposes  and for monitoring  the treatment  responses  in the 1ung  system,   we  proposed
a  99mTc de1ivery  system   with 1ung  specifiC   targeting

ligands.   The   proposed   system   maximizes  the  uptake   of  the  99mTc-complex   by  the pulmonary  system and enhances the influx as weil as retention of the complex  in the Jung. This  delivery  system  includes  three  main components: 99m-technetium, a carrier  of the
99mTc, and a targeting  moiety. Thus,  we have designed  a series of AM derivatives and the

results of our evaluations showed  that 99mTc-linear AM, a system  that utilizes 99mTc as the radiation  source  and  AM  as a carrier  and  a targeting  moiety  (ligand),  displayed  a clear image  of  the  pulmonary circulation  through  AM  receptors  that  appear  to  be acting  as clearance receptors.

To pursue our study,  we have performed  binding  assays  to characterize AM binding sites in dog  Jung homogenates. First,  we observed  that  the  non selective  agonist  AM  bound with  high  affinity,  displaying   two  binding  sites.  Moreover,  competition  bi nding  assays using      5 1-AM   and   somc    unlabeled    ligands    showed    the    following    rankin g   fo r displacement:  AM  >  AM( 13-52)  >  CGRP  ;:::    AM2  ;:::   AM(22-52) ;:::    AM2( 16-47)    >
CGRP(S-37) >AMY. Thus,  these  results strongly  suggest  that the AM binding site found in the dog lungs is mainly the AM 1   receptor subtype.

Receptor   specifie   imaging   provides   a  powerful   asset   for  clinical   applications  and biological  research.  Since  AM is a long peptide  with 52 amino  acids,  further studies  are pursued  using  AM  fragments of  various  lengths.  By  determining the amino  acids,  the minimal  peptide  fragment,  and some  relative secondary  structures  of AM retaining  good affinity for the AM receptors in the dog Jung, it will facilitate the identification of the pharmacophores underlying AM 1   binding  affinity  and specificity. Those  information  are essen ti al for the discovery  of a selective  probe for AM 1   receptors.  Furthermore, they will help in the development of better and smaller  Jung-specifie diagnostic  and/or  therapeutic
molecules  after radiopharmaceutical optimization.


identifier: Gabriel, Christelle  (2010). Induction de "Neutrophil Extracellular Traps" par le promastigote de Leishmania chez le neutrophile humain  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 147 p.

abstract:
Le neutrophile est un élément clé de la réponse immunitaire innée. L'un des mécanismes par lesquels  il élimine  les micro-organismes  de l'hôte  est  la formation  de
« Neutrophil Extracellular Traps » (NETs).

Une fois inoculé dans l'organisme hôte, le promastigote  de Leishmania  interagit rapidement  avec le neutrophile. Les résultats obtenus au cours de nos travaux ont montré que  les promastigotes  de  L. donovani  et de  L. major  induisent,  à partir du  neutrophile humain, le relargage de NETs constitués  d'ADN  et d'élastase. Au cours de nos travaux, nous avons également  mis en évidence  que cette induction est rapide et dépend à la fois de la quantité de promastigotes  et du temps d'incubation. De plus, les NETs forment des structures  très  filamenteuses  qui  capturent   Leishmania  sans  l'éliminer. En  effet,  nos résultats  suggèrent  que  le lipophosphoglycan  (LPG), abondamment  présent  à la surface des promastigotes  protège Leishmania de l'activité microbicide des NETs.

Les résultats obtenus ont également révélé que cette induction nécessite un contact entre  le  neutrophile  et  le  parasite  et  qu'elle  est  indépendante  de  l'opsonisation de  ce dernier.  De plus, les deux facteurs de virulence de Leishmania  les mieux caractérisés,  le LPG et la protéine GP63, n'ont  pas de rôle prépondérant dans ce phénomène.


identifier: Marceau, Gabriel  (2010). Immunosuppression transitoire induite par un coronavirus murin dans un modèle animal de la sclérose en plaques  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 323 p.

subject:
mhv
demyelisation
reponse immunitaire

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Les coronavirus  forment  une famille  très répandue  de virus enveloppés  au génome d'ARN et ils sont associés à une variété d'infections respiratoires, hépatiques, entériques et neurologiques chez plusieurs espèces animales. Chez les souris susceptibles, le coronavirus murin (MHV) déclenche une maladie inflammatoire démyélinisante partageant plusieurs caractéristiques  avec la sclérose en plaques (SP). Cette maladie inflammatoire du système nerveux central  (SNC) est caractérisée  par l'apparition  de plaques de démyélinisation  qui chez les souris du moins, requiert  l'établissement  d'une  infection persistante du SNC. Il a été occasionnellement  rapporté que plusieurs souches  du MHV, dont  MHV-A59, peuvent initier une  immunosuppression  qui en retour  pourrait  bien  être  importante  dans l'établissement de cette infection persistante. Malheureusement,  bien peu de détails ont été publiés sur l'immunosuppression  induite par le MHV, particulièrement  de la souche A59. Nous avons donc entrepris l'étude des mécanismes sous-jacents à ce processus.

Des souris C57BL/6 ont été inoculées par voie intracérébrale  (i.e.) avec MHV-A59. La dose de 450 unités formatrices de plages cytopathique  (UFP) a été sélectionnée pour sa capacité à induire des lésions de démyélinisation du SNC accompagnées d'infiltrations cellulaires et d'activation  de cellules gliales (macrophages  et microglies). L'infection aiguë s'est accompagnée d'une diminution marquée de la prolifération dès 4 jpi avec un minimum à 7 jpi et un retour progressif à la normale en phase chronique  dès 14 jpi. Au moment de cette immunosuppression  les lymphocytes T (marquage  CD3, CD4 et CDS) et B (CD19) étaient  en  nombre  réduits,  mais  représentaient  un  pourcentage  normal  des  splénocytes, indiquant une diminution du nombre des autres splénocytes. La réaction proliférative des splénocytes   de  souris  infectées  a  été  diminuée  ou  faible  lorsque  ces  cellules  étaient stimulées  par des  antigènes  viraux,  la concanavaline  A (ConA)  ou  l'anticorps  anti-CD3 (aCD3)   conjointement   avec  l'anticorps  anti-CD28   (aCD28).   Seule  la  stimulation   par l'aCD3  conjointement  avec  I'IL-2rh, ou  la combinaison  phorbol  12-myristate  13-acétate (PMA) et ionomycine (lono) ont produit une prolifération normale.

La  diminution   de  prolifération  est plus importante   pour les splénocytes  et les lymphocytes T, provenant  de  la rate ou  infiltrant le SNC, chez les souris  infectées  avec 450 UFP que celles  infectées avec 100 UFP. La  stimulation  en  présence  d'un  nombre croissant de cellules dendritiques ne rétablit pas non plus une prolifération normale. La stimulation  de splénocytes  de souris  transgéniques  au  niveau de  leur récepteur T(souris 2.1 02tg),  infectées  n'a  pas  non  plus  produit  une  prolifération  normale.  Pris  dans  leur ensemble ces résultats suggèrent que l'infection induite une anergie transitoire.

L'absence d'infection  des lymphocytes T par MHV-A59 a été vérifiée in vitro par la quantification   de  la  transcription   d'un  gène  viral  (N)  et  l'anergie  transitoire  suggérée pourrait  donc  être  le fait  des cellules T régulatrices  qui  augmentent  relativement  peu, à l'exception de dans les ganglions lymphatiques cervicaux et dans le SNC, alors qu'une lymphopénie a été détectée en parallèle. La quantification  de l'ARNm par RT-qPCR et des cytokines  par  « protein  array » à  la  rate  exclut  une  augmentation   de  l'IL-l 0  comme mécanisme. Par contre, la transcription accrue du TGF-P1 offre un mécanisme probable de l'immunosuppression. Cependant,  aucun  accroissement  de  sécrétion  du  TGF-P1  n'a  été détecté ni à la rate, ni dans le sérum, ni dans le surnageant de cellules stimulées in vitro. Par contre des cellules Tet d'autres splénocytes provenant des souris infectées contiennent plus de TGF-P1 que les cellules de souris témoins.

Ces  résultats  sont  compatibles   avec  un  défaut  de  production   de  I'IL-2  par  les cellules T activées suite à l'infection. Le récepteur  viral, CEACAM1a, capable, du moins chez l'humain, d'inhiber la sécrétion  d'IL-2 et la  prolifération cellulaire, pourrait  être impliqué. La cible de ce récepteur, la protéine kinase de 70 kilodaltons associée à la chaine zêta (Zap70),  est  impliquée  dans  la maturation  des  lymphocytes T et  le signal  du TCR. Cette immunosuppression  transitoire, mais efficace pourrait permettre au virus d'établir une infection  persistante qui est en retour importante  dans  l'établissement  d'un  processus
immunitaire menant à la démyélinisation du SNC.


identifier: Gauthier, Céline  (2005). Sécrétion de la xylanase B par les systèmes sec et tat chez streptomyces lividans  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 138 p.

subject: streptomycete xylanase

abstract:
Les streptomycètes sont des bactéries filamenteuses et saprophytes du sol qui produisent plusieurs enzymes extracellulaires telles les xylanases qui dégradent le xylane, un constituant de l'hémicellulose, afin de générer des oligoxylosides de petite taille qui servent de source de carbone pour leur croissance. Chez les bactéries, les protéines sont sécrétées, entre autres, par le système Sec (General Secretory Pathway) qui exporte des protéines non repliées et par le système Tat (Twin Arginine Translocation) qui transporte des protéines déjà repliées. Une des différences entre les systèmes de sécrétion, se situe au niveau du peptide signal.

La xylanase BI (XlnB1) de Streptomyces lividans est une protéine composée d'un domaine catalytique n-terminal et d'un  domaine d'attachement au xylan c-terminal. La bactérie sécrète la XlnB1 et également la XlnB2 qui correspond au domaine catalytique de la XlnB1 privé du domaine d'attachement au xylan. Ces deux formes de la xylanase ont la même activité sur le xylan. L'enzyme est sécrétée via le système Sec et la XlnB1 est mieux sécrétée que la XlnB2. ll a été constaté que la XlnB2 possède 80% d'identité avec la XlnC laquelle est sécrétée exclusivement via le système de sécrétion Tat. Afm d'examiner si la XlnB1 et la XlnB2 pouvaient aussi être sécrétées par le système Tat, la séquence signal de la XlnC a été fusionnée respectivement à x/nB1 et xlnB2. La XlnB1 et la XlnB2 ont été sécrétées par le système Tat mais la XlnB2 a été davantage sécrétée que la XlnB1. Puisque la XlnB1 et la XlnB2 pouvaient être mieux sécrétées via les systèmes Sec et Tat respectivement, une copie de xlnBJ fusionnée à une séquence signal de type Sec et une copie de xlnB2 fusionnée à une séquence signal de type Tat ont été insérées sur un même plasmide sous le contrôle du promoteur de x/nA. Le transformant a produit une activité xylanasique correspondant approximativement à la somme des activités des souches individuelles produisant la xylanase par le système Sec ou par le système Tat. Ceci indique que dans cette souche recombinante, les deux systèmes de sécrétion sont fonctionnels et qu'ils  n'interfèrent  pas entre eux. En assumant que la protéine à être sécrétée peut être repliée correctement par les deux systèmes de sécrétion, 1'usage simultané des systèmes Sec et Tat procure un moyen efficace d'augmenter la production d'une protéine donnée.


identifier: Gauvin, Patrick  (2005). Effets d'un mélange de BPC sur la communication intercellulaire dans le foie chez le rat  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 88 p.

subject: bpc cancerogenese cancer carcinogene

abstract:
Les biphényls polychlorés (BPC) sont des carcinogènes fortement rejetés dans l'environnement, principalement dans les milieux aquatiques.   Depuis leur première utilisation en 1930, les diverses et multiples applications industrielles des BPC, de concert avec leur stabilité exceptionnelle, en font des produits considérablement bioaccumulables dans 1'environnement, car ils se dégradent difficilement. Ces polluants, dits épigénétiques, causent plusieurs effets biologiques chez les organismes vivants.  Le développement de cancer, par la modulation de la communication entre les cellules au niveau des jonctions lacunaires, en est un exemple.

Les travaux de ce mémoire visent à caractériser et à définir les effets d'un mélange de six congénères de BPC au niveau de la communication intercellulaire par l'étude de l'expression de la connexine 32 (Cx32) dans le foie de rats femelles. De plus, les travaux veulent caractériser l'impact du mélange de BPC sur la communication intercellulaire par les jonctions lacunaires et sur les protéines de ces jonctions intervenant dans cette communication, notamment par des analyses immunohistochimiques chez les lignées cellulaires MH1C1, MCF-7 et MCF-10A.

La sélection des BPC utilisés pour les études chez le rat Spragues-Dawley femelle se base sur des études épidémiologiques de consommateurs de poissons contaminés.  La durée des traitements des rats au mélange de BPC est de 41 et 90 jours, soit la durée typique d'une étude sous-chronique.  Cependant, les résultats présentés dans ce manuscrit ne reflètent que le traitement des rats avec le mélange durant 90 jours.  Une analyse des foies prélevés chez ces animaux a permis de déterminer par immunobuvardage de type Northern le niveau d'expression de la Cx32 des hépatocytes. Les résultats ont démontré une baisse significative de l'expression de l'ARNm de la Cx32 chez les hépatocytes des animaux traités quotidiennement durant 90 jours avec une dose totale de 3000 ug/kg (6 x
500 ug/kg) du mélange de BPC.

L'étude in vitro des effets du mélange de BPC sur la communication intercellulaire a été effectuée à l'aide  d'une  lignée d'hépatocytes  exprimant la Cx32 (MHICI)  et deux lignées de cellules mammaires exprimant la Cx43 (MCF-7 et MCF-1OA). Les résultats obtenus par la technique du «Scrape loading dye transfert» (SLDT) ont démontré une perte de communication pour les cellules mammaires saines MCF-IOA ayant subies une exposition au mélange de BPC.  Les analyses immunohistochimiques ont révélé que le mélange de BPC est en mesure de changer la localisation intracellulaire de  la  Claudine-!  et  de  la  Cx43,  deux  protéines  de  jonctions impliquées dans  la communication intercellulaire.	Les  résultats  démontrent  que  la  délocalisation des protéines de la membrane vers le cytoplasme de la cellule dépend de la dose du mélange utilisée.	Enfin,  les  résultats  suggèrent  que  le  mélange  de  BPC  peut  induire un changement du niveau protéique de la Cx43.   Les modifications épigénétiques de ces protéines entraînées par la présence du mélange de BPC dans les cellules hépatiques et mammaires semblent donc  venir  moduler  la  communication intercellulaire.	Ainsi, l'extrapolation des données mécanistiques recueillies dans ce travail, nous suggère que le
mélange de BPC étudié peut engendrer une cancérogenèse de type épigénétique.


identifier: Giroux, Martin  (2005). Phénotype, fonctions et développement de cellules NKT non restreintes par CD1D  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 187 p.

subject: cellule T nkt immunologie

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.

Une sous-population mineure de cellules T exprimant la molécule de surface CD56, un antigène marqueur des cellules NK, ont été classifiées comme étant des cellules NKT-Iike. Dans le sang périphérique humain ces cellules NKT, distinctes des cellules NKT classiques restreintes par CD1d, constituent environ
2 à  5 %  des cellules mononucléaires totales. Ces cellules CD3+CD56+  sont

majoritairement COB positives et expriment le marqueur CD45RO des cellules T mémoires.  La  plup rt  des  cellules  CD3+CD56+  expriment  aussi  d'autres récepteurs  de  type  NK  (NKR) tels  CD57, CD161, CD94/NKG2,  NKG2D  et CD244. L'acquisition de NKR par ces cellules T pourrait moduler les réponses cellulaires. L'expression de NKR activateurs pourrait réduire le seuil d'activation requis lors de l'engagement du TCR et favoriser la reconnaissance de cellules tumorales et leur élimination. D'autre part, l'expression de NKR inhibiteurs pourrait être associée à une résistance accrue à la mort par apoptose et augmenter  le  seuil  d'activation  requis  afin  de  réduire  la  cytotoxicité  non spécifique envers le soi.

Dans un premier article, nous avons démontré que les cellules CD3+CD56+ peuvent  recruter  plusieurs  types  de  cellules  du  système  immunitaire  inné (cellules NK, monocytes et neutrophiles). L'engagement du récepteur de mort Fas chez ces cellules NKT-like induit la sécrétion de chimiokines telles CCL5, CXCL1 et CXCL8. Ceci représente un nouvel exemple de signalisation non apoptotique par les récepteurs de mort puisque la sécrétion des chimiokines dépend de l'activité des caspases bien que ces cellules soient réfractaires à l'apoptose.
Le deuxième article nous a permis de démontrer que la reconnaissance de la chaîne alpha du co-récepteur COB par certains anticorps nécessite la présence de calcium. Cet effet est visible dans les analyses par cytométrie en flux  et  n'est  pas  dû  à   l'internalisation  du  co-récepteur  mais  est  plutôt

Finalement, dans le troisième article, puisque l'expression de NKR par des cellules T pourrait jouer un rôle important dans la tolérance ou la reconnaissance tumorale, cette population a été caractérisée en détail. Nous démontrons que les cellules  CD3+CD56+ peuvent  être  divisées  phénotypiquement  et fonctionnellement  en  2  sous-groupes  majeurs  définis  par  leur  niveau d'expression  de  CD3  et  de  CD94.  Ces  deux  sous-groupes   possèdent  des capacités  cytotoxiques  et prolifératives  différentes,  les  cellules  CD3élevéCD94+ étant plus actives dans les deux cas. Il est possible d'induire une différenciation in vitro de cellules CD94+ en cellules CD94- en engageant  le TCR, alors que la cytokine IL-15 accroît le contenu en perforine des cellules CD94-. L'analyse des
séquences    CDR3   du   TCR   démontre   que   les   cellules    CD3intCD94-  et

CD3élevéCD94+ sont phylogéniquement  reliées. Une corrélation inverse entre l'abondance  relative de cellules  NKT CD3+CD56+ et l'âge a été démontrée, ce qui pourrait  avoir  des  conséquences  dans  les processus  inflammatoires  et la lutte anti-tumorale. Certains résultats suggèrent que les cellules NKT pourraient être auto-réactives.

Ces travaux nous aurons permis d'identifier une participation majeure des cellules   NKT  non-classiques   dans   le  recrutement   de  cellules   du  système immunitaire inné suite à l'engagement de Fas ce qui représente  un lien entre le système  immunitaire  acquis  et inné. L'identification  de  deux  sous-populations ayant  une  expression   distincte   de  CD94  a  permis  de  mieux  comprendre l'ontogénie des cellules CD3+CD56+. Ce groupe de cellules NKT a probablement un rôle important à jouer dans la surveillance tumorale et les maladies inflammatoires.


identifier: Gonçalves, David  (2010). Propriétés pro-inflammatoires in vitro et in vivo des nanoparticules de TiO2  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 91 p.

subject: neutrophile inflammation dioxide titane

abstract: La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. L’utilisation des nanoparticules (NP) de dioxide de titane (TiO2) engendre des questionnements quand au risque à la santé des humains qui y deviennent de plus en  plus exposés. Nous avons entrepris des travaux qui nous permettent d’avoir une meilleure compréhension des propriétés inflammatoires des NP de TiO2. Nos résultats montrent que le TiO2  exerce des effets pro-inflammatoires in vitro puisqu’il est un important agoniste du neutrophile. En effet, les NP de TiO2 ont induit des changements morphologiques chez les PMN de façon concentration dépendante. La phosphorylation des résidus tyrosine, ainsi que des MAPK p38 et ERK 1/2,  induite par le TiO2 révèle également sont potentiel activateur.   Ces   NP   modulent   également   les   fonctions   du   PMN.   L’inhhibition concentration dépendante de l’apoptose et la production de cytokines suite à des expositions prolongées en sont la preuve. Nous avons également découvert que le TiO2 induit une infiltration leucocytaire de type neutrophilique et une production d’agents pro- inflammatoires in vivo   chez la souris à l’aide du modèle murin de la poche d’air. Collectivement, ces travaux ont permis de classer la NP de TiO2 comme étant pro- inflammatoire et ont également permis d’établir une approche expérimentale permettant dans le futur de caractériser les NP selon leur degré de potentiel inflammatoire.


identifier: Groleau, Marie-Christine  (2006). Protéines chaperonnes impliquées dans le repliement des protéines sécrétées par le système TAT chez Streptomyces Lividans  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 137 p.

subject: proteomique proteine tat

abstract:
Les  protéines  dont  le destin  est d'être  sécrétées  sont  synthétisées  sous  la forme  d'un précurseur qui possède à son extrémité N-terminale une séquence appelée peptide signal qui  est  clivé  lors  de  la sécrétion  pour  libérer  la  protéine.  La  majorité  des  protéines sécrétées par les bactéries le sont par la voie de sécrétion Sec. Cette voie déjà largement étudiée permet la sécrétion de précurseurs protéiques maintenus non repliés dans le cytoplasme. La voie Tat (twin-arginine translocation) est nouvellement étudiée et permet la translocation de précurseurs déjà repliés dans le cytoplasme. Les précurseurs Tat se distinguent  par  la  présence  d'une   séquence  signature  (S/T)-R-R-X-F-L-K   dans  leur peptide signal. Des protéines chaperonnes seraient impliquées dans le repliement des précurseurs Tat. En effet, les chaperonnes peuvent prévenir l'agrégation  et la dégradation de protéines sous conformation non-native et favoriser leur repliement.

Streptomyces coe/icolor est la bactérie possédant le plus grand nombre de substrats Tat parmi les 84 génomes  bactériens  étudiés, ce qui en fait un organisme  intéressant  pour l'étude  de ce système.  Plusieurs  enzymes  d'intérêt  industriel,  dont  les xylanases,  sont sécrétées  par Streptomyces lividans, une proche parente de S. coelicolor. La xylanase C (XlnC), une enzyme   exclusivement  sécrétée par le système Tata servi de modèle pour l'étude du système Tat chez S. lividans.

Pour  cette   étude,   il  s'agissait   de  purifier   le  précurseur   contenu   dans   la  fraction cytoplasmique en espérant purifier du même coup les protéines chaperonnes qui lui sont associées. Des expériences se basant sur l'affinité d'un précurseur pour sa chaperonne potentielle ont été effectuées. Trois techniques ont été testées soient la co immunoprécipitation  avec des anti-XInC et deux types de colonnes d'affinité  (xylanase C immobilisée   à  l'aide   d'une   queue   d'histidine   sur   colonne   HiTrap   et  xylanase   C immobilisée sur gel de sépharose activé au CNBr).

Plusieurs protéines ont été recueillies, séparées par SDS-PAGE  et identifiées par LC/MS. Les  protéines  pouvant  avoir  potentiellement  des  fonctions  de  chaperonnes   ont  été analysées  plus  en  détails.   Parmi  celles-ci  se  retrouvent  une  protéine  de  stress,  une peptidyl-prolyl  isomérase et une protéinase.  Un système double  hybride avec la yellow
.fluorescent protein (YFP) est présentement en construction afin de confirmer l'interaction entre la XlnC et les chaperonnes hypothétiques.

Des souches hyperproductrices. de deux peptidyl-prolyl  isomérases (CypA et CypB) ont également été construites afin de vérifier l'impact  de la surproduction de ces chaperonnes sur  la  sécrétion  de  la  XlnC  (Tat-dépendante)   et  de  la  XlnA {Sec-dépendante).  Une inhibition de l'activité  xylanasique est observée pour les deux systèmes de sécrétion, bien que les deux xylanases se retrouvent dans le surnageant de culture.


identifier: Guilbert, Cynthia  (2006). Expression et caractérisation de versions tronquées de la protéine majeure glycosylée de l'enveloppe (GP5) du virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin dans des vecteurs adénovirus  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 102 p.

subject: syndrome reproducteur respiratoire porc adenovirus

abstract:
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La   maladie   du   Syndrome   Reproducteur   et   Respiratoire   Porcin   engendre,   encore aujourd'hui, des pertes économiques considérables dans les élevages de porcs au Québec et  partout  à  travers  le  monde.    La  vaccination  reste  le  meilleur  moyen  de  contrôler différentes   infections   dans   les  troupeaux   dont   l'infection    au   virus   du   Syndrome Reproducteur   et  Respiratoire   Porcin.     Afin  d'éliminer  les  problèmes   tels  que  la réactivation virale de la souche de vaccination, les recherches s'orientent  de plus en plus sur des vaccins sous-unitaires.   Les travaux présentés dans ce mémoire sont les derniers travaux du laboratoire de feu Dr Serge Dea faisant partie d'un  projet plus vaste de développement d'un vaccin sous-unitaire.  Ce vaccin serait un adénovirus humain de type 5, réplicatifmais non disséminatif, ciblant la protéine majeure glycosylée de l'enveloppe (GP5).      Des  études  précédentes  ayant  démontré  que  l'apoptose   induite  par  la  GP5 compliquait  la production de vecteur adénovirus qui l'exprimait, notre objectif initial fut de   construire   des   versions   tronquées   de   la   GP5   afin   de   produire   des   mutants immunogéniques mais non-apoptotiques.   Pour faciliter cette étape, nous avions choisi de
produire  les mutants en fusion avec la GFP (Green  Fluorescent  Protein).    Nous avons alors observé que la fusion de la GFP à la GP5 (ORF5/GFPq) réduisait considérablement la caractéristique  apoptotique  de la protéine.   Donc cette protéine de fusion fut choisie pour la construction du vecteur adénovirus réplicatif.  Nous avons démontré qu'il  y avait une augmentation significative de 1'expression du transgène avec le vecteur réplicatif/non disséminatif par rapport au vecteur non réplicatif dans plusieurs lignées cellulaires.   Ceci nous amène à proposer que le vecteur réplicatif/non disséminatif pourrait stimuler une meilleure réponse immunitaire in vivo en combinaison avec une im   unisation génétique.