identifier: Bélanger, Hélène  (1999). Utilisation de vecteurs viraux pour l'expression dans la plante et l'étude de l'immunogénicité d'un épitope protecteur de la glycoproteine G du virus respiratoire syncytial  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 145 p.

abstract:
Pour exprimer un épitope protecteur de la gpG du VRS humain dans la plante nous
avons utilisé les technologies basées sur l'exploitation de virus comme vecteur d'expression.
Nous avons introduit dans le génome du CaMV (en remplacement de son deuxième cadre
de lecture) des séquences d'ADN codant pour des régions de l'ectodomaine de la gpG de
différentes tailles et incluant les 16 a.a. constituants l'épitope de protection. Quelles que
soient leurs tailles, les séquences introduites dans le génome du CaMV ont été délétées
suite à l'inoculation des plantes avec les virus recombinants. Par l'analyse des populations
virales issues de ces infections nous avons pu montrer que les délétions des séquences
codantes de la gpG par le CaMV se faisaient par un mécanisme de recombinaison identifié
chez les rétrovirus: la recombinaison par choix de copies. Nous avons aussi identifié les
régions spécifiques sur les séquences codantes de la gpG qui favorisaient ce type de
recombinaison. Des CaMV recombinants stables ont été obtenus par la suite, en fusionnant
la séquence codant pour l'épitope de protection en 3' des gènes codants pour les protéines
MTII ou DHFR. Toutefois, aucun produit d'expression de ces gènes de fusion n'a pu être
détecté dans les plantes infectées.  Nous avons utilisé le TMV comme système de présentation d'épitopes en fusionnant,
selon différentes stratégies, la séquence de l'épitope de protection du VRS au gène codant
pour la protéine de capside virale. L'expression stable de capsides recombinantes reconnues
par l'anticorps spécifique à l'épitope de protection du VRS a été obtenue lorsque l'épitope
était fusionné à la terminaison aminée de la cp du TMV ou à sa terminaison carboxylique
en aval d'un codon de faible terminaison de la traduction. Les TMV recombinants ont été
utilisés pour l'immunisation de souris afin d'évaluer le potentiel protecteur de l'épitope ainsi
exprimé dans la plante.


identifier: Gauthier, Christian  (1999). DÉTECTION RAPIDE DE LA SENSIBILITÉ DES BACTÉRIES AUX ANTIBIOTIQUES DANS DES INFECTIONS URINAIRES À L'AIDE DE LA CYTOFLUOROMÉTRIE EN FLUX  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 148 p.

type:
Thèse
Non évalué par les pairs

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. Le développement de méthodes permettant une détection rapide de la sensibilité aux antibiotiques contribuerait à contrôler la dissémination de souches résistantes, et
améliorerait l'antibiothérapie actuelle. Nous avons élaboré un nouveau test de sensibilité aux antibiotiques par cytométrie en flux (TSA-CMF) et évalué sa performance sur des isolats et des échantillons cliniques d'urine.  éthodologie: La perte d'intégrité membranaire a été suivie par l'iodure de propidium (Pl), un colorant d'acide nucléique. La sonde anionique bis-(1,3-acide dibutylbarbituric) trimethine oxonol (DiBAC4[3]) a été utilisée pour visualiser les changements de potentiel membranaire. Parallèlement, la morphologie et le contenu cellulaire étaient analysés par diffraction optique. Douze
antibiotiques furent testés sur 6 souches contrôles de 1' ATCC, 24 isolats urinaires et 19 échantillons cliniques d'urine, représentant une variété d'espèces dont: E. coli, K. pneumonioe, S. aureus, S. saprophyticus, S. epidermidis, P. mirabilis, E. foecalis, et P. oeruginosa. Les microorganismes récupérés furent cultivés en phase exponentielle, incubés pendant 2 h avec différents antibiotiques aux valeurs de sensibilité émises par le
NCCLS, lavés, puis incubés 10 min avec les fluorochromes. Résultats : Une excellente corrélation fut observée entre les comptes de cellules viables, determinés par cytométrie
en flux, et les comptes d'UFC. L'effet post-antibiotique de la gentamicine sur la viabilité du E. coli a pu être quantifié. La concordance entre l'interprétation des résultats du TSACMF, des antibiogrammes par disques et des microdilutions liquides (effectués selon les méthodes officielles du NCCLS) était de 93,4 % (n = 346 tests). Des 23 erreurs observées, 19 furent attribuables aux espèces autres que E. coli. Une correspondance parfaite a été obtenue avec cinq antibiotiques, alors que la nitrofurantoïne et la tétracycline ont causé, à elles seules, 52 % des erreurs. Le TSA-CMF ne requiert qu'environ 5 h. Conclusion: Nos résultats indiquent que le TSA-CMF pourrait être une alternative rapide et précise aux méthodes conventionnelles pour évaluer la vitalité
bactérienne et la sensibilité aux antibiotiques.

 The symbols and special characters used in the original abstract could not be transcribed due to technical problems. Please use the PDF version to read the abstract.
Rapid methods for antimicrobial susceptibility testing should help control the spread of resistance, and would greatly improve antimicrobial therapy. Severa! protocols
involving the use of flow cytometry to determine rapidly the antimicrobial activity on bacteria have been published, but not yet applied in a clinical setting. We developed a
novel flow cytometric antimicrobial susceptibility test (FC-AST) and evaluated its performance on clinical urine isolates and samples. Methods: Alterations in plasma membrane integrity were monitored by propidium iodide. The anionic probe bis-(1 ,3- dibutylbarbituric acid) trimethine oxonol [DiBAC4(3)] was used to measure changes in membrane potential. Microbial size and cellular content were also analyzed by light scattering. Twelve antibiotics were tested on 6 ATCC control strains, 24 urine isolates
and 19 clinical urine samples, containing E. coli, K. pneumonioe, S. aureus, S. saprophyticus, S. epidermidis, P. mirabilis, E. foecalis, and P. oeruginosa. The bacteria
were grown to an early log phase, incubated for a 2 h period with an antibiotic at the NCCLS MIC breakpoint, washed and incubated for 10 min with the fluorescent probes.
Results: Excellent correlation was observed between viable counts determined by flow cytometry and by CFU assays. FC-AST viable counts were not affected by the postantibiotic
effect. Agreement between FC-AST results, disk diffusion and broth microdilution tests (following NCCLS guidelines) was 93,4% on one hundred (n = 346 tests). Of the 23 errors observed, 19 came from species other than E. coli. Perfect agreement was obtained with five antibiotics, while nitrofurantoin and tetracycline were responsible for 52% of the errors. In ali, FC-AST requires about 5 hours. Conclusion: Our results indicate that FC-AST could be a rapid and accurate alternative to conventional methods for measuring bacterial viability and antibiotic susceptibility.


identifier: Champagne, Benoît  (1999). PROTÉOLYSE DE ICAM-1 PAR L'ÉLASTASE DE LEUCOCYTE  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 111 p.

abstract:
 L'élastase de leucocyte (HLE; « human leukocyte elastase ») est une sérine protéase qui
est impliquée dans la pathogenèse de plusieurs maladies inflammatoires telles l'arthrite
rhumatoïde, la fibrose kystique (FK; « cystic fibrosis ») et 1 'emphysème pulmonaire.
Puisque HLE a été montrée comme étant capable de se lier à Mae-l, un ligand de ICAM-
1 (« intercellular adhesion molecule-1 »; CD54), et que ICAM-1 joue un rôle clé durant le
recrutement et 1' activation des leucocytes aux sites inflarnmés, nous avons investi gué la
capacité de HLE à cliver ICAM-1. Des analyses de cytofluométrie réalisées à l'aide de
différents AcM contre ICAM-1 ont montré un clivage dose-dépendant de ICAM-1 par
HLE sur différentes lignées cellulaires humaines. Cette protéolyse membranaire a
complètement été inhibée par a 1-antitrypsine (a 1-A T), le principal inhibiteur naturel de
HLE. La liaison d'un AcM dirigé contre le domaine N-terminal de ICAM-1 (i.e. Dl) a
également complètement inhibé la protéolyse de ICAM-1 par HLE, suggérant la nécessité
d'une liaison de HLE au niveau ou à proximité du domaine Dl de ICAM-1. La capacité
de HLE à pouvoir effectuer la protéolyse directe de ICAM-1 a été confirmée par des
analyses électrophorétiques de type SDS-P AGE en utilisant une forme recombinante
soluble de la partie extracellulaire de ICAM-1 (rsiCAM-1 ). Fait surprenant, les
nombreux oligosaccharides qui recouvraient la surface de rsiCAM-1 ne semblaient pas
conférer une protection accrue envers 1' activité catalytique de HLE suggérant que la
glycosylation de ICAM-1 ne jouait probablement pas un rôle crucial au niveau de sa
protéolyse par HLE. Nous avons également montré que les sécrétions bronchoalvéolaires
(BAL; « bronchoalveolar lavage ») de patients atteints de FK contenait une activité
protéolytique nette suffisamment importante pour induire la protéolyse membranaire de
ICAM-1. Ce clivage induit par l'incubation de cellules dans des liquides BAL a
complètement été inhibé par l'ajout de al-AT ou d'un inhibiteur peptidique et spécifique
contre le site catalytique de HLE (MSAAPVCK; N-méthoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val
chlorométhyl cétone). De plus, la protéolyse de ICAM-1 induite par ces liquides
biologiques était concomitante avec celle de CD4 à la surface de ces mêmes cellules,
selon une amplitude équivalente. La capacité de HLE de pouvoir moduler 1' expression de
ICAM-1 à la surface des leucocytes par clivage protéolytique vient donc supporter
l'hypothèse qu'une surproduction de HLE pourrait entraîner de sévères désordres
immunitaires au niveau des poumons de patients atteint de FK ou d'emphysème
pulmonaire en affectant les processus d'adhésion et d'activation leucocytaire.


identifier: Bouchard, Geniève  (1999). CARACTÉRISATION DE LYMPHOCYTES T ANTI-MYÉLINE ET CORONAVIRUS HUMAIN OC43 DANS LA SCLÉROSE EN PLAQUES  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 124 p.

abstract:
La sclérose en plaques (SEP) est une maladie démyélinisante inflammatoire chronique du
système nerveux central (SNC) qui serait occasionnée par des lymphocytes T spécifiques
aux antigènes de la myéline. Ces lymphocytes T auto-réactifs pourraient être activés en
raison du mimétisme moléculaire entre des antigènes de la myéline tels que la protéine
basique de la myéline (PBM) ainsi que la protéine protéolipidique (PPL) et plusieurs
virus. En effet, il a été rapporté qu'une forte proportion de lignées de lymphocytes T
reconnaissant la PBM et le coronavirus humain 229E a été obtenue chez des personnes
atteintes de SEP. Pour évaluer l'implication possible de l'autre souche coronavirale
humaine OC43, ainsi que la PPL dans ces réactions croisées, des lignées de lymphocytes
T spécifiques à la PBM, la PPL et au virus OC43 ont été obtenues avec succès de huit
donneurs atteints de SEP ainsi que de huit donneurs témoins de même âge et de même
sexe. Avec l'utilisation de protéines de la myéline purifiées, du lysat de cellules infectées
et du virus purifié, aucune activation lymphocytaire croisée entre la PBM, la PPL et le
coronavirus OC43 n'a pu être observée. L'évaluation de la restriction HLA de la
reconnaissance du virus par les lymphocytes T, a démontré que les lignées obtenues
étaient pour la plupart restreintes par le HLA-DR. Finalement, la cytofluorométrie a
permis d'évaluer le phénotype des lignées spécifiques au virus (CD4+ CD3+ ou CD8+
CD3+), qui ont été pour la majorité des lignées de phénotype CD4 + CD3 +. Ces résultats
démontrent la présence d'une immunité cellulaire spécifique au coronavirus humain
OC43. Toutefois, dans les conditions expérimentales utilisées et avec les donneurs qui
ont participé à l'étude, cette souche de coronavirus humain, contrairement à la souche
229E, ne semble pas activer les lignées de lymphocytes T spécifiques à la PBM et à la
PPL.

 Multiple sclerosis (MS) is a demyelinating inflammatory disease of the central nervous
system (CNS) considered to be mediated by myelin-reactive T-cells. These autoreactive
T -cells could be activated by molecular mimi cry between mye lin antigens such as mye lin
basic protein (MBP) and proteolipid protein (PLP) and several viral pathogens. Indeed, a
high proportion of MBP and human coronavirus (HCV) cross-reactive T -cells was
reported in MS patients that involved HCV strain 229E. To evaluate the possible
involvement of the other HCV strain (OC43) and PLP in such cross-reactivity, OC43-,
MBP, and PLP-reactive T -cell lin es were successfully established from eight MS patients
and eight sex- and age-matched healthy controls. Using purified human myelin proteins,
infected celllysates and purified virus, no T-cell cross-reactivity, was observed between
MBP, PLP and OC43. HLA restriction measurements showed that HCV-OC43 reactive
T-cell lines were mostly HLA-DR restricted. Flow cytometric evaluation of surface
phenotypes (CD4+ CD3+ or CD8+ CD3+) of virus-reactive cells indicates that the majority
were CD4+ CD3+. These results demonstrate the presence of HCV-OC43-specific cellular
immunity in humans. However, they are not consistent with the involvement of this strain
of human coronavirus, unlike the 229E strain, in activation of MBP- or PLP-specific Tcells
in MS, at least under the experimental conditions used and with the donors who
partipated in the study.


identifier: Boudreau, Richard  (1999). MÉCANISMES POSSIBLES DE PRÉVENTION DU LYMPHOME THYMIQUE RADIO-INDUIT PAR LES CELLULES DENDRITIQUES THYMIQUES 1DA3.1  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 133 p.

abstract:
Le développement du lymphome thymique radio-induit chez la souris C67BL/6 se
traduit par l'apparition de cellules pré-lymphomateuses (CPL) pendant la période de
latence qui dure de 8 à 36 semaines; les CPL se logent dans le thymus, se transforment
en cellules lymphomateuses (CL) et prolifèrent pour produire un lymphome thymique.
Or, ce processus peut être abrogé par une injection intra-veineuse (i. v.) de moelle
osseuse (M.O.) syngénique qui fournit au thymus différents types de cellules, dont les
cellules dendritiques (C.D.) que l'on pense être responsables de la prévention du
lymphome thymique. Cette prévention passe vraisemblablement par des interactions
cellulaires dans le micro-environnement thymique et, jusqu'à maintenant, aucun
mécanisme n'a été décrit pour expliquer l'effet des C.D. thymiques sur les CPL et/ou
les CL.  Pour caractériser les interactions cellulaires afin d'élucider le mécanisme de
prévention, et puisque nous avions déjà une lignée de CL maintenue en culture, il
fallait tout d'abord identifier, puis isoler les CPL. Des expériences antérieures
suggèrent fortement une association entre la présence de l'antigène TL (thymus
leukemia) et le développement du lymphome thymique, faisant de cet antigène un
marqueur potentiel de CPL. Cependant, personne n'avait suivi l'expression de cet
antigène pendant la période de latence jusqu'à l'apparition des signes cliniques du
lymphome, ce qui aurait pu régler une fois pour toute la question de l'antigène TL
comme marqueur de CPL. Nous avons alors établi une nouvelle approche
expérimentale qui nous a permis pour la première fois de suivre l'évolution d'un profil
antigénique pendant la période de latence jusqu'à l'apparition du lymphome. Nous
démontrons ainsi que 1' antigène TL peut être absent pendant toute la période de
latence jusqu'à l'apparition des signes cliniques du lymphome, ce qui signifie que
l'induction de l'expression de l'antigène TL n'est pas essentielle au développement du
lymphome thymique radio-induit.  Dans le cadre de la caractérisation de la lymphomatogénèse, des travaux récents ont
démontré que les CL sécrètent un facteur soluble qui induit 1' expression de la
métalloprotéinase de type 9 (MMP-9) dans les cellules stromales. Cette métalloprotéinase joue un rôle clef dans la dégradation de la matrice extra-cellulaire
dans l'évolution de certains cancers, favorisant ainsi de manière positive la croissance
de la tumeur. Nous avons alors émis l'hypothèse que les C.D. interfèrent avec le
développement du lymphome thymique en bloquant l'induction de l'expression de la
MMP-9, soit par la sécrétion d'un agent soluble, soit par contact cellulaire. Nous
avons fait deux expériences in vitro et les résultats démontrent clairement que, ni le
surnageant des C.D., ni les C.D. elles-mêmes n'ont la capacité de bloquer l'expression
de la MMP-9 induite par les CL.  Par la suite, nous nous sommes demandé si les C.D. pouvaient agir sur les CL en les
éliminant ou en diminuant leur vitesse de prolifération dans le micro-environnement
thymique, retardant ou bloquant ainsi 1' apparition des signes cliniques du lymphome
induit par l'injection intra-thymique (i.t.) de CL. Les résultats démontrent que le
groupe de souris injectées de CL et de C.D. développent des lymphomes au même
rythme et dans les mêmes proportions que le groupe témoin composé de souris
injectées de CL seulement, démontrant ainsi que les C.D. n'ont aucun effet sur la
prolifération des CL in vivo.  Les cytokines peuvent interférer dans le développement de certaines tumeurs. Entre
autre, mentionnons, le facteur nécrosant de la tumeur (TNF -a) qui a été associé
étroitement à la prévention du lymphome thymique et le facteur stimulant les colonies
de macrophages et de granulocytes (GM-CSF) qui possède des propriétés antitumorales.
Nous démontrons in vitro que les C.D. n'expriment pas le TNF-a mais
qu'elles expriment faiblement le GM-CSF; lorsque nous ajoutons du "phorbol
myristate acetate" (PMA), un activateur des protéines kinase C (PKC), il y a une
légère expression du TNF-a et une forte expression du GM-CSF, ce qui suggère que
cette dernière cytokine puisse jouer un rôle dans la prévention du lymphome par les
C.D. thymiques.  En résumé, nos résultats indiquent que : a) l'induction de l'expression de l'antigène
TL suite au régime lymphomagène d'irradiation n'est pas lié au développement du lymphome thymique b) les C.D. thymiques préviennent le développement du
lymphome par un mécanisme n'impliquant pas la MMP-9 c) les C.D. thymiques n'ont
aucun effet sur la mortalité et la prolifération des CL, ce qui suggère qu'elles
préviennent le développement du lymphome en agissant avant l'apparition des CL d)
les C.D. thymiques n'expriment pas le 1NF-a mais peuvent exprimer fortement le
GM-CSF après avoir été stimulées, suggérant que cette cytokine joue probablement un
rôle dans la prévention du lymphome.


identifier: Boyer, Annie  (1999). Étude des déshalogénases I et II produites par desulfitobacterium frappieri souche PCP-1  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 140 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.  Desulfitobacterium frappieri, PCP-1 est un nouveau microorganisme anaérobie
pouvant dégrader le pentachlorophénol, qui a été récemment isolé dans notre
laboratoire à partir d'un consortium méthanique. C'est le seul microorganisme connu
capable de déshalogéner des chlorophénols en position ortho, meta et para. Deux
déshalogénases sont impliquées, soit la déshalogénase 1 induite par le 2,4,6-
trichlorophénol et la déshalogénase Il induite par le 3,5-dichlorophénol. Le but de ce
travail de maitrîse était d'effectuer une caractérisation préliminaire de ces deux
enzymes et d'initier la purification de la déshalogénase II.  Ces déshalogénases réductrices retrouvées dans la fraction membranaire de D .
.frappieri souche PCP-1 ont été solubilisées en présence de 0,1% de Triton X-1 00 et de
20% de glycérol. Ces dernières préparations ont été utilisées au cours de notre étude.
La déshalogénase 1 catalyse la déshalogénation réductrice du pentachlorophénol (PCP)
et de différents chlorophénols principalement en position ortho, tandis que la
déshalogénase II transforme principalement les chlorophénols en position meta et
para. Lorsque le méthyl viologen et le citrate de titanium(III) sont utilisés comme
agents réducteurs, les préparations enzymatiques de déshalogénase 1 transforment le
pentachlorophénol à un taux de 40,9 nmoles min"1 mg de protéines·', tandis qu'un taux
de 0,161 nmoles min·' mg de protéines·' a été obtenu pour les préparations de
déshalogénase Il. Les conditions optimales de déshalogénation ont été obtenues à un
pH de 6,9 et à une température de 50°C pour la préparation enzymatique de la
déshalogénase 1 et à un pH de 7,4 et à une température de 45°C pour la préparation
enzymatique de la déshalogénase Il. Le sulfite à une concentration de 1 mM inhibe
l'activité de déshalogénation des deux préparations de déshalogénases, tandis que le
sulfate (100 mM) ne démontre aucun effet. Le nitrate (5 mM) diminue l'activité de
déshalogénation de la préparation enzymatique de la déshalogénase 1 de 50% tandis
qu'il inhibe complètement l'activité de la préparation enzymatique de la
déshalogénase Il. L'inhibition réversible de la préparation enzymatique de la
déshalogénase II par le 1-iodopropane (1 mM) et sa restauration par exposition à la
lumière, suggère que cette enzyme contiendrait une cobalamine. Par contre, la déshalogénase 1 est également inactivée par le 1-iodopropane, mais l'activité n'est pas
restaurée après exposition à la lumière. Une purification partielle de la déshalogénase
Il a été obtenue par chromatographie à interaction hydrophobique sur t-butyl suivie
d'une chromatographie d'affinité sur hydroxyapatite.


identifier: Bélanger, Barbara  (1999). Contribution à l'étude du rôle de la BICP27 dans la réplication du virus de l'herpès bovin 1.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 101 p.

abstract:
Le virus herpès bovin 1 (BHV-1) est un pathogène d'importance économique du
bétail, associé à de sévères manifestations cliniques. Pour le développement de nouveaux
vaccins plus efficaces et plus sécuritaires, l'étude des gènes viraux est primordiale. Dans ce
projet, le rôle du gène codant pour la BICP27 ("bovine infectious cell protein # 27") dans
la réplication du BHV -1 a été étudié. Pour identifier les gènes potentiellement transactivés
par la BICP27, une stratégie a été développée. Des cellules cos-7 ont été co-transfectées
avec un vecteur d'expression eucaryotique exprimant la BICP27 et l'un ou l'autre d'une
série de cinq cosmides recombinants représentant globalement tout le génome viral. Après
avoir vérifié la présence de la BICP27 dans les cellules transfectées, les acides
ribonucléiques (ARN) totaux ont été isolés, fractionnés en gels d'agarose, transférés sur
une membrane de nylon puis hybridés avec les cosmides afin d'identifier les transcrits
potentiellement transactivés par le polypeptide. Les cinq essais réalisés en présence du
vecteur exprimant la BICP27 ont permis la détection de deux transcrits de 3,3 et 2,4
kilobases (kb ), indépendamment du cosmide à l'étude. Par contre, les essais témoins en
présence du vecteur d'expression original (sans insertion) n'ont révélé aucune bande
d'hybridation. Ces résultats suggèrent donc que les deux transcrits détectés correspondent
à ceux générés par le vecteur d'expression recombinant pour la synthèse de la BICP27, le
transcrit de 3,3 kb représentant présumément un précurseur de I'ARN messager de 2,4 kb.
Parallèlement, la même stratégie a été utilisée avec un témoin positif qui est un
transactivateur connu du BHV -1 : la BTIF. Un sérum anti-BTIF, préalablement développé,
nous a permis de confirmer la présence de la BTIF dans les cellules co-transfectées.
Pourtant, aucun transcrit spécifiquement transactivé par le polypeptide n'a pu être détecté,
suggérant donc que notre stratégie n'était pas assez sensible.  Dans le but éventuel de déterminer si le gène codant la BICP27 est nécessaire dans
le cycle de réplication du BHV-1, la seconde partie du projet consistait à développer les
outils nécessaires à la construction d'un mutant de délétion BHV -1/BICP2T, à partir
duquel les conséquences de la mutation seraient analysées in vitro puis in vivo. La
procédure courante pour créer des mutants du BHV -1 consiste à co-transfecter des
cellules permissives avec l'acide désoxyribonucléique (ADN) viral purifié et un plasmide de
transfert recombinant dont le gène viral d'intérêt, bordé des séquences proximales intactes
( -1 000 paires de bases (pb) de chaque côté), a été soit remplacé ou inactivé par insertion
d'un gène rapporteur. Le mutant désiré, généré par recombinaison homologue des
séquences communes entre l'ADN plasmidique et l'ADN viral, est ensuite sélectionné selon
le phénotype du gène rapporteur. Au cours des travaux, deux plasmides de transfert
différents ont été construits: le premier (pKS/NJ-Blnl/13-gar} contient les séquences
codantes complètes de la BICP27 à l'intérieur duquel une cassette 13-galactosidase (13-gal)
a été insérée au niveau du codon 141, alors que chez le second plasmide
(pKS/NJ-BlniM3ICP27/13-gar}, 93% des séquences codantes de la BICP27 ont été
remplacées par la cassette 13-gal. Par la suite, la fonctionnalité de la cassette 13-gal
introduite dans chacun des plasmides de transfert a été démontrée enzymatiquement dans
les lysats de cellules MDBK ("Madin Darby Bovine Kidney") suite à leur transfection
transitoire. Finalement, étant donné que les données actuelles de la littérature montrent que le
gène de l'ICP27 ("infectious cell protein # 27"), chez des virus herpès homologues au
BHV -1, est absolument requis à la réplication virale, il fallait développer une lignée de
complémentation apte à permettre la multiplication du mutant BHV-l/BICP2T,
c'est-à-dire une lignée cellulaire stable qui soit capable de fournir en trans le polypeptide
BICP27. Pour ce faire, un système comportant deux vecteurs a été utilisé, l'un exprimant la
forme native de la BICP27 (pSV/BICP27), l'autre (pSV2neo ou pSV3neo) encodant
(pSV3neo) ou non (pSV2neo) l'antigène grand T du SV40 de même qu'un marqueur de
sélection eucaryotique, le gène de résistance à la généticine. Les cellules MDBK ont donc
été co-transfectées avec pSV/BICP27 et soit pSV2neo ou pSV3neo puis sélectionnées en
présence de généticine. Les colonies résistantes à la drogue ont été par la suite clonées à
l'aide d'anneaux de clonage. Pour identifier les clones exprimant la BICP27, des lysats
cellulaires de chacun des clones ont été préparés, fractionnés en gel de polyacrylamidedodécylsulfate
de sodium (SDS-PAGE), électrotransférés sur des membranes puis
immunodétectés avec un sérum anti-BICP27. Malheureusement, aucun des clones isolés
n'a révélé l'expression de la BICP27, du moins pas à un niveau détectable. Ces résultats,
ajoutés à d'autres obtenus antérieurement dans notre laboratoire par le biais de divers
systèmes d'expression eucaryotique constitutifs à un seul vecteur (i.e. où le gène d'intérêt
et le marqueur phénotypique sont portés sur la même molécule), suggèrent que la BICP27
est toxique aux cellules. Pour pallier ces problèmes, le système d'expression inductible
commercial pRetroTetOff, lequel est sensible à la présence de tétracycline (ou de
doxycycline) dans le milieu, a été testé dans les cellules MD BK. Cette étude, effectuée via
le vecteur recombinant pRetroTetOtlLuc encodant le gène de la luciférase sous le contrôle
du promoteur inductible, a permis de démontrer que le système pRetroTetOff était
fonctionnel dans les cellules MDBK. Ce système sera utilisé sous peu pour le
développement d'une lignée cellulaire MDBK/BICP27+.


identifier: Coupal, Martin  (1998). DÉVELOPPEMENT DE SONDES PHOTOSENSIBLES POUR LE MARQUAGE RÉGIO-SPÉCIFIQUE DU RÉCEPTEUR NPR-A BOVIN.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science, 116 p.

abstract:
 Dans le but de mieux cerner la dynamique des interactions existant entre les peptides
Dnatriurétiques et le récepteur natriurétique de type-A, nous avons procédé à des études
systhématiques de photomarquage de haute affinité avec le benzophénone comme agent
photoactivable, et l'analogue chimérique de haute affinité [N,C,rANP(1-28)]pBNP32
(identifié comme le pBNP1) (Mimeault et al., 1993, Mol. Pharmacol. 43, 775-782),
comme gabarit de synthèse. Au total, huit sondes ont été synthétisées sur support solide
par chimie Boe/BOP. Les sondes [Na-p-benzoylbenzoyl, L2Y]pBNP1 (A), ainsi que
[Na-p-benzoylbenzoyl, L18Y]pBNP1 (B), ont été développées de façon à incorporer
l'agent benzophénone directement en~. avec pour objectif d'étudier une interaction
possible entre le segment exocyclique situé en amino-terminal de l' ANP, et le site de
reconnaissance du récepteur NPR-A. Dans les deux cas, le BOP a été utilisé comme
agent de couplage de l'acide p-benzoylbenzoïque pour la dérivation en Na. Les sondes
[L2Y, R3Bpa]pBNP1 (C), [S6Y, G9Bpa]pBNPl (D), et [Gl6Bpa, L18Y]pBNPl (E), ont
été synthétisées de façon à incorporer l'agent benzophénone à l'intérieur du cycle de
l'ANP, tandis que les sondes [Ll8Bpa, F26Y]pBNP1 (F), [L18Y, F26Bpa]pBNPl (G), et
[Ll8Y, Y28Bpa]pBNP1 (H), ont été développées de façon à inc~rporer,_ l'age,nt
benzophénone dans le segment exocyclique situé en carboxy-terminal. Dans tous les cas,
l'agent photosensible a été incorporé via l'utilisation de l'acide aminé modifié p-benzoylL-
phénylalanine. Les potentiels de liaison ont été évalués sur des préparations
membranaires de cortex de glande surrénale de boeuf. Sous leur forme linéaire, tous les
peptides ont démontré une faible affinité. À l'inverse, les analogues cycliques pBNPl-A,
-B, -C, -F, -0, et -H ont enregistré des affinités statistiquement équivalentes à celle
démontrée par l'ANP (~pK; :de -0.04 à +0.14), alors que pBNPl-D (~pK;= -0.43 ±
0.10) a enregistré une affinité 3 fois moindre. Considérant sa faible affinité, pBNP1-E (~
pK;= -1.76 ± 0.08) a été rejeté comme sonde potentielle. L'iodation des analogues via
l'utilisation de la lactoperoxydase s'est caractérisée par l'iodation préférentielle du résidu
Ty?8
• De l'incorporation du benzophénone au nivèau du segment N-terminal (pBNPl-A,
-B, -C) ont découlé les sondes affichant les plus importants taux de liaison non spécifique, situés à 34%, 22%, et 20%, respectivement, alors que des substitutions faites
à l'intérieur du cycle (pBNP1-E, -F), et dans le segment exocyclique C-terminal
(pBNP1-G, -H), ont decoulé des sondes affichant des taux de liaison non-spécifique
situés à 15%, 14%, 7%, et 6%, respectivement. Les sondes 1251-pBNP1-A, -B, -C, -F, -G,
et -H ont toutes marqué de façon spécifique le récepteur NPR-A monomérique (130
kDa). Au contraire, 1251-pBNP1-E s'est montré incapable de toute incorporation. Les
taux maximum d'incorporation ont été mesurés à 18%, 41%, 6%, 25%, 40%, et 40%,
pour 1251-pBNP1-A, -B, -C, -F, -G, et -H, respectivement. La digestion du complexe
obtenu par le photomarquage du récepteur avec chacune des sondes a révélé deux motifs
distincts en SDS-PAGE, avec 1251-pBNP1-A, -B, -C, -G, et -H, affichant une bande
majeure à 16 kDa, et des bandes additionnelles à 40, 34, 13, et 4 kDa, alors que le motif
obtenu avec pBNP1-F n'a affiché que deux bandes, une majeure à 4 kDa, et une mineure
à 40 kDa. La réduction et l'alkylation de ce fragment de 4 kDa, et son analyse
subséquente par 16T6C SDS-PAGE a révélé une bande de poids moléculaire supérieure à
celle obtenue par la migration de la sonde réduite et alkylée, mais non complexée au récepteur. Ces résultats suggèrent la présence d'un nouveau point de contact entre les peptides natriurétiques et le récepteur NPR-A.


identifier: Bergeron, Annie  (1999). Evaluation de méthodes synthétiques pour l'élaboration d'analogues de l'endothéline-1 comportant un lien amide intramoléculaire.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 60 p.

abstract:
L'endothéline-1 (ET -1 ), le plus puissant vasoconstricteur d'origine peptidique
connu à ce jour, est composé de 21 acides aminés et possède deux ponts disulfures dans sa
structure. Au plan pharmacologique, l'ET-1 possède une grande variété d'actions,
notamment une constriction soutenue et des actions mitotiques sur le muscle lisse
vasculaire, une constriction de la trachée, une libération d'ANP (atrial natriuretic peptide)
au niveau du coeur, une diminution du flux sanguin rénal, etc. Etant donné cette grande
gamme d'effets biologiques, 1'ET- 1 se retrouve également associée à certaines
physiopathologies humaines tels, l'infarctus du myocarde, l'insuffisance rénale,
l'athérosclérose, l'asthme, etc. Les effets de l'ET sont en fait médiés par le biais de
récepteurs qui se présentent sous différents sous-types au sein de 1' organisme et qui sont
nommés : ETA, ETat. ETaz et ETc. Plusieurs études menées dans le passé ont permis
d'identifier certains pharmacophores de cette molécule. L'identification de ces derniers
peut mener à l'élaboration d'analogues de l'ET qui pourraient s'avérer être des agonistes
ou des antagonistes de la molécule. Il est connu que les antagonistes peuvent apporter des
informations importantes sur les rôles de la molécule au niveau de la physiologie cardiavasculaire
ainsi que sur ses implications pathologiques. Différents analogues de l'ET -1
ont donc été élaborés par synthèse peptidique en phase solide. Les dérivés peptidiques
obtenus comportent un lien amide substitut à un des deux ponts disulfures de la molécule
native, par l'introduction d'un résidu acide (acide aspartique ou acide glutamique) et d'un
résidu basique (lysine ou ornithine ), remplaçant les deux résidus cystéines normalement
rencontrés. Certains comportent également un espaceur glycine au niveau de ce même
lien amide, pour accentuer sa longueur. Trois séries de synthèse peptidique ont été
expérimentées afin de tenter de mettre au point une méthode efficace pour la réalisation de
ces divers analogues peptidiques.  Finalement, nous sommes arrivés à la conclusion que c'est la méthode de
synthèse peptidique en phase solide utilisant la chimie Fmoc qui est la plus appropriée.
Une réduction catalytique au palladium, en présence de N-méthylmorpholine comme
nucléophile, permet l'élimination sélective des groupements protégeant les chaînes
latérales des résidus d'acide aminé impliqués dans la formation du lien amide. Quant au lien amide, il est pour sa part formé à l'aide du N,N-dicyclohexylcarbodiimide (DCC).
Nos résultats montrent que les dérivés peptidiques obtenus par cette méthode sont d'une
bonne pureté, lorsqu'ils sont analysés par HPLC. L'analyse par spectrométrie de masse
démontre par contre que les produits obtenus, malgré leur pureté acceptable, ne sont pas
ceux désirés. Il semble qu'il y a eu terminaison de chaîne en cours de synthèse pour un
des analogues, alors que pour les autres dérivés, la méthode d'élimination des
groupements protégeant les chaînes latérales des résidus impliqués dans le lien amide n'est
pas appropriée. En fait, cette méthode serait à l'origine d'une réaction secondaire via
l'action de la N-méthylmorpholine sur les résidus d'acide aspartique. Ceux-ci sont au
nombre de deux à l'intérieur de la séquence des dérivés de l'ET synthétisés.


identifier: Charbonneau, Céline  (1998). Développement d'une méthode de lactamisation pour la synthèse d'analogues pontés de l'endothéline-1.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science, 76 p.

abstract: La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.  Les endothélines {ET-1,-2,-3) sont des peptides de 21 acides aminés qui suscite beaucoup d'intérêts puisqu'il sont les plus puissants vasoconstricteurs connus chez l'humain Ces médiateurs possèdent dans leur structure deux ponts disulfures unissant respectivement les cystéines 1-15 et 3-11. Les nombreuses études pharmacologiques sur les endothélines, principalement ET -1, ont permis d'établir que ce peptide est à l'origine de deux réponses distinctes au niveau vasculaire; l'une de vasoconstriction et l'autre de vasodilatation Ces deux types d'effets en réponse à l'ET -1 suggèrent l'existence d'une hétérogénéité de récepteurs. Effectivement, des études pharmacologiques ainsi que le clonage moléculaire démontrent l'existence. de divers sous-types de récepteurs pour les ETs. Chez les mammifères, les mieux connus sont ETA-R, ETb-R et ETc-R D'autres études suggèrent même l'existence d'autres récepteurs pour I'ET-1 soient ETbi. ETb2. ETax. etc... La liaison de l'ET -1 à ses récepteurs produit divers effets physiologiques, tel que la modulation du tonus vasculaire, la production d'hormones et une action mitogène. Aussi, il est suggéré que I'ET-1 soit impliquée dans plusieurs pathophysiologies humaines. On lui attribue notamment un rôle important dans les cas d'infarctus du myocarde, de l'insuffisance rénale et de maladies inflammatoires pulmonaires. Jusqu'à maintenant, plusieurs études de structure-activité ont été entreprises dans le but de connaître le rôle exact et distinct des 21 acides aminés constituant l'ET -1 lors de l'interaction avec son récepteur. Plusieurs observations rapportées jusqu'à présent laissent entrevoir l'implication des 4 Cys de la molécule et des 19 Cys du récepteur. Des analogues  de l'ET -1 ayant un des deux ponts disulfures remplacé par un pont lactame ont été conçus par synthèse en phase solide. Ce projet de recherche a pour but de vérifier le rôle des cystéines lors de l'interaction au niveau· moléculaire. Les acides aminés sélectionnés pour substituer les Cys 1, 3, 11 et 15 sont Asp, Glu, Lys et Om. Les diverses combinaisons de résidus formant les ponts ont alors été testées dans le but de vérifier de quelle façon la longueur de ce lien intramoléculaire vient influencer l'activité biologique de ce peptide analogue de I'ET-1. Une méthode de synthèse spécifique a de plus été évaluée, puisque deux stratégies de cyclisation sont nécessaires pour former de façon distincte le pont lactame et le pont disulfure. Une approche avec protection orthogonale est donc utilisée. Cette procédure permet de retirer sélectivement les différents groupes protecteurs. La méthode de synthèse habituellement utilisée dans notre laboratoire ne convient pas au type d'analogues désirés. Effectivement, nos observations suggèrent une déprotection inattendue du noyau indole du Trp en cours de synthèse. Ce noyau étant instable, il peut donner naissance à plusieurs réactions secondaires. De plus, au cours de la synthèse, plusieurs étapes de couplage ont dû être reprises 2 ou 3 fois, ce qui signifie que le peptide a été mis en contact avec une quantité importante de réactifs. Cette situation a entraîné la production d'espèces nucléophiles, contribuant à diverses réactions secondaires. Aussi, nous avons constaté que le temps nécessaire à la lactamisation, établi avec d'autres peptides, ne convient pas aux présents analogues. La taille particulière de l'ET-1 avec ses ponts disulfure et lactame rend l'arrangement difficile. Ainsi, le temps de cyclisation a dû être prolongé. De plus, étant donné qu'il y a un certain pourcentage de déprotection du noyau indole, une oxydation plus douce, au ferricyanure de potassium, a été préférée pour la formation du pont disulfure. Par conséquent, l'oxydation du Trp devient moins probable. Une analyse des produits pré- et post-oxydation révèle des temps de rétention · similaires. Des tests ont alors été effectués pour vérifier si la réaction avait bien eu lieu et si oui, à quel moment Les résultats obtenus ont permis de conclure que l'oxydation est réalisée avant même que la réaction au ferricyanure de potassium ne .soit exécutée. L'oxydation à l'air étant très propice et, les deux groupements sulfhydriles déjà face à face, la réaction ne se trouve que facilitée. En résumé, les caractéristiques propres à chacun des peptides, et même à chacun des analogues, doivent être considérées rigoureusement, car une même stratégie donnera des résultats différents pour divers analogues


identifier: Lyrette, Ninon  (1998). MODULATION DE LA PROLIFÉRATION CELLULAIRE PAR LES ORGANOCHLORÉS DANS LES CELLULES ÉPITHÉLIALES MAMMAIRES HUMAINES  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 72 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. Au Canada, une femme sur neuf sera atteinte du cancer du sein au cours de sa vie.
Plusieurs facteurs génétiques, nutritionnels et hormonaux connus sont impliqués dans la
cancérogenèse mammaire. Par ailleurs, depuis quelques années plusieurs études
épidémiologiques suggèrent que certains contaminants environmentaux, notamment les
organochlorés, pourraient être impliqués dans le développement du cancer du sein.  L'objectif des présents travaux est de déterminer le potentiel mitogène des
organochlorés dans un système cellulaire cible, soit les cellules épithéliales mammaires
humaines non-tumorigènes (MCF-lOA) en culture, et d'élucider le mécanisme
responsable d'une induction de la prolifération cellulaire. Les organochlorés visés dans
cette problématique sont l'hexachlorobenzène (HCB), les deux isomères du 1,1-dichloro-
2,2-di( 4-chlorophényl)éthylène (soit 1' o,p '-DDE et le p,p '-DDE) et 1 'hexachlorocyclohexane
(~-HCH).  Tout d'abord, les résultats montrent que l'HCB (20 J.LM) augmente de façon
significative (p<0.05) la prolifération des MCF-lOA, telle que mesurée par le contenu
total en ADN et le dénombrement cellulaire. L'effet mitogène de l'HCB est comparable
en intensité à celui induit par le 17~-estradiol (E2) (30 et 43 %, respectivement); l'effet
des deux traitements combinés est égal à celui de l'HCB ou de l'E2 seul. De plus, en
présence de tamoxifène (1 J.LM), un antagoniste du récepteur à l'estrogène, l'E2 n'est pas
mitogène, mais ce bloqueur n'exerce aucun effet sur 1' accroissement de la division
cellulaire induite par l'HCB. L'effet activateur de l'HCB ne semble donc pas médié via
une activité impliquant le récepteur à l'estrogène.  L'augmentation de la prolifération cellulaire des MCF-lOA induite par l'HCB est
abolie si 1 'EGF exogène (20 ng/ml) est retiré du milieu de culture. Ceci suggère que
1' activation induite par 1 'EGF ("epidermal growth factor" ou facteur de croissance
épidermique) est essentielle afin que l'HCB puisse exercer son pouvoir mitogène envers
ces cellules mammaires. Une étude de ce rôle au niveau moléculaire démontre que
l'HCB, à une concentration de 5, 10 ou 20 J!M, module à la hausse le degré de
phosphorylation du récepteur à l'EGF, un "commutateur" important en amont d'une
cascade de signalisation cellulaire conduisant à l'activation d'oncogènes, donc à la
division cellulaire.  Notre étude de trois autres contaminants de 1 'environnement soit l' o,p '-DDE, le
p,p'-DDE et le ~-HCH (10 et 20 J!M), a montrée qu'à l'inverse de l'HCB, ces substances
n'induisent aucune hausse de la prolifération cellulaire des cellules MCF-lOA.  Les résultats obtenus montrent que l'HCB, un contaminant de l'environnement
présent dans le tissu adipeux chez virtuellement tous les Canadiens, possède une activité
biologique sur les cellules mammaires épithéliales humaines qui est compatible avec une
action cancérogène. En effet, l'augmentation de la prolifération cellulaire, qui pourrait
résulter d'une augmentation de l'activation du récepteur à l'EGF, est un mécanisme
reconnu pour expliquer l'action des cancérogènes épigénétiques. Ces travaux appuient
fortement l'hypothèse d'un rôle de l'HCB dans le cancer du sein.


identifier: Lapointe, Stéphane  (1998). Effets de la contamination microbienne sur la stabilité des androgènes en milieu urinaire  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 69 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.  La découverte et le raffmement des méthodes de synthèse des stéroïdes depuis 1937 a permis
1 'utilisation de leurs propriétés androgéniques et anabolisantes à des fins thérapeutiques et
suprathérapeutiques. La prévention et le traitement des maladies reliées au métabolisme des
stéroïdes androgènes anabolisants (AAS) ainsi que le besoin de dépister leur consommation à des
fins illicites ont forcé le développement des tests visant à étudier le profil d'excrétion urinaire des
stéroïdes en milieu clinique et dans les laboratoires antidopages. L'échantillonnage des urines
n'est pas effectué de manière stérile, ce qui augmente les chances de contamination par un grand
nombre de micro-organismes. Les conditions de stockage et de transport ne sont pas toujours
idéales et peuvent être favorables à l'activité bactérienne qui pourrait causer des dommages à la
structure des stéroïdes. L'analyse d'une urine dont les stéroïdes furent dégradés est ou devrait
automatiquement être déclarée non valide. On est dans l'intérêt des patients, des athlètes et des laboratoires de s'assurer que l'analyse des
stéroïdes est représentative de l'état de l'échantillon au moment de la collecte. Pour s'en assurer,
on se fie à la présence de deux stéroïdes normalement présents à l'état de trace dans l'urine: les
S(a/~)-androstandiones, et/ou des stéroïdes endogènes dans la fraction libre de-l'extraction. En
effet, un grand nombre de micro-organismes pouvant contaminer les urines ont la capacité de
déconjuguer les stéroïdes sulfo et glucuroconjugués puis oxyder les groupements hydroxyles,
produisant ainsi les androstandiones. Les enzymes impliquées dans ces biotransformations, très
répandues dans le règne animal et microbien, sont les 3(a/~) et 17(a/~)-hydrogénases
d'hydroxystéroïdes et les réductases.  Très peu d'études avaient été faites au moment de débuter celle-ci sur la stabilité des stéroïdes
dans une urine stérile ou contaminée, en fonction de paramètres variables lors de la collecte, du
transport et du stockage des échantillons avant l'analyse. De plus, on ne s'entendait pas de
manière unanime sur les marqueurs de la dégradation des stéroïdes, ni sur les conditions de rejet
de l'analyse d'une urine ayant subi des conditions de transport ou d'entreposage inadéquates.
Nous avons·décidé d'entreprendre une série d'études comportant quatre volets principaux.  1) la stabilité de certains stéroïdes androgènes conjugués d'intérêt en fonction du temps, de la
température et du pH.  2) l'isolement et l'identification des micro-organismes généralement retrouvés dans les urines
d'adultes sains.  3) l'étude générale et plus particulière des effets d'une contamination bactérienne sur les
stéroïdes d'urines soumises à des conditions favorisant l'activité bactérienne.  4) l'étude de l'inhibition de la dégradation des stéroïdes d'urines fortement contaminées.  Nous avons constaté, dans un premier temps, que tous les stéroïdes androgènes sulfo et
glucuroconjugués étaient très stables lorsque soumis aux conditions pouvant être imposées à
certaines urines avant leur analyse. La seule exception étant la déhydroépiandrostérone (DHEA)
sulfoconjuguée. Nous avons recensé les micro-organismes de 177 urines et constaté que plus de
95% étaient contaminées avant l'analyse, généralement parE. coli ou une variété de
staphylocoques ou d'entérocoques. Nos expériences nous ont aussi permis de soutenir les
résultats précédents du groupe de Ayotte et al., 1996 après avoir observé que la dégradation
bactérienne des stéroïdes mène généralement à la déconjugaison des stéroïdes puis à leur
oxydation, résultats reproduits à l'aide de standards authentiques et d'isolats bactériens ou de
cellules en milieu artificiel. De plus, une souche bactérienne d'Aeromonas salmonicida a été
incapable d'oxyder un stéroïde androgène sous sa forme glucuroconjugué tout en ayant de la
facilité à oxyder la forme libre. Nous avons aussi observé la production de stéroïdes d'intérêt tels
la testostérone et la Sa.-dihydrotestostérone à partir de précurseurs endogènes, soient la DHEA,
l'androstèn-3~,17(3-diol et le Sa.-androstan-3~,17~-diol. Toutefois, la présence de ces
intermédiaires, aussitôt oxydés, dans le milieu fut très brève. Enfin, nous nous sommes assurés
que la congélation des échantillons et l'utilisation des agents bactéricides NaN3 et HgCh sont des
moyens efficaces d'éviter l'éventuelle dégradation d'une urine fortement contaminée.  La mesure de la variation du pH au cours de l'incubation de 177 urines nous a permis de conclure
que le pH élevé d'une urine lors de son analyse indique bel et bien l'activité microbienne mais
pas nécessairement la dégradation des stéroïdes. La différence des pH au moment de la collecte
et de l'analyse n'est pas un meilleur paramètre. Nous pouvons conclure par contre que l'analyse de stéroïdes endogènes et/ou des androstandiones dans la fraction libre de l'extraction est un
signe évident de dégradation des stéroïdes.


identifier: Bégin, Isabelle  (1998). MISE AU POINT D'UNE MÉTHODE DE MESURE DE LA PROLIFÉRATION DES HÉPATOCYTES DE RAT EN CULTURE ET ÉVALUATION DU POTENTIEL MITOGÈNE DE L'HCB ET DE CERTAINES COMPOSANTES STÉROÏDIENNES  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en science, 111 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. La littérature relate un nombre croissant de facteurs environnementaux
susceptibles d'augmenter l'incidence du cancer chez l'humain. Une classe importante de
contaminants environnementaux est celle des organochlorés. L'hexachlorobenzène
(HCB) en est un membre important quant à l'exposition humaine. L'HCB a un effet
hépatocancérogène chez le rat et cet effet est plus grand chez la femelle que chez le mâle
(Lambert et al., 1983; Smith et Cabral, 1980; Smith et al., 1985). L 'HCB est un
cancérogène de type épigénétique. Un aspect mécanistique important par lequel les
cancérogènes épigénétiques agissent est par l'augmentation de la prolifération cellulaire.
La connaissance du mécanisme d'action de l'HCB permettrait d'évaluer le risque
d'exposition chez l'humain. L'objectif des présents travaux est de déterminer si l'HCB induit la prolifération
des hépatocytes en culture et de déterminer si l'EGF ou certaines composantes
stéroïdiennes sont impliqués dans l'induction de l'effet hépatocancérogène de l'HCB.
Pour répondre à cet objectif deux sous-objectifs techniques ont été accomplis. Tout
d'abord, nous nous sommes assurés de la viabilité et de la reproductibilité de la
préparation d 'hépatocytes isolés chez les rats femelles. Deuxièmement, nous avons mis
au point une méthode de mesure non-radioactive de la prolifération cellulaire dans une
culture primaire d'hépatocytes cultivés en monocouche.  L'utilisation d'une méthode d'enrichissement de la préparation d'hépatocytes par
une centrifugation dans un milieu percoll à une densité de 1,06 g/ml a permis d'obtenir
une préparation d'hépatocytes avec une viabilité moyenne de 92% comparativement à 77
% pour les hépatocytes non enrichis. Contrairement aux hépatocytes non enrichis, les
èellules parenchymateuses viables enrichies au percoll ne présentent pas de cytotoxicité
lorsque soumises à des concentrations d'HCB variant de 10 à 100 J.LM.  Une nouvelle méthode de mesure de la prolifération des hépatocytes primaires
cultivés en monocouche a été mise au point. Cette méthode est basée sur l'incorporation
de la bromodéoxyuridine (BrdU) par les cellules en phase S, c'est-à-dire qui synthétisent
de l'ADN. Le nombre de cellules marquées est évalué par une méthode ELISA réalisée
directement dans les plaques multi-puits où s'est fait la culture des cellules; l'intensité de
l'absorbance est proportionnelle au nombre de molécules de BrdU réagissant avec
l'anticorps primaire. La méthode ELISA-BrdU a permis de détecter une prolifération
cellulaire significativement (p<0.05) différente entre les hépatocytes témoins, ceux traités
avec 10 ng/ml d'EGF et ceux traités avec 20 ng/ml d'EGF. La méthode d'incorporation
de CHJ-thyrnidine (quantifiée par scintillation) ne réussi pas a détecter de différence
significative (p>0.05) dans l'induction de la prolifération des hépatocytes soumis à 10
ng/ml comparativement à 20 ng/ml d'EGF.  Les hépatocytes primaires de rat femelle en monocouche traités avec 50 J.LM
d'HCB, en présence ou en absence d'EGF ou de 17B-estradiol, ont un taux de
prolifération des cellules parenchymateuses cultivées dans le milieu Williams'E
comparable à celui des témoins. Cependant, des travaux complémentaires ont montré que
l'HCB induit une augmentation de la prolifération des hépatocytes de rat mâle, cultivés
dans le milieu Leibovitz L-15. De plus, l'effet prolifératif induit par 1 nM d'estrone est
inhibé par 50 J.LM d'HCB. Les expériences ont démontré que 1 nM d'éthiocholanolone ou
1 nM de 5B-androstanedione produit respectivement une augmentation de 256 et 265% de
la prolifération des hépatocytes par rapport au groupe témoin. L'addition de 50J.LM d'HCB
n'amène aucune différence significative (p>0.05) sur le pouvoir mitogène de ces deux
stéroïdes sur les hépatocytes en culture. Les résultats de ces travaux nous incitent à émettre l'hypothèse que l'HCB induit
son effet hépatocancérogène chez le rat femelle en induisant une accumulation de certains
fi-androgènes, dont 1' androstanedione et 1' éthiocholanolone lesquels pourraient à leur tour
causer une augmentation de la prolifération cellulaire. Cette augmentation indirecte de la
prolifération cellulaire pourrait favoriser le développement de 1 'hépatocancérogenèse
chez le rat femelle. Enfin, l'HCB possède un effet rnitogène sur les hépatocytes primaires en monocouche qui est dépendant du type de milieu de culture employé. Les observations
effectuées dans ce mémoire suggèrent qu'une action directe ou indirecte (modulation des
stéroïdes) de l'HCB exerce un effet mitogène au niveau des hépatocytes. L'effet mitogène
pourrait donc servir à l'évaluation du risque cancérogène induit par l'HCB.


identifier: Létourneau, Myriam  (1999). Évaluation de méthodes de phosphorylation, de sulfatation et de cyclisation de l'endothéline-1  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 62 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.  Les endothélines forment une famille d'isopeptides vasoactifs caractérisés par une chaîne
de 21 acides aminés dont les extrémités amino et carboxy-terminales sont libres et par la
présence de deux ponts disulfures reliant les résidus cystéines des positions 3 et 11, ainsi
que 1 et 15. Étant donné leurs multiples actions physiologiques, ces peptides sont
associés à plusieurs pathophysiologies; ils suscitent donc un attrait particulier pour la
recherche scientifique en pharmacologie.  Trois isopeptides constituent la famille de l'endothéline: l'endothéline-1, l'endothéline-2 et
l'endothéline-3. Ces peptides peuvent interagir avec deux principaux types de récepteurs,
nommés ETA et ET a, selon une affinité qui leur est propre. Diverses études ont permis de
déterminer les éléments structuraux importants pour la liaison de ces peptides avec les
récepteurs. Ainsi, les extrémités amino et carboxy-terminales libres, les ponts disulfures,
le noyau d'acides aminés hydrophobes à l'extrémité carboxy-terminale et la région
regroupant trois acides aminés chargés sont des éléments clés pour l'activité biologique de
ces peptides. Ce dernier paramètre nous apparaît particulièrement important et par
conséquent, afin de déterminer le rôle joué par les acides aminés chargés négativement
dans la formation proposée d'un lien ionique intra ou intermoléculaire, des analogues
phosphatés et sulfatés de l'endothéline-1 ont été conçus avec 1' objectif de consolider ce
lien encore hypothétique toutefois. Étant donné que la synthèse de tels analogues de
l'endothéline-1 n'a pas encore été tentée, divers protocoles ont été évalués. De plus, l~
synthèse de ces analogues nécessitant la formation de ponts disulfures, les méthodes de
cyclisation ont donc également été étudiées.  Les analogues [Ser8P04]hET -1, [Thr8P04]hET -1, [Tyr8P04]hET -1 et [Tyr8S04]hET -1 ont
été assemblés par synthèse peptidique sur phase solide en utilisant des dérivés dont
l'amine-a est protégée par un groupe 9-fluorènylméthyloxycarbonyle (Fmoc). Deux
stratégies de protection orthogonale et de cyclisation des cystéines ont été étudiées. La
première a fait appel aux groupes protecteurs acétamidométhyle (Acm) pour les cystéines
en position 1 et 15 et aux grpupements triphénylméthyle (Trt) pour les résidus des
positions 3 et 11. La formation des ponts disulfures s'est effectuée successivement, en
solution, au moyen de deux agents d'oxydation différents: le ferricyanure de potassium et l'iode. La seconde méthode a privilégié l'usage des groupes protecteurs Trt pour les
cystéines en position 1 et 15, et les dérivés cystéines méthoxytriphénylméthyle (Mmt) aux
positions 3 et IL La première cyclisation a été réalisée sur résine, dans le
diméthylsulfoxyde (DMSO), au moyen d'une oxydation au ferricyanure de potassium. Le
dernier pont disulfure a quant à lui été formé en utilisant les mêmes agents oxydants mais
avec le peptide en solution.  Un protocole de phosphorylation globale a été choisi pour obtenir les analogues
phosphatés de l'endothéline-1. L'efficacité de trois agents de phosphorylation différents a
été étudiée, c'est-à-dire le di-t-butyle N,N-diéthylphosphoramidite, le dibenzyle N,Ndiisopropylphosphoramidite
et le dibenzylphosphochloridate. D'autre part, pour
l'analogue sulfaté de l'endothéline-1, un dérivé tyrosine déjà sulfaté, le N-a.-FmocTyr(
S04NH4)-COOH a été utilisé en tant que bloc de construction de la chaîne
peptidique. Les études menées sur les méthodes de cyclisation de l'endothéline-1 ont indiqué qu'une
cyclisation à l'iode des analogues peptidiques de l'endothéline provoque une oxydation
des résidus tryptophane et méthionine. La cyclisation sur résine, pour sa part, fait
toutefois appel à des conditions de réaction plus douces ce qui permet de réduire, voire
éviter, ces réactions indésirables. Par contre, cette méthode nécessite des conditions
minimisant un encombrement stérique et favorisant le repliement adéquat du peptide.
Les trois méthodes de phosphorylation évaluées n'ont pas permis d'obtenir en quantités
utiles les analogues phosphatés attendus de l'endothéline-1. Aussi, les analyses par
spectrométrie de masse ont confirmé que des réactions secondaires et irréversibles se sont
produites au cours d'une ou de plusieurs étapes menant à la formation des analogues
peptidiques.  Par contre, le protocole employé pour la formation de l'analogue sulfaté a conduit au
produit désiré au moyen d'une procédure simple et directe. Une optimisation des étapes
de ce protocole permettrait d'améliorer le rendement final de production de cet analogue.


identifier: D'Amours, Benoît  (2000). CARACTÉRISATION FONCTIONNELLE DE MUTANTS THERMOSENSIBLES PRÉCOCES-IMMÉDIATS DU CYTOMÉGALOVIRUS HUMAIN.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie.

abstract:
Le cytomégalovirus humain (HCMV) est un virus enveloppé au
génome d'ADN linéaire de 231 kb, dont la prévalence varie de 70 à
1 00% selon la population considérée. Appartenant à la famille des
herpesviridae, il possède comme ceux-ci la capacité de demeurer
présent à l'état latent dans l'organisme pour la durée de la vie de
son hôte. Disposant de mutants thermosensibles ( ts) ADN-, nous avons
déterminé quelles sont les protéines en cause et leur implication
dans le cycle de réplication du virus. Des expériences de sauvetage
de marqueurs et d'immunobuvardage de type Western ont permis
d'identifier les protéines mutées responsables du phénotype
thermosensible, soit la protéine IE1 (ts446) et deux isoformes de la
protéine IE2 (ts486 et ts504). Ces protéines sont responsables de
l'activation du cycle lytique, d'où l'intérêt de ces mutants. Le
séquençage des gènes codant pour ces protéines a ensuite conduit à
l'identification des substitutions d'acides aminés menant à une
déstabilisation de la structure de ces protéines à température
restrictive. Ces protéines, de type précoces-immédiates, sont les
premières exprimées lors de l'initiation de l'infection. Elles ont
pour rôle de faire démarrer la transcription des protéines
responsables de la réplication de l'ADN viral, et de leur expression
dépend la permissivité de la cellule hôte, ce qui leur confère une
importante fonction au niveau de l'établissement de l'état latent.
L'expression de ces protéines étant liée au degré de différenciation de la cellule, nous avons alors vérifié par hybridation de type
Northern et immunobuvardage de type Western l'expression de ces
protéines par les souches mutantes dans des lignées cellulaires avec
différents degrés de différenciation (Caco2, IAFP-1, AV3, THP-1 et
U-937), parfois en présence d'esters de phorbol. Les résultats
obtenus à ce jour montrent une expression aberrante de certaines de
ces protéines à température restrictive, variant selon la lignée
cellulaire utilisée et résultant probablement de l'accumulation de
ces protéines non-fonctionnelles, normalement autorégulatrices.
Ces mêmes résultats ont également permis d'identifier l'épissage
différentiel du gène IE1/2 comme facteur déterminant dans la
permissivité de la cellule.  Nous espérons que ces travaux permettront une meilleure
compréhension de l'établissement de l'état de latence, un phénomène
de très grande importance au niveau médical.


identifier: Gariépy, Marie-Claude  (2000). ÉTUDE DU MÉCANISME D'ACTION DE L' ACÉTYLE-XYLANE ESTÉRASE A DE STREPTOMYCES LIVIDANS.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 154 p.

abstract:
 L'acétyle-xylane estréase A (AxeA) de Streptomyces lividans hydrolyse
spécifiquement les liens esters unissant les groupements acétyles au xylane. Malgré le
fait que la spécificité d'action de l' AxeA soit connue, le mécanisme d'action de cette
enzyme n'est pas élucidé. La plupart des études, menées sur des enzymes estérases,
suggèrent que le mécanisme d'action de ces enzymes implique la participation de trois
acides aminés (Ser!His/ Asp) regroupés pour former une triade catalytique. En se basant
sur ces études, il est possible d'émettre l'hypothèse que le mode d'action de l' AxeA de
S. lividans est également basé sur une triade catalytique. L'objectif du projet de
recherche est d'identifier la sérine et l'histidine catalytique de l' AxeA de S. lividans. De
ce fait, par mutagenèse dirigée, des mutants histidines ont été produits. Ces mutants ont
par la suite été exprimés et purifiés jusqu'à homogénéité. Les tests d'activité effectués
sur ces mutants ont démontré une réduction de l'activité spécifique de 95% pour les
mutants H62A et HISSA. Dans le but de vérifier la présence d'une sérine nucléophile
chez 1' AxeA, cette enzyme a été modifiée chimiquement par deux différents inhibiteurs à
sérine active. Les tests d'activités effectués sur l'enzyme modifiée ont montré une
diminution jusqu'à 85% de l'activité spécifique de l'enzyme inhibée. Afin d'identifier la
sérine nucléophile, l' Ax.eA modifiée chimiquement a été digérée par une endoprotéinase
et les peptides obtenus ont été analysés par spectrométrie de masse. Aucun peptide ne
présentait un ajout de masse moléculaire correspondant à l'inhibiteur. A partir de ces
résultats, il n'a pas été possible d'identifier la sérine active de l' AxeA. Des hypothèses au
niveau des paramètres utilisés au spectromètre de masse, de l'accès limité à la sérine
catalytique et de 1' état de proto nation de 1 'enzyme ont été évoquées pour expliquer les
difficultés rencontrées pour l'identification de la sérine nucléophile.


identifier: Dupont, Maryse  (2000). Purification et caractérisation d'une estérase produite par Enterobacter cloacae hydrolysant les parabènes.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 90 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. Des travaux de purification et de caractérisation d'une enzyme produite par
Enterobacter cloacae hydrolysant les parabènes ont été entrepris afm de mieux
comprendre les mécanismes de résistance des microorganismes face aux parabènes.
L'enzyme a été purifiée par chromatographie liquide à haute pression à l'aide de 4
colonnes chromatographiques. La première fut une colonne cationique (CM Ap-2,
Waters), la seconde une colonne anionique (QMA, Waters), la troisième une
colonne cationique ayant des propriétés différentes à la première (CM Avicell,
Waters) et la dernière était un tamis moléculaire (Protein-Pack SW 300). Les
rendements obtenus lors de ces étapes de purification furent respectivement de 69.8
%, 48.7 %, 17.3% et 15.9% et les taux de purification par rapport à la fraction
initiale furent de 37.8, 67.6, 500 et 572.9 respectivement.  La purification a permis la détermination du poids moléculaire de l'enzyme qui a
tout d'abord été évalué à 55 000 Da par visualisation sur SDS-Page. Ensuite, le
poids moléculaire fut mesuré à 54 640 Da par spectrométrie de masse. Le point
isoélectrique fut également évalué à 6.9 par gel d'isofocalisation électrique. Suite à la purification de l'enzyme des travaux de séquençage ont été entrepris.
Lors de ces travaux, une séquence de 19 acides aminés correspondant à 1' extrémité
N-terminale fut déterminée (Gln-Glu-Leu-Ser-Pro-Val-Gln-Met-Ser-Lys-Gly-ThrIle-
Glu-Gly-Val-Lys-Asn-Asp). Une deuxième séquence interne fut déterminée par
spectrométrie de masse (Val-Ala-Pro-Thr-Glu). Une troisième séquence interne fut
déterminée par le séquençage d'un fragment obtenu par traitement de l'enzyme au
bromure de cyanogène (Ala-Gly-Tyr-Phe-Ala-Lys-Gly-Leu-Phe-Asn-Arg-Ala-IleVal-
Ser-Lys-Gly-Tyr). A partir de ces séquences, des oligonucléotides dégénérés
furent produits et plusieurs PCR furent effectués dans diverses contitions. Trois
produits d'amplification ont été clonés et séquençés. Cependant, aucun d'entre eux
ne correspondait à 1' estérase recherchée. Le premier gène correspondait à une
protéine de régulation (glycosyl-3-phosphate), le deuxième codait pour une
perméase (glycerol-3-phosphate) et le troisième codait pour une aminotransférase.
Un alignement de séquence fait à partir de la séquence obtenue par traitement au
bromure de cyanogène démontre une homologie avec 11 carboxylestérases
connues. Ceci laisse croire que l'enzyme purifiée en serait une carboxylestérase.  Un test d'inhibition au diisopropyl fluorophosphate (DFP) a été effectué. Le test a
démontré une inhibition complète de l'activité enzymatique ce qui indique que
l'estérase possède une sérine active au site catalytique.


identifier: Retamal, Miguel  (1999). ÉTUDE D'ANTICORPS MONOCLONAUX DIRIGÉS CONTRE LA NEURAMINIDASE DU VIRUS INFLUENZA PORCIN.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 99 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. Nous avons développé des anticorps monoclonaux pour le dépistage du virus influenza
porcin Québécois sur une base neuraminidasique et nous les avons caractérisé. Ces
anticorps non seulement nous indiquent l'étendue de l'évolution antigénique du virus au
sein du cheptel porcin, mais leur utilisation dans la création de variants nous offre des
renseignements sur la nature des mutations sur le terrain. Trois AcMo NA-spécifiques ont
été étudiés; 2H5, 3A3 et 204. 2H5 était spécifique de souche pour A/Sw/Qc/5393/91
(SwQc91 ), et 2D4 non spécifique de souche. Ces anticorps caractérisés de façon intrinsèque
en tant que molécules et extrinsèques en tant que réactifs, nous ont permis de pousser notre
étude jusqu'à l'identification des épitopes au niveau génique. En effet, sur le gène NA des
virus variants V2H5 et V2D4 sélectionnés avec les AcMo 2H5 et 2D4, une seule mutation
aux positions d'acides aminés 273 et 386 respectivement, a été détectée comme étant
associée à l'activité des anticorps. Toutefois certaines mutations ponctuelles (19 et 392) ne
sont pas dues à une quelconque pression immune humorale et pourraient être dues à une
pression sélective sur la NA par les cellules hôtes. Finalement, la quantité plutôt restreinte
d' AcMo spécifiques obtenus pour la souche SwQc91, est indice d'une faible évolution
antigénique de la NA entre deux épidémies de grippes porcines locales ayant mis en cause
les virus A/Sw/Qcl92/81 (SwQc81) et SwQc91 respectivement.


identifier: Duckett, Marie-France  (2000). ÉTUDE D'UNE SOUCHE BACTÉRIENNE ANAÉROBIE CAP ABLE DE TRANSFORMER LE PHÉNOL ET L'ACIDE 4- HYDROXYBENZOÏQUE EN ACIDE BENZOÏQUE.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 124 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. La souche 7 est une bactérie anaérobie stricte isolée originellement d'un consortium
méthanogène par des méthodes non conventionnelles (gradient de Percoll, dilutions) étant
donné qu'elle ne croissait pas sur milieu solide. Cette souche est capable de transformer
le phénol et l'acide 4-hydroxybenzoïque. Ainsi, elle carboxyle le phénol en acide 4-
hydroxybenzoïque puis déhydroxyle ce dernier en acide benzoïque (PHE ~ 40HB ~
BZ). Cette activité de transformation ne peut toutefois être maintenue qu'en présence
d'une autre bactérie (souche 6) ou d'un surnageant d'une culture de cette dernière. La
souche 7 est également capable de décarboxyler l'acide 4-hydroxybenzoïque en phénol
pour mener, par la suite, la transformation jusqu'à l'acide benzoïque (4-0HB ~ PHE ~
4-0HB ~ BZ). Dans ce cas, elle peut être active seule. Par contre, la souche 7
maintenue en absence de la souche 6 demeure une souche à croissance faible et le
maintien de son activité est difficile. L'objectif du présent projet était donc de
caractériser cette souche ainsi que d'identifier ses besoins spécifiques de manière à
optimiser sa croissance et son activité de transformation.  Il a d'abord été démontré que le maintien de l'activité au fil des repiquages était plus
facile lorsque l'acide 4-hydroxybenzoïque était fourni initialement dans les cultures plutôt
que le phénol. Toutefois, la variation de la concentration de cet acide n'a pas eu d'impact
sur la densité de la population de la souche 7. Cultivée en milieu très riche, la souche n'a
présenté aucune activité de transformation de l'acide 4-hydroxybenzoïque ou encore une
activité ralentie par rapport aux conditions standards de culture (milieu Boyd modifié
(BM)). Une importante stabilisation de la culture de la souche 7 ainsi qu'une stimulation
de son activité ont été obtenues lors de l'ajout de 36% (v/v) de surnageant d'une culture
autoclavée de la souche 6 ou de Clostridium butyricum au milieu BM. Il a été démontré
que le (ou les) facteur favorable à la souche 7 et fourni par la souche 6 et par Clostridium
butyricum est un facteur thermostable et qui résiste à l'oxygène. Également, il a été
déterminé qu'il est de faible poids moléculaire(	< 1000 Da). L'acide 3-phénylpropionique
a été retrouvé et identifié par GC-SM dans le surnageant de C. butyricum. La consommation de ce composé par la souche 7 a été démontrée mais ce dernier ne s'est pas
avéré être, à lui seul, responsable de l'effet positif procuré par le surnageant. D'autres
cultures de la souche 7 ont été faites en présence de coenzyme A ajouté au milieu. Ce
dernier a engendré un effet positif mais seulement lorsque ajouté au milieu BM
additionné de surnageants de cultures autoclavées de la souche 6 ou de C. butyricum.
Ainsi, il n'est pas, lui non plus, le seul élément responsable de l'effet positif. L'ajout de
sulfites, en faible concentration, a eu un effet stimulant pour la souche 7 alors qu'à plus
forte concentration (5 mM), cette dernière a été complètement inhibée. Les résultats ont
indiqué qu'une concentration de sulfites légèrement supérieure à celle trouvée dans le
milieu BM standard pourrait être à l'origine de l'effet positif du surnageant de la culture
autoclavée de la souche 6. L'ajout de sulfates n'a engendré, pour sa part, aucun effet.  Après plusieurs essais, des micro-colonies de la souche 7 ont été obtenues grâce à
l'addition du surnageant de la culture autoclavée de la souche 6 au milieu BM semi-solide
(0,3% (p/v) d'agar) contenu dans des tubes de culture allongés (Veillon) afin de bien
conserver l'anaérobiose. Les bactéries constituant les colonies ont été observées par
microscopie et se sont avérées être identiques à la forme de la souche 7 observée
précédemment en culture liquide. La souche isolée en culture pure, nommée LR7.2, a été
testée en culture liquide et elle a été capable de transformer le phénol en acide benzoïque.
Par contre, elle ne montrait désormais aucune décarboxylation de l'acide 4-
hydroxybenzoïque. Donc, la souche LR7.2 isolée en culture pure sur milieu semi-solide
par une méthode conventionnelle présente une activité légèrement différente de l'activité
de la souche 7 isolée en milieu liquide.


identifier: Donetti, Anna-Maria  (2000). Implication des rhamnolipides produits par la souche Pseudomonas aeruginosa 57RP durant l'évolution d'un biofilm  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 122 p.

abstract:
Plusieurs études ont porté sur les étapes d'initiation et de maturation de biofilms.
Cependant, peu d'entre elles ont porté sur les mécanismes impliqués dans la dispersion
des biofilms matures. Un biofilm est un microcosme composé de micro-colonies
attachées à une surface et entourées d'une matrice de polymères. Nous avons étudié une
souche de Pseudomonas aeruginosa capable de dégrader des hydrocarbures aromatiques
polycycliques et des n-alcanes. Cette souche, appelée souche 57RP était aussi capable de
produire des biosurfactants de type rhamnolipides et de former un biofilm. Le rôle des
rhamnolipides est encore mal connu. Une des hypothèses émises est que la souche 57RP
produit des biosurfactants à la maturation du biofilm pour favoriser le détachement et la
dispersion des cellules. Par conséquent, 1 'objectif poursuivi dans ce projet était de voir
l'effet des rhamnolipides sur la dispersion des cellules du bio film. Méthodologie : Pour vérifier cette hypothèse, nous avons introduit le gène codant
pour la protéine fluorescente verte, dénommé la GFP, dans la souche 57RP. La souche
57RP ayant acquis la GFP était devenue la souche PM 18. De plus, nous avons étudié une
souche 57RP mutante (57RP-98) dans laquelle la synthèse des rhamnolipides a été
inactivée. La 57RP-98 a été mutée au niveau du gène rh/A . Ces deux souches ont été
cultivées séparément, puis ensemble dans des cultures en cuvées et dans des chambres à
flux continu pour la fonnation de biofilms. Les biofilms ont été visualisés au microscope
confocal à balayage au laser. Pour visualiser les cellules de la souche 57RP-98, une
hybridation in situ avec une sonde universelle aux eubactéries (Eub338) a été faite.  Résultats : L'examen au microscope confocal a révélé que l'architecture du bio film
de la souche 57RP-98 et de celui de la souche PM18 était presque identique. Cependant,
les biofilms de PM18 étaient plus minces que ceux de 57RP-98. Ces résultats
suggéraient que les rhamnolipides étaient impliqués dans la dispersion des cellules. Pour
appuyer ces observations, une solution de rhamnolipides de 0,1% a été ajoutée aux
biofilms de PM18 et de 57RP-98. Les résultats ont montré que les rhamnolipides
favorisaient la dispersion des cellules de 57RP-98 et peu celles de PM18. En outre, rexamen des biofilms composés des deux souches a montré que les cellules de PM18
étaient dominantes à la surface du biofilm tandis que les cellules de 57RP-98 l'étaient
près de la surface d'attachement. Ces observations suggéraient que les rhamnolipides
étaient aussi impliqués dans le phénomène de fourmillement (swarming). Des résultats
obtenus dans le laboratoire de Richard Villemur impliqueraient le gène rh/A directement
dans le mouvement de fourmillement chez la 57RP.  Conclusion : La GFP constitue un outil intéressant pour l'étude des biofilms en
temps réel. Les rhamnolipides semblent n'avoir aucun impact sur l'architecture du
biofilm. Cependant, ils pourraient être impliqués dans la dispersion des cellules. Les
résultats ont montré aussi que l'un des gènes responsable de la synthèse des
rhamnolipides, le gène rh/A pourrait être particulièrement responsable du phénomène de
fourmillement. Le fourmillement est probablement une façon de permette aux bactéries
de se déplacer dans un bio film pour se disperser.


identifier: Welman, Mélanie  (1999). SÉQUENÇAGE DU GÈNE DE LA PROTÉINE DE LA MATRICE DU VIRUS INFLUENZA PORCIN ET EXPRESSION DE LA PROTÉINE Ml RECOMBINANTE.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 150 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. Une étude réalisée avec la protéine de la matrice (M) d'un variant antigénique
d'influenza porcin (HIN1), nonun! A/Sw/Québed5393J91 (SwQc91), associé à la
pneumonie proliférative et nécrosante a été effectuée. Les séquences nucléotidiques et en
acides aminés (aa) obtenues pour les protéines M 1 et M2, codées par le gène de la protéine
M, du variant SwQc91, ont permis de comparer les changements génomiques internes
associés à la protéine M 1 et externes, associés à la protéine M2, observés pour SwQc91
comparativement à une souche classique d'influenza porcin nommée A/Sw/Québed192/81
(SwQc81). Des études portant sur l'e~ression de la protéine M 1 dans le vecteur prooeryote
pET21(a), sur l'antigénicité ainsi que sur l'imnunogénicité de la protéine M 1 recombinante
(PMR) ont également été effectuées. L'étude génorrùque a permis de constater que la protéine M 1 a un taux de mutation
de O,OSO/o alors que la protéine M2 a un taux de 0,51% ce qui est comparable à la protéine la
plus variable du virus; la protéine hémagglutinine (HA) (0,4%-0,48%). La production de la
PMRdans le vecteur pET21(a) a permis d'obtenir une protéine, présente en partie dans les
corps d'inclusion de la bactérie BL-21(DE3), ayant une masse moléculaire (Mr) de 28 kDa.
De plus, une quantité maximale de PMR a pu être obtenue en induisant la suspension
bactérienneà 37oC avec 1 mM d'isopropyl-~-D-thiogala:toside (IPTG) pendant 12 heures
et le rendement obtenu, suite à la purification et à la conoentration de la PMR. a été évalué à
2,5 mg/ml par 200 ml de suspension bactérienne. L'étude portant sur l'antigénicité semble
démontrer la stabilité de la PMR ainsi que l'intégrité de ses 4 épitopes, même après
traitement avec du SDS. La PM R semble être un bon irnmtmogène puisque des titres élevés
en anticorps (Ac) anti-PMR (64 000) lorsque le virus était utilisé co~ antigène (Ag) et
256 000 lorsque la PMR était utilisée coinille Ag ont été détectés par ÉLISA indirect. Cette
expérience démontre également la grande sensibilité de la PM R co~ Ag puisqu'en utilisant
une conoentratbn de 1 J..lglrnl, il a été possible de détecter rapidement des titres élevés en Ac.


identifier: Pishvai Bazargani, Hamed  (2016). Integrated photonic devices for optical pulse shaping, processing and measurement.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en télécommunications, 255 p.

subject:
dispositifs photoniques intégrés
impulsions optiques sur puce

abstract:
Over the last decade significant increase in internet access, high speed communication, high
definition media streaming and high volume cloud storage have affected our daily lives. This has
resulted in an unprecedented demand in the speed and volume of data transfer. To overcome the
severe speed limitations of present electronic circuits, which are practically limited to processing
and switching speeds below a few tens of GHz, all-optical or alternatively electro-optical solutions
have attracted considerable attention, offering generation/processing speeds from 10s of GHz to
several THz. Over the years engineers have moved light ever closer to the heart of computing
systems, the microprocessor, in order to keep up with the switching and processing speeds required
to manipulate the gigantic amount of data being passed to telecommunication networks. This topic
is particularly important for applications in data centers (Data centers consist of a large group of networked computer servers typically used by organizations for the
remote storage, processing, or distribution of large amounts of data.),  due to the limitations of electronics
circuits and copper wires in handling and processing high data rates.
In particular, silicon photonics is seen as a great foundation for optics and electronics to meet.
Leveraging from mature complementary metal oxide semiconductor (CMOS) fabrication process,
silicon photonics offers wafer scale testing, low cost packaging, scaling to high levels of integration,
solves electrical interconnect limitation in data centers, supercomputers and integrated circuits.
Despite all the advantages offered by silicon photonics, it has been mostly implemented in
interconnects and/or switching applications in industry. Significant effort has been put into
development of signal processing building blocks, which already exist in electronics, alternatively
in optical domain with unprecedented operation bandwidths (processing speeds). These signal
processors generally fall into two categories: (1) linear optics and (2) nonlinear optics-based
devices. Linear optics signal processors are of higher interest in telecommunications, because they
usually work with lower levels of power (few to tens of milliwatts). These processors offer 100 to
1000 times improvement in processing speed as compared with their electronic counterparts.
The main objective of this Thesis is to develop integrated photonics devices for on-chip optical
pulse shaping, processing and measurement. The Thesis includes proposals and developments of
novel theories, designs, numerical analysis, layout preparations and experimental demonstrations.
Specific accomplishements of this Thesis include:
a) Proposal and development of a novel theoretical frame work, namely discrete space-totime
mapping in cascaded co-directional couplers, enabling practical on-chip arbitrary
optical pulse shaping with time resolutions ranging from a few femtoseconds up to the subnanosecond
regime.
b) Modelling, layout design and experimental demonstration of on-chip optical pulse shaping
devices based on discrete space-to-time mapping theory. Demonstrated functionalities
include: (1) high quality sub-picosecond/picosecond flat-top pulse generation; (2)
Tsymbol/s optical phase coded bit-packet generation; (3) Tsymbol/s optical phase and
amplitude coded bit-packet generation.
c) Proposal and development of a nondispersive, tunable band-pass/band-reject filtering
scheme using photonics Hilbert transformers (PHTs) incorporated in a Michelson
interferometer. By controlling the central frequency of PHTs with respect to each other,
both the central frequency and the spectral width of the rejection/pass bands of the filter
are proved to be tunable. In this project bandwidth tuning from 260 MHz to 60 GHz is
numerically demonstrated using two readily feasible fiber Bragg grating-based PHTs. The
designed filter offers a high extinction ratio between the pass band and rejection band
(>20dB in the narrow-band filtering case) with a very sharp transition with a slope of 170-
dB/GHz from rejection to pass band.
d) Proposal, modelling, layout design and experimental demonstration of on-chip fractional
and integer-order PHTs on silicon-on-insulator (SOI) wafer, based on laterally apodized
integrated waveguide Bragg gratings. In this work high-performance photonic integer and
fractional-order Hilbert transformers, with processing bandwidths above 750 GHz, have
been experimentally realized.
e) Experimental demonstration of on-chip, single-shot and real-time phase characterization
of GHz-rate optical telecommunication signals. In particular, phase reconstruction based
on optical ultrafast differentiation (PROUD) is implemented using an integratedwaveguide
Mach-Zehnder Interferometer (MZI) to demonstrate self-referenced phase
characterization of GHz-rate complex modulated signals (e.g. Quadrature Phase Shift
Keying(QPSK), and Amplitude Phase Shift Keying (APSK) modulation formats), through
a single-shot and real-time technique.
Finally, I strongly believe that the ideas, techniques and devices demonstrated throughout this
Thesis can contribute to the development of novel integrated-waveguide all-optical/electro-optical
processors.


identifier: Breton, Anouk  (2000). Rôle de PKC-a dans la phagocytose et les signaux de transduction médiés par les récepteurs Fe  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 88 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.  Les macrophages sont des cellules effectrices qui jouent un rôle essentiel dans la réponse
immunitaire de l'hôte. La phagocytose, qui représente la principale fonction de ces cellules,
consiste en la capture et la destruction des pathogènes, microorganismes invasifs, cellules
sénescentes et débris cellulaires. Des études précédentes effectuées avec des inhibiteurs de la
protéine kinase C (PKC), révèlent que l'activation de cette enzyme est une étape essentielle dans
l'ingestion par les macrophages, de particules opsonisées. L'état actuel de nos connaissances ne nous permet pas de dire lequel(s) des six
isoenzymes de PKC exprimés chez le macrophage est impliquée dans la phagocytose et
l'ingestion de particul~s. Nous avons donc entrepris l'étude du rôle de l'isoenzyme a en
surexprimant un mutant dominant-négatif (DN) de cet isoenzyme, dans la lignée de macrophage
murin RA W 264.7. La surexpression du mutant DN PKC-a. ne semble pas avoir d'effets sur
l'attachement des érythrocytes opsonisés par des immunoglobulines de type G (IgG-SRBC), mais
diminue leur internalisation.  Une analyse des signaux de transduction induits par les érythrocytes opsonisés (lgGSRBC),
révèlent que la surexpression d'un mutant DN PKC-a. inhibe la phosphorylation de ERK
112 médiée par les FeR, ainsi que l'activation de V av. Cependant, l'activation de Syk et de la PI
3-Kinase semblent normales dans ces même mutants et la dégradation de lK:B n'a pas lieu.
Certaines de ces observations suggèrent donc un rôle pour PKC-a. dans la phagocytose et
également dans la transduction des signaux médiés par les FcyR. Nous avons également vérifié
ce qu'il advenait des voies d'activation des MAP kinases et de hcB chez les macrophages prétraités
à l'interféron-gamma (IFN-y). Nous avons observé que la phosphorylation de ERK dans les macrophages contrôles pré-traités à l'IFN-y demeure intacte et que cette phosphorylation est
toujours absente dans les macrophages DN PKC-a. De plus, la phosphorylation des deux autres
MAP kinases, soient JNK et p38, est observée suite à la stimulation via les FeR. et ce, autant dans
les macrophages contrôles, que dans les clones surexprimant le mutant DN PKC-a. Également,
une dégradation d'llcB est observée uniquement chez les macrophages contrôles suite à la
stimulation par les SRBC-IgG.


identifier: Bah, Aliou  (2000). Contribution à la caractérisation moléculaire du granulovirus de la tordeuse des bourgeons de l'épinette.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie et biotechnologie, 107 p.

abstract: Document sans résumé


identifier: Beaulieu, Maude  (2000). ETUDE DE L'EVOLUTION DE LA DIVERSITE MICROBIENNE LORS DU PROCESSUS D'ACTIVATION D'UN SOL POUR LA BIODÉGRADATION DU PENTACHLOROPHÉNOL  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 133 p.

abstract:
Un sol légèrement contaminé au pentachlorophénol (2,3 mg/kg de sol) a été
utilisé pour la production de deux types de sols activés en phase boueuse (soVeau: 10
% poids/volume) en bioréacteurs de 10 litres. Le premier bioréateur a été activé à
l'aide d'une solution alcaline de PCP et le bioréacteur #2 a été activé à l'aide d'un
mélange de PCP dissous dans une solution de préservation du bois. Cette technique a
permis le développement rapide et spécifique d'une biomasse performante pour la
biodégradation du PCP. En effet, la dégradation du PCP a été supérieure à 99% et des
taux moyens de dégradation de 21 et 22 mg/1 par jour ont été atteint pour les réacteurs
#1 et #2 respectivement. Les taux de dégradation maximaux sont passés de 19 à 132
mg/1 par jour pour le réacteur #1 et de 41 à 112 mg/1 par jour pour le réacteur #2. Le présent travail a porté sur 1' étude de 1' évolution de la diversité microbienne
lors de l'établissement du processus d'activation du sol. Tout d'abord, les gènes pcpB,
codant pour la PCP-4-monooxygénase, ont été détectés et suivis dans les bioréacteurs
grâce à l'utilisation du PCR en présence d'amorces spécifiques à ces gènes. Cela a
permis de constater l'apparition d'un signal témoignant de la présence de ceux-ci dès
le 13ïème jour du processus d'activation et ce pour les deux biorécteurs. Les gènes
pcpB ont aussi été quantifiés. La technique du PCR compétitif a été utilisée et a
permis de déduire le nombre de copie de ces gènes dans les échantillons analysés. Les
bioréacteurs # 1 et #2 contenaient 4,5 x 106 gènes pcpB par ml et 12 x 106 gènes pcpB
par ml aux jours 40 et 31 respectivement. Une génothèque des gènes pcpB a été construite et plus d'une centaine de
clones ont été criblés. Pannis ceux-ci, 16 clones ont été sélectionnés et leur gène pcpB
séquencé; puis, une analyse phylogénétique a été réalisée. Les séquences des gènes
pcpB de 12 de ces clones étaient très similaires à la séquence du gène pcpB de la
souche Sphingomonas sp. UG30; alors que les 4 autres séquences étaient similaires
aux séquences des gènes pcpB des souches S. jlava et S. chlorophenolica. Ces trois
microorganismes sont reconnus pour leur capacité de biodégradation du
pentachlorophénol. L'analyse phylogénétique a permis de découvrir un groupe de
trois séquences des gènes pcpB très éloignées génétiquement des bactéries de
référence ci-haut mentionnées. Le suivi de la microflore totale a été effectué via 1 'utilisation du PCR en
présence d'amorces universelles pour les gènes de l'ARN 16S ribosomal des
eubactéries. La méthode SSCP a été employée pour visualiser l'évolution de la
diversité microbienne dans les bioréacteurs pendant les 80 jours du processus
d'activation du sol. Dans le cas du bioréateur #1, cette technique a réussi à démontrer
visuellement des changements dans la microflore, à savoir une diminution de la
diversité totale occasionnée par le développement spécifique d'une biomasse
particulière dégradant le PCP. Dans le cas du bioréacteurs #2, la diversité est restée
beaucoup plus complexe.  Une génothèque des gènes de l' ARN 16S ribosomal a été construite et
plusieurs centaines de clones ont été criblés. En tout, 14 clones ont été sélectionnés et
leurs gènes séquencés. Les séquences des gènes ont été regoupées en trois catégories:
1) 5 séquences étaient similaires aux séquences des gènes de 1' ARNr 16S de bactéries
provenants d'échantillons de l'environnement; 2) 6 séquences étaient similaires aux
séquence des gènes de l'ARNr 16S de bactéries de la famille des a.-Proteobacteria; et
3) 3 séquences étaient similaires aux séquences des gènes de l'ARNr 16S de bactéries
de la famille des Cytophagales.

 Two activated soils were generated in a previous work (Becaert et al., 2000),
one acclimated with PCP and the second with a wood preservative mixture (WPM)
containing severa! pollutants such as PCP, petroleum hydrocarbons and
polychlorinated dioxins and furans. The impact of these compounds on the microbial
diversity was studied using molecular approaches. PCR amplification of the 168
rDNA gene sequences was carried out with total DNA extracted from soil samples
taken at different time during the acclimation process of each reactor. The
composition of these PCR products, reflecting the microbial diversity, was monitored
by the single-strand-conformation polymorphism (88CP) method. Our results showed
that the complexity of the 88CP patterns in the PCP reactor decreased significantly
during the activation process whereas they remained complex in the WPM reactor.
Cloning and sequencing of the 168 PCR products followed by a phylogenic analysis
revealed that, in the PCP reactor, most of the clones were related to the genus
Sphingomonas. These results showed that the activation with PCP resulted in a
selection of few microorganisms. Furthermore, Bécaert et al. (2000) also showed the
appearance by PCR of pcpB sequence, encoding for the PCP-4-monooxygenase in
Sphingomonas bacteria, during the activation process in both reactors. Cloning and
sequencing of PCR amplified pcpB sequences revealed that most of the clones were
related to Sphingomonas sp. strain UG30 pcpB. However, three pcpB clones were not
closely related to the three known Sphingomonas pcpB genes.


identifier: Gagné, Yanie  (2016). Les dessous de la production de logements à Villeray : interactions, coalitions, stratégies  Rapport-stage.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en études urbaines, 130 p.

subject:
logement
coopérative
coalition de discours
interaction
négociation
acteur
communautaire
Québec
Discourse coalition
cooperative housing
interaction
negociation
community
group
actors
Quebec

abstract:
Ce rapport de recherche est la conclusion du stage de recherche réalisé auprès d’un groupe de défense des droits des locataires, l’Association des locataires de Villeray, à l’été et à l’automne 2014. Il porte sur l’étude d’un projet de développement résidentiel situé dans un ancien secteur industriel du quartier Villeray. Il permet de s’intéresser au rôle qu’ont joué les acteurs (communautaires, municipaux, de l’immobilier) dans l’ajustement du projet au milieu dans lequel il prend place. Selon cette optique, il s’agissait de se pencher sur les interactions et les stratégies mises en place par des acteurs pour s’organiser et influencer le projet. Pour ce faire, des séances d’observation et de recherche documentaire ont été réalisées avec les acteurs clefs, de même que des entretiens. L’analyse des informations recueillies a permis d’identifier des éléments clefs du processus de négociation et de mise en oeuvre du projet. Particulièrement, il s’en dégage deux pistes de réflexion: la création d’un espace de transition (d’espace tampon) qui permet des négociations indirectes entre des acteurs qui ne partagent pas la même conception des enjeux ET la transition d’une coalition d’acteurs (formelle) à une coalition de discours (informelle).

 This document is the conclusion of a research internship made with a Tenants’ Rights group, L’association des locataires de Villeray, during the Spring and Summer 2014. The objective of this document was to investigate a residential redevelopment project in a former industrial area located in the Villeray neighborhood. It allowed us to examine the role played by various actors (from the community groups, the city and real estate) toward the adjustment of the project in the neighborhood in which it took place. In that perspective, we wanted to study the interactions and strategies put in place by these actors in order to get organized and influence the project. To meet this goal, direct observation and documentary research were conducted with key actors as well as semi-focused interviews. The analysis of the information collected allowed us to identify key elements in the negociation and construction processes. More specifically, two elements stand out: the creation of a transitional space (a buffer zone) to allow indirect negociations between actors who don’t share the same understanding of the issues AND the transition from a coalition of actors (formal) to a coalition of discourse (informal).