identifier: Choisi, Thérèsa Jessy  (2010). L'hormone anti-mullerienne : expression, regulation et biomarqueur des follicules ovariens  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 138 p.

subject: Ovaire

abstract:
La vie reproductive d'une femme  est limitée  par le nombre de ses gamètes.  Les follicules primordiaux  sont  la forme de réserve  de ces gamètes  et leur nombre  est  défini  dès la naissance chez  la femme.  Etant  non  renouvelables, ils  sont  une  source  épuisable  pour  sa  fertilité.  Dans l'ovaire, les follicules  primordiaux sont  en quiescence et peuvent  le rester  durant  des décennies chez  la  femme.  Une  fois  activés,  ils  évoluent   en  différents  stades  de  maturation   (follicules primaires,  secondaires  et  antraux)  qui  reflètent  une  fertilité  à moyen  et  court  terme.  Chez  la femme,  la perte des  follicules  ovariens  est constante  et aboutit  à l'apparition d'une ménopause après plusieurs dizaines  d'années. Plusieurs  expositions ovo-toxiques environnementales peuvent accélérer la perte des follicules et conduire à une ménopause  précoce.

L'estimation de  la réserve  ovarienne  (l'ensemble des  follicules  ovariens)  devient  une préoccupation  pertinente  ces demières.années. En  effet,  l'amélioration des  taux  de survie  aux cancers chez des femmes en âge de procréer,  l'augmentation des expositions environnementales potentiellement  ovo-toxiques  et le recul de l'âge  auquel  les femmes  ont leur premier enfant ont accru  la  nécessité  d'avoir des  outils  permettant   d'évaluer  la  taille  de  la  réserve  ovarienne. Plusieurs  biomarqueurs  sont utilisés  afin de déterminer  la taille de la réserve ovarienne à moyen et court  terme#x0003B toutefois,  leur capacité  à prédire  la réserve  ovarienne  à long  terme et les stades folliculaires  qu'ils   reflètent   le  plus  sont  méconnus.   Actuellement,   aucuns   biomarqueurs   ne donnent accès au nombre de follicules  primordiaux.

Des études épidémiologiques chez la femme et, d'autres menées sur des souris ont démontré que le taux sérique d'hormone anti-Müllerienne (AMH)  reflétait  la fertilité  et qu'il  serait  corrélé au nombre de follicules primordiaux  (fertilité à long terme). L'AMH serait le meilleur candidat pour évaluer le nombre de follicules primordiaux comparé aux biomarqueurs couramment  utilisé pour évaluer  la  réserve  ovarienne   (la  FSH,  l'œstradiol  et  l'inhibine  B).  Afin  de  comparer   ces biomarqueurs  et  déterminer   leur  lien  avec  le  nombre  de  follicules  primordiaux,  nous  avons élaboré un modèle in vivo dans lequel la population  folliculaire est modulée. En effet, 4 groupes de souris (CD-1) ont été exposées,  par voie intra  péritonéale,  au 4-Vinylcyclohexène diepoxide (VCD), un agent ovo-toxique  ciblant les petits follicules,  à des doses et périodes différentes  (80-
160 mglkg/j) ou le véhicule pour le groupe contrôle (DMSO/saline). Des sacrifices ont eu lieu 21,

41 et 61 jours après la première  injection.  La pesée des souris et de divers organes n'ont  montré aucune  toxicité  non  spécifique  du  VCD. Toutes  les souris  exposées  au VCD  présentaient  une diminution  significative  du nombre  de follicules  primordiaux et petits primaires quelques soit le point de temps observé.  Par contre ce n'est  que 41j après la première exposition  qu'on  observe une diminution  significative du  taux  d'AMH sérique  (psc0.05)  lorsque  le nombre  de follicules secondaires  diminuent  chez  les groupes  traités  au VCD. En comparaison, le taux d'inhibine B diminue également  chez tous les groupes traitées au VCD à 41j (psc0.05) mais pas à 61j (psc0.05), tandis que celui de la FSH augmente significativement à partir de 4lj uniquement  pour le groupes traité avec  la plus  forte  dose  de  VCD  (160  mglkg/j-20j, 41  et  6lj, psc0.05).  Le  taux  sérique d'œstradiol ne présente  aucun changement  significatif quelques  soit le point de temps (psc0.05). Seule l'AMH sérique  présente  une corrélation  avec le nombre de follicules primordiaux  (Test de Pearson, r=0.31-0.61) et avec le nombre de follicules en croissance  (r-0.5-0.7) à tous les points de temps. Les autres  biomarqueurs ne présentent  aucune  corrélation  entre leur taux sérique et le nombre de follicules  primordiaux à tous les points de temps. Etonnamment  la diminution sérique d'AMH  n'est  pas reflétée  dans l'ovaire par une diminution  de l'expression protéique de l'AMH que sc soit à 2lj et 4Ij. Les cellules  de la granulosa  pourraient  accroître leur production en AMH et/ou diminuer  la libération  de l'AMH  dans la circulation  sanguine.  L'AMH  sérique semble être le meilleur  biomarqueur de la réserve  ovarienne  parmi ceux  testés. De plus, l'AMH permettrait d'évaluer l'impact d'ovo-toxique sur la réserve ovarienne  dans son ensemble  compte-tenu  de sa corrélation  avec  le nombre  de follicules  primordiaux et les follicules  en croissance.  Désormais, nous disposons  d'un  modèle  d'ovo-toxicité qui permettra  de tester d'autres bio-marqueurs  de la
réserve ovarienne.


identifier: Cloutier, Anik  (2009). Effets neuroprotecteurs et modulation du système antioxydant dans le cerveau par l'acide linoléique conjugé  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 112 p.

type:
Thèse
Non évalué par les pairs

subject: stress oxidation glutathion peroxyde hydrogene

abstract:
Le stress oxydatif est un phénomène qui se produit lorsqu'il y a déséquilibre entre la production d'espèces réactives de l'oxygène  (EROs) et la capacité antioxydante  de l'organisme. Ce phénomène semble être impliquée dans de nombreuses maladies, dont la maladie d'Alzheimer (MA) et la maladie de Parkinson (MP). Le système antioxydant est composé d'enzymes  tels que la superoxyde  dismutase (SOD),  la catalase (CAT),  la glutathion  peroxydase (GPx) et réductase (GR),  mais également  de  composés  non enzymatiques  comme  les vitamines  A, C et  E et  le glutathion (GSH). Le GSH est un composé  largement contenu dans le cerveau et jouant  un rôle important lors de la détoxification  des EROs. Les lipides sont des composés importants pour l'organisme,  en effet, les lipides de la famille des oméga-3 jouent un rôle lors du fonctionnement cérébral.  De plus, un acide gras de la famille des oméga-6, l'acide  linoléique conjuguée  (ALC), présentent des propriétés au niveau de la modulation du métabolisme énergétique, de la résistance à l'insuline, de la réponse immune et du cancer. Il a également été démontré que l'ALC induit une neuroprotection  face à la toxicité  induite par le glutamate, de même qu'une augmentation  de la concentration de GSH, par l'induction de la sous-unité catalytique de l'enzyme  responsable de sa synthèse,  la gamma-glutamylcystéine synthase  (y-GCS), dans  le foie.  Par contre,  peu d'études existent  quant à la neuroprotection  et  la propriété antioxydante  de  l'ALC, dans  le cerveau.  En sachant cela, notre hypothèse est que l'ALC possède un effet neuroprotecteur, suite à l'induction d'un  stress oxydatif, ainsi qu'une  propriété antioxydante, dans le cerveau. Nos résultats montrent que l'ALC  protège les cellules neuronales humaines, suite à l'induction  d'un stress oxydatifpar le peroxyde d'hydrogène, et selon  un mécanisme antioxydant.  Par la suite, en sachant  que l'ALC induit des effets bénéfiques au niveau cellulaire, l'effet  de l'ALC est étudié sur des homogénats de  structures  cérébrales.  Nos  résultats  démontrent  que  l'ALC  augmente  la  concentration  de glutathion  dans  les structures  cérébrales,  sans  effet sur  la y-GCS,  l'enzyme  responsable  de sa synthèse.  De  plus,  l'ALC  semble  réguler  le  système  antioxydant  en  augmentant   la capacité
antioxydante totale et en diminuant le niveau d'EROs et l'activité spécifique d'une  enzyme antioxydante,   la  glutathion-S-transférase   (GST).   De  ce  fait,  cette  étude  nous  renseigne  sur l'éventuelle   application   de   l'ALC   comme   outil   thérapeutique,   notamment   au   niveau   des dommages cérébraux causés par le stress oxydatif.


identifier: Colakyan, Klodia  (2006). Modulation of efflux of xenobiotics in multidrug resistant (MDR) cancer cell lines by pluronic block copolymers = Effet des copolymères en bloc de la famille des pluronics® comme modulateur de l'efflux de xénobiotiques dans les lignées cellulaires cancéreuses exprimant un phénotype de résistance aux drogues multiples (mdr)  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 137 p.

subject: cancer resistance

abstract:
L'émergence de la résistance aux drogues multiples (Mufti Drug Resistance, MDR) médiée par la surexpression de plusieurs protéines liant 1'ATP (ATP-Binding Cassette, ABC)  constitue un obstacle majeur qui limite souvent le succès des traitements ciblant certains cancers et autres maladies. Trois transporteurs ABC cliniquement représentatifs qui sont associés au MDR sont:  la protéine de perméabilité (Permeability Protein, P-gp), la protéine de résistance aux drogues multiples (Multidrug Resistant Protein 1, MRP1 ), et la protéine mammaire de résistance cancéreuse (Breast Cancer Resistant Protein, BCRP). Ces	transporteurs	fonctionnent	comme	des ''pompes 	à efflux'' 	transportant	les xénobiotiques à l'extérieur de la cellule.  La P-gp est aussi responsable du faible transport d'un  grand  nombre de  composés de  la  lumière intestinale à la  circulation sanguine. Conséquemment, la modulation de leurs activités peut être essentielle pour le succès des thérapies de plusieurs maladies, plus spécifiquement celles impliquant une chimiothérapie. Plusieurs modulateurs des systèmes d'efflux ont déjà été testés. Un type de modulateur sont les copolymères amphiphiliques en bloc (poloxamers) de la famille des Pluronics® et qui représenteront un intérêt particulier dans notre étude pour leur composition potentielle dans  la  formulation  de  drogues.  Les  Pluronics® sont  composés  de  poly(éthylène oxide)(PEO) et de poly(propylène oxide) (PPO), ayant une structure (PEO)x(PPO)y(PEO)x (Schmolka, 1977). Des études in vitro et in vivo précédentes ont démontré 1'habileté des Pluronics® à sensibiliser des cellules cancéreuses MDR surexprimant la P-gp (Alakhov et al., 1996; Yenne et al., 1996; Batrakova et al., 1996; Batrakova et al. 2003). Dans d'autres études utilisant des cellules transfectées avec MRP1 et MRP2 (cellules Madin Darby Canine  Kidney  (MDCKII),  et  des  cellules  cancéreuses de  poumon  résistantes  à  la doxorubicine et surexprimant MRP1 (cellules COR-L23\R), il a  été démontré que le Pluronic® P85 augmente l'accumulation de vinblastine et de doxorubicine. Cependant, le Pluronic® P85 n'a montré aucun effet d'augmentation de cytotoxicité de la doxorubicine dans les cellules résistantes COR-L23/R (Batrakova et al., 2003).
L'objectif général de notre étude est d'examiner in vitro l'effet des Pluronics® sur la fonction transporteur de trois protéines du type ABC impliquée dans la résistance aux drogues multiples: P-gp, BCRP et MRPl. Plus spécifiquement, au départ 21 copolymères ont été testés pour la détermination de la concentration critique de micellisation (CMC),une des propriétés de base des surfactants. Également, le niveau de leur activité à induire l'accumulation    du   substrat   rhodamine    123   (R123)   dans   les   cellules   cancéreuses mammaires (MCF-7 ADR) surexprimant la P-gp a été caractérisé.   Ensuite les Pluronics® L61 et P85 ont été sélectionnés pour d'autres  études afin de tester leur niveau inhibiteur à moduler l'activité  des transporteurs membranaire P-gp, MRP1 et, pour la première fois, la BCRP. Pour chaque transporteur, les études absorption et de cytotoxicité ont été effectuées sur les cellules cancéreuses mammaires résistantes à la doxorubicine (MCF-7 ADR) surexprimant  la  P-gp,  et les cellules  leucémiques  résistantes  à la doxorubicine  (HL-60
ADR)   surexprimant   la   MRPI.   Les  cellules   cancéreuses   mammaires   résistantes   au topotecan (MCF-7 TPT) surexprimant la BCRP ont été sélectionnées  progressivement  à partir des cellules MCF-7 parental exposées au topotecan hydrochloride (TPT). Les études d'accumulation  ont  examiné  l'influence  des  Pluronics® et  d'autres  inhibiteurs  d'efflux (cyclosporine  A, vérapamil, 1 7 B-estradiol, GF120918)  sur 1'accumulation  intracellulaire de différentes sondes comme substrat (rhodamine 123, fluorescéine, doxorubicine, mitoxantrone, topotecan). De plus, l'activité inhibitrice des Pluronics® a été comparée aux autres modulateurs d'efflux mentionnés ci-haut. Également, les tests de cytotoxicité ont déterminé la sensibilisation des cellules résistantes aux drogues cytotoxiques en présence du Pluronic® L61. Pour cela, les cellules ont été exposées à un traitement  de drogues polymères et la viabilité des cellules a été examinée à l'aide d'un test standard de XTT.
Les études  d'accumulation  ont démontré  que les cellules  MCF-7 ADR surexprimant  la  P-gp  ont  répondu  le  plus  aux  effets  inhibiteurs  des  Pluronics®. Les polymères hydrophobiques comme les Pluronics® L92, L61 et P123 à leur concentration maximale  d'efficacité ont  augmenté  l'accumulation   de  R123  dans  les  cellules  MCF-7
ADR, davantage que Pluronic® P85, le polymère moins hydrophobe. Les Pluronics® ont démontré  une  efficacité  limitée  pour  l'inhibition de  l'efflux  médié  par  la  BCRP  et le MRPI.  Les Pluronics® L61 et P85 ont été inefficaces à augmenter l'accumulation  de TPT dans les cellules MCF-7 TPT surexprimant la BCRP. Cependant les deux polymères ont augmenté l'accumulation  de R123 dans les cellules surexprimant la BCRP et la MRPI. Finalement, une augmentation similaire d'accumulation de R123 a été occasionnellement observée dans les cellules MCF-7 parentales, MRP1 et BCRP négative.  Cet effet noté ne semble  pas  être  lié  à  la  co-expression  de  la  P-gp,  puisqu'un   manque  d'activité   des inhibiteurs connus de la P-gp a été observé:  vérapamil et cyclosporine A  sur  les cellules HL ADR, et GF120918 sur les cellules MCF-7 TPT. Également dans nos etudes, l'effet observé des polymères sur les cellules HL ADR ne peut pas être clairement attribué à la surexpression de la MRPl.  Une observation importante a été faite au cours de l'étude portant sur la sélectivité du substrat pour les systèmes d'efflux  P-gp, MRPI  et BCRP inhibés par les Pluronics® et par d'autres inhibiteurs. Les Pluronics® L61 et P85 ont eu un effet inhibiteur en augmentant l'accumulation de tous les substrats testés: Rl23, doxorubicine, MTX et TPT. Cependant, ces mêmes polymères ont seulement démontré l'effet sur l'accumulation de la Rl23 dans les cellules surexprimant MRPI et BCRP. Les études de cytotoxicité ont démontré que 1'effet de sensibilisation du Pluronic® L61 a été plus important pour les cellules MCF-7 ADR surexprimant la P-gp que pour les cellules HL 60 ADR exprimant la MRPl.   Aucune sensibilisation n'a été observée sur les cellules MCF-7 TPT surexprimant la BCRP.
En conclusion, les Pluronics® sont très efficaces à inhiber l'efflux médié par la P gp, moins efficace pour la MRP1 et démontre une efficacité limitée pour la BCRP. Évidement nos travaux représentent des études préliminaires portant sur 1'effet des Pluronics® sur la résistance médiée par la BCRP. Dans le future, nous devrons prévoir des recherches plus détaillées en étendant le criblage des Pluronics® sur les cellules de type variées surexprimant la BCRP ou la MRPI.  Nous devrons aussi inclurè des investigations additionnelles portant  sur  l'influence  des  Pluronics® au  niveau  de  la  concentration intracellulaire d'ATP et au niveau de la viscosité membranaire cellulaire. De plus, pour des études plus détaillées sur les effets des Pluronics® et pour caractériser la contribution des transporteurs sur l'accumulation des substrats, des études à base d'expression et inhibition (expression par vecteur, siRNA) peuvent être envisagées. Ensuite ces études pourront
étendre sur d'autres transporteurs.


identifier: Constant, Philippe  (2008). Étude du cycle biogéochimique du dihydrogène et du mercure en utilisant une approche intégrée  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 215 p.

subject: troposphere environnement sol arctique ecosysteme subarctique atmosphere streptomyces neige

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.
Les  interactions   complexes  entre   le  climat   et  les  systèmes   biogéochimiques pourraient  amplifier  ou  atténuer  les  déséquilibres engendrés  par  l'activité  anthropique. C'est  dans cette  optique  qu'un   programme de recherche  a été entrepris  pour étudier  les dépôts  secs  du  dihydrogène (Hz)  et  déterminer  les  sources   potentielles   ainsi  que  la stabilité   du  méthyle   mercure   (MeHg)   détecté   dans   la  neige  subarctique.  Ces  deux processus  ont été sélectionnés non seulement en raison de leur importance  dans  le cycle biogéochimique du  Hz et du mercure  (Hg),  mais  aussi  à cause  de  leur susceptibilité au changement  global.  Les résultats obtenus  au cours  de ce programme  de recherche  ont été analysés    en   utilisant    une   approche    intégrée,    permettant    ainsi    d'identifier    leurs interrelations et de prédire l'impact  du changement global sur les réactions étudiées.
Environ 80% des pertes du Hz troposphérique sont causées  par son dépôt sec.  La résolution  spatiotemporelle des  dépôts  secs  du  H 2  est  présentement   limitée  par quatre études  réalisées  en  Eurasie  et  les  modèles  actuels  ne  permettent   pas  de  reproduire   la distribution    des   concentrations   de   Hz   troposphérique.   Les   concentrations   de   Hz
modélisées  sont  supérieures à celles  qui  sont  détectées  in situ, particulièrement dans  la région  de 1 'hémisphère nord.  Cette  différence fut attribuée  à une sous-estimation de  la vitesse  de dépôt  sec  du  Hz, un paramètre  dont  la  variation  est  extrapolée  à  partir  des travaux  réalisés  en  Eurasie.  Sachant  que  le Hz est  perçu comme  la source  d'énergie du futur et qu'il  est un gaz à effet de serre  indirect  impliqué  dans les réactions  contrôlant  la capacité oxydative de la troposphère, il devient  important d'identifier les paramètres environnementaux  modulant  son  dépôt  sec.   Les  pertes  de  Hz au  sol  seraient   dues  à l'activité  d'hydrogénases  à  forte   affinité   pour   le  Hz,  mais   aucun   micro-organisme démontrant  cette activité  métabolique  n'a  encore  été isolé. L'objectif de cette portion  du programme  de recherche  était donc de caractériser les dépôts secs du Hz de l'échelle écosystémique  à  l'échelle  microbiologique. Tout  d'abord,  l'établissement  d'un   bilan annuel  des flux  micrométéorologiques du  H2  a été entrepris  dans  une région  rurale.  Le site  représentait  un puits de  Hz, avec  une  vitesse  de dépôt  sec moyenne  de 0,15  cm s-1,une valeur qui se situe à la limite supérieure de celles rapportées  en Eurasie.  Le dépôt sec du Hz était optimal  lorsque  le sol était sec et que sa température  était supérieure  à  l0°C.
Après  avoir  établi  le  bilan  des  échanges  surface-air  du  H2, des  expériences  ont  été réalisées  en laboratoire afin d'identifier  des micro-organismes  pouvant être responsables de la consommation  du H2 observée. Une approche originale,  la chambre à microcosme dynamique  (DMC), a permis d'établir  une corrélation entre la maturation de l'activité  de consommation  du H2 et l'évolution  de la population microbienne colonisant un sol stérile. L'efficacité de cette stratégie fut démontrée  par 1'isolement de Streptomyces sp. PCB7, le premier  micro-organisme  ayant une forte affinité pour  le H2 troposphérique.  La consommation  du H2  serait  un métabolisme secondaire de la souche  PCB7, impliquant des hydrogénases de type NiFe à forte affinité pour le H2 (Km apparent de ll ppmv). La souche PCB7 pourrait devenir un micro-organisme modèle pour étudier l'activité de consommation  du H2 troposphérique en purifiant et en caractérisant ses hydrogénases.
Pour sa  part, le Hg est  un  métal  qui  se  retrouve  naturellement  dans  la croûte

terrestre.  En exploitant des ressources naturelles pour générer de l'énergie,  des quantités importantes  de  Hg sont  transférées  vers  l'atmosphère.   Ce  sont  ensuite  les  réactions d'oxydoréduction qui déterminent  la compartimentation  du  Hg, où les formes volatiles demeurent  dans l'atmosphère  alors que les formes réactives se déposent sur les surfaces humides. Des micro-organismes et/ou des réactions chimiques impliquant entre autres les acides  humiques  peuvent ensuite  transformer  le Hg déposé en  MeHg,  une neurotoxine bioaccumulable.   Des travaux  récents  ont  démontré  que  l'eau  de  la  fonte  des  neiges représente  une source importante de MeHg pour les écosystèmes arctiques. Le rôle exact de ce MeHg dans la contamination  du biota arctique demeure  néanmoins  obscur et les réactions  responsables de sa production sont encore inconnues.  Puisque les événements de  lessivage  du  mercure  atmosphérique   (ELMA)  sont  associés   à  un  dépôt  du  Hg atmosphérique  qui se retrouve alors sous forme biodisponible  dans la neige, des micro organismes  ou des réactions abiotiques  pourraient transformer  le Hg déposé en MeHg. Une étude  a donc été réalisée pour déterminer  l'impact  des  ELMA  printaniers sur  les concentrations  de MeHg du manteau neigeux d'un  écosystème subarctique.  Deux sources de MeHg ont été identifiées : ( 1) le dépôt des aérosols marins et (2) une production in situ lors de  la fonte des neiges. Alors que  le MeHg issu des aérosols  marins était  instable suivant  son  dépôt  atmosphérique,  le  MeHg  détecté  lors  de  la  fonte  des  neiges  était persistant et ses concentrations étaient corrélées avec celles des solides totaux, des solides totaux  volatils ainsi qu'avec  les dénombrements  de bactéries hétérotrophes cultivables. Les sites localisés en périphérie de parcelles d'arbres  et d'arbustes  étaient donc ceux où les concentrations de MeHg étaient les plus élevées, mais les données disponibles ne permettent pas de confirmer la nature biologique ou abiotique du MeHg détecté.
L'utilisation  d'une  approche  intégrée  a permis  d'élaborer  des  scénarios envisageables concernant l'impact du changement global de la biosphère sur le cycle biogéochimique  du H2  et du Hg. Puisque les écosystèmes  arctique  et subarctique sont ceux qui subiront la plus forte influence du réchauffement global, ils ont servis de modèle pour l'établissement des scénarios. L'analyse des résultats obtenus démontre qu'il est raisonnable d'anticiper que la variance des dépôts secs du H2 troposphérique ainsi que les décharges  printanières du MeHg via l'eau de la fonte des neiges augmentent en réponse au changement global.


identifier: Cortes, Laetitia  (2006). Étude des deux gènes de la famille Nramp chez Dictyostelium discoideum  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 143 p.

subject: gene proteine

abstract:
Les protéines de la famille  Nramp (Natural Resistance-Associated  Macrophage  Protein) sont des transporteurs de cations divalents et de protons de l'extérieur  de la cellule vers le cytoplasme. Des membres de la famille Nramp ont été caractérisés chez des eucaryotes et des  procaryotes,  où  ils  sont  appelés  MntH  (transporteur  de  manganèse  dépendant  du proton). Des analyses phylogénétiques suggèrent que cette famille a émergé chez les procaryotes où ces transporteurs participent à l'homéostasie de certains cations divalents et peut-être à la virulence de certains  pathogènes. Un gène mntH aurait été transféré au noyau  eucaryote  lors de  l'endosymbiose  à 1'origine  des  mitochondries  pour  donner  le gène eucaryote  Nramp ancestral, dont la duplication  aurait conduit à la divergence d'un Nramp «prototype» (proche du gène bactérien) et d'un  «archétype» {présent  uniquement chez les eucaryotes). L'archétype a persisté et a été dupliqué chez les vertébrés mais on trouve plusieurs copies de prototypes chez les levures, des mousses et certains organismes unicellulaires. L'amibe  sociale Dictyostelium discoideum possède un archétype (DdNR2) et un prototype (DdNRJ), et représente  un modèle de phagocyte ancestral.  L'archétype Nramp étant  associé  au transport  permettant  d'évacuer certains cations  du  phagosome suite à un repas phagocytaire, on peut se demander si cette spécialisation résulte de la duplication/divergence  du gène Nramp ancestral. Notre étude visait donc à déterminer le rôle physiologique des homologues  Nramp de D. discoideum et vérifier l'hypothèse leur association à la membrane du phagosome.

L'approche  a  consisté  en  plusieurs  volets,  que  nous  souhaitions   appliquer  à chacun des deux gènes. Toutefois, devant les difficultés techniques, nous nous sommes concentrés sur 1'étude du prototype DdNRJ. Le premier volet visait à cloner et exprimer une  version  écourtée  de  DdNRl   dans  E. coli,  mais  aucune  expression  n'a  pu  y être détectée dans les conditions testées. Le deuxième volet avait pour but de sous cloner les versions écourtée et pleine longueur de DdNRl  pour expression future dans Dicty. En troisième objectif, nous voulions inactiver chez D. discoideum chacun des gènes Nramp par double recombinaison homologue pour déterminer le phénotype associé, puis complémenter  la mutation en y restaurant une copie fonctionnelle. Une construction pour inactiver le gène DdNRJ  a été créée contenant une cassette de résistance à la blasticidine, puis introduite par électroporation dans D. discoideum. Plusieurs clones résistants ont été obtenus, mais une copie du gène sauvage a pu y être détectée par Southem blot. En parallèle, un antisérum spécifique de lapin ayant été produit et vérifié dans le laboratoire contre la partie N-terminale de DdNRl, nous avons pu l'utiliser pour déterminer son (ses) site(s) d'expression chez D. discoideum par immunofluorescence indirecte in situ. Les résultats préliminaires suggèrent qu'elle serait localisée à la membrane plasmique.


identifier: Côté, Amélie  (2010). Identification et caractérisation de nouvelles enzymes lipolytiques thermostables provenant d'une banque métagénomique  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 139 p.

subject:
lipase
escherichia coli
streptomyces
lividams

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. L'intérêt des lipases microbiennes pour des applications en biotechnologie a pris un essor fulgurant dans les dernières années.   Par conséquent, l'industrie  nécessite de nouvelles enzymes qui répondent aux critères d'utilisation, notamment au niveau de la thermostabilité et de la capacité à catalyser des réactions en conditions alcalines.   En combinant la métagénomique et 1'enrichissement en bioréacteur dans les conditions recherchées, deux nouvelles enzymes lipolytiques ont été identifiées.  Ultérieurement au séquençage des cosmides positifs lipiAF1-l  et lipiAFl-6,  les protéines encodées par les gènes identifiés ont été comparées avec celles des bases de données.   Leur caractère unique a été confirmé par l'homologie de séquences, où le pourcentage d'identité variait entre 21 et 46 % avec différentes protéines conservées et enzymes lipolytiques.  Par la suite, les hôtes E. coli et S. lividans ont été utilisés pour l'expression des gènes d'intérêt. La sécrétion des protéines hétérologues était faible pour l'enzyme LipiAFl-1  alors que
1'enzyme  LipiAF1-6  s'est  avérée bien exprimée chez les deux souches bactériennes. Cette dernière a donc été purifiée et caractérisée.  La lipase LipiAFl-6  hydrolysait une large gamme de substrats lipidiques synthétiques de courtes et de longues chaînes carbonées (p-NP C4 à p-NP C1s). L'activité était maximale à des pH entre 8 et 9 à une température de 60°C.   Également, la totalité de son activité était conservée après 30 minutes d'incubation à 70°C.   Sa stabilité a également été constatée en présence de concentrations allant jusqu'à 30 % de différents solvants organiques.  De plus, la lipase LipiAFl-6  n'était que faiblement inhibée par les composés CoCh (14 %), HgCh (12 %) et DTT (15 %) en concentration de  10 mM.    L'activité  était fortement diminuée en présence de 1 et 10 mM de PMSF, qui a réduit l'activité de 39% et 71 %, respectivement. L'enzyme était également stable en présence de plusieurs agents tensioactifs et oxydants utilisés pour l'industrie des détergents.  Enfin, l'immobilisation de la lipase sur deux matrices  à  base  de  silice  a  donné  de  bons  résultats,  tout  en  conservant  l'activité catalytique.  Ces résultats attestent de l'efficacité de la méthologie et la nouvelle lipase présente des propriétés biochimiques attrayantes po_urtpverses applications industrielles.


identifier: Côté, Marie-Hélène  (2006). Contribution du répertoire primaire des lymphocytes B et des mécanismes de maturation de l'affinité dans l'induction d'une réponse antivirale protectrice  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 113 p.

subject: lymphocyte immunite anticorps

abstract:
Les anticorps, exprimés à la surface des lymphocytes B ou sécrétés dans le sérum, doivent offrir une énorme diversité afin de reconnaître et neutraliser un nombre important de pathogènes potentiels.  Plusieurs facteurs contribuent à la diversité des anticorps, dont les multiples segments géniques de la lignée germinale, qui constituent le répertoire primaire.   Lors d'une réponse immunitaire, certains mécanismes  permettent d'augmenter la diversité  et l'affinité à l'antigène, soit
1'hypermutation somatique et les réarrangements secondaires.   Le processus de permutation isotypique permet quant à lui aux anticorps de changer de fonction biologique tout en gardant leur spécificité pour l'antigène.

Afin d'évaluer  l'importance  que jouent ces facteurs dans une réponse antivirale protectrice, nous avons infecté, avec le virus de la stomatite vésiculaire (VSV), le virus   de  1 'hépatite  murine   (MHV)   ou  le   virus   de  la  chorioméningite lymphocytaire (LCMV), trois types de souris transgéniques immunodéficientes, ayant chacune une lacune dans la capacité à diversifier leur répertoire de lymphocytes B.  La souris HC1 est restreinte à utiliser un seul segment génique VH pour former la chaîne lourde de ses anticorps, la souris AID-'- ne peut ni faire d'hypermutation  somatique ni de permutation isotypique et finalement, la souris QM génère des anticorps théoriquement monospécifiques à l'haptène nitrophényl (NP).

Les titres en anticorps neutralisants  anti-VSV et anti-MHV ont été déterminés chez les trois souris transgéniques  et chez la souris de type sauvage C57BL/6 jusqu'au jour 40 post-infection, alors que les titres en anticorps neutralisants anti LCMV ont été déterminés jusqu'au jour 120 post-infection. Les résultats montrent que : l-Ia  diversité  de la troisième  région hypervariable  (CDR3) de la chaîne lourde à elle seule est suffisante pour produire des anticorps neutralisants contre VSV,   2-les réarrangements secondaires peuvent générer une réponse humorale neutralisante et protectrice contre VSV et MHV, 3-des anticorps neutralisants et protecteurs contre VSV et MHV peuvent  être produits en absence d'hypermutation somatique et de permutation isotypique et 4-une pleine diversité du  répertoire  est  essentielle  pour  générer  des  anticorps  neutralisants contre LCMV.

De plus, l'importance de la diversité des anticorps naturels dans le recrutement du VSV à la rate et dans sa dissémination en périphérie quelques heures après l'infection a été  évaluée.    Les souris  C57BL/6,  HCI,  QM et  Ain-t-  ont  été infectées avec une forte dose de virus puis le titre viral a été déterminé dans la rate, le sang, le foie et les reins de 1 heure à 48 heures post-infection.    Les résultats laissent croire qu'une plus grande diversité des anticorps naturels est bénéfique pour un recrutement rapide du VSV à la rate.

Cette étude montre que la pleine diversité des anticorps n'est pas nécessaire pour induire le développement d'anticorps neutralisants  et protéger la souris contre certains virus, en particulier les virus cytopathogènes, mais qu'elle est bénéfique pour une réponse immunitaire rapide et qu'elle semble nécessaire pour l'induction d'une réponse humorale contre les virus non-cytopathogènes comme LCMV.


identifier: Couillard, Julie  (2010). Étude de la régulation transcriptionnelle de MMP-3 par des mécanismes épigénétiques et inflammatoires  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 195 p.

subject: metalloprotease matrice transcription

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. MMP-3 est une métalloprotéase de la matrice impliquée  dans des processus physiologiques et pathologiques tels que la réparation  de blessure, la morphogenèse, le développement du cancer,  l'arthrite et l'inflammation.  La régulation  transcriptionnelle de  MMP-3   et  des  autres   MMP  est  critique   pour  le  développement  des  maladies. D'ailleurs, les possibilités  de thérapies  contre  le cancer  en  utilisant  des inhibiteurs de MMP  n'ont  jamais  donné  les  résultats  escomptés dû  au  manque  de  compréhension dans  la  régulation  de ces  enzymes.    Les régulateurs classiques comme  1' IL-113 et le facteur de transcription AP-l  jouent  souvent  des rôles significatifs dans  l'induction de l"expression   de   MMP-3.   D'autres  régulateurs   comme   la  méthylation   de  l'ADN peuvent changer  la réponse de MMP-3 dans certains types cellulaires.
Dans un premier temps, nos résultats indiquent que MMP-3 est régulé par la méthylation, notamment  dans  les cellules  de cancer  du colon  humain.   À l'aide de la lignée  cellulaire   HCT116/DKO ainsi  que  des  inhibiteurs de  méthyltransférases de l'ADN, nous démontrons que l'induction de rexpression des gènes  MMP-3 et MMP-10 par l'hypométhylation est spécifique  au type cellulaire.
Nos  résultats  suggèrent  également   que  la cytokine  inflammatoire IL-1B induit une hypométhylation du  promoteur  MMP-3.  De plus, cette  hypométhylation semble spécifique  au  promoteur  MMP-3 puisque  les promoteurs d'autres MMP  ne semblent pas affectés  par cette  voie.  L'hypométhylation par I'IL-113 semble  spécifique  à cette cytokine  car  d'autres  modulateurs d'inflammation  n'induisent pas  l'effet   coopératif avec les inhibiteurs de méthylation.
L'étude de la régulation  de la transcription de  MMP-3 a pem1is d'identifier des nouveaux   mécanismes  par   lesquels   la  combinaison  d'inhibiteurs  de   méthylation
comme  la 5-aza-dC  et des régulateurs classiques comme  I'IL-113 peuvent  pratiquement abolir le statut de méthylation  du promoteur  humain  MMP-3 et induire l'expression de MMP-3, notamment  dans les cellules  de cancer  du colon.   Ces résultats ont également permis   d'établir  un   lien   entre   les   processus    inflammatoires  et   les   altérations épigénétiques dans le contrôle de l'expression de gènes MMP.


identifier: Courville, Pascal  (2008). Étude de la relation structure/fonction de la protéine MntH d'Escherichia coli  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 153 p.

subject: manganese fer transport nramp couplage proteinique slc

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.
Le fer et le manganèse sont deux métaux de transition essentiels pour la plupart des organismes cellulaires, servant principalement de cofacteurs à de multiples enzymes. Cependant, l'accumulation  excessive de ces métaux peut engendrer différentes réactions cytotoxiques.  Dans  les  cellules  eucaryotes,  les  protéines  Nramp  ou  Slc Il   ("natural resistance-macrophage  protein ou Solute carrier family  Il") servent de perméases aux
cations divalents comme  le Fe2+ et le Mn2+. Cette famille de pem1éases est également présente chez les bactéries. Chez les mammifères, les homologues Nramp 1  et 2 sont impliqués dans  la défense contre différents  pathogènes  intracellulaires  et dans l'homéostasie du fer, respectivement. La caractérisation moléculaire de ces perméases représente un défi de taille de par leur nature intégralement membranaire. Très peu de données sont connues à ce jour concernant leur structure en relation avec leur fonction. Les homologues procaryotes se nomment MntH (transporteur  de manganèse dépendant du proton (H+)). Des analyses phylogénétiques détaillées ont permis de distinguer  trois groupes de séquences bactériennes, MntH A, 8 et C, le dernier étant subdivisé en sous
groupes Ca, cp et Cy. Dans le cadre de ce doctorat,  nous avons décidé d'étudier  des
résidus transmembranaires pouvant jouer un rôle critique dans le mécanisme d'action  des protéines  Nramp/Mntl-1. Nous  utilisons  la  protéine  Mntl-1 d'E.  coli (EcoliA)  comme modèle car son activité est semblable aux homologues Nramp et sa topologie transmembranaire  est établie.  De plus,  nous avons démontré  pour  la première  fois le symport Me2+/H+ in vivo via un homologue bactérien appartenant à la famille Nramp.

Les résidus clés ont  été identifiés  à  l'aide  d'une  approche  phylogénétique  qui consiste à prédire les sites de divergence fonctionnelle en comparant différents groupes de séquences alignées d'homologues (outgroup et famille Nramp/MntH). Cinq sites permettent de discriminer les homologues de la famille Nramp des protéines appartenant à  l'outgroup  (correspondant  aux  résidus d'EcoliA:  034, N37,  H2ll, N250 et  N401).
Chacun  des  résidus a  été  remplacé  par celui  présent  dans  l'outgroup  et  par d'autres résidus aux propriétés à priori dites plus conservatives. L'étude  du mécanisme d'action d'EcoliA  a été effectuée avec des préparations membranaires dans lesquelles la protéine

est soit  dans son  orientation  native (RSO-Right-Side-Out),  soit  inversée (ISO-lnside Out). Dans ces deux préparations, EcoliA a démontré un niveau d'activité  différent vis-à vis du transport de Cd 2+. Nous avons choisi d'utiliser  le Cd comme substrat car il s'agit d'un  substrat universel de la famille Nramp, et parce qu'il  induit une forte accumulation de H+  via EcoliA. Ces préparations membranaires ont également servi  pour analyser  la localisation  transmembranaire  des  sites  étudiés  et  préalablement  substitués  par  une
cystéine dans EcoliA.

À l'aide  de ces différentes  techniques,  nous avons démontré  que  les 5  résidus discriminant  la famille Nramp/Mntl-1 sont tous impliqués dans le mécanisme d'action,  en affectant  soit  le  transport  du  Cd21 , du  I-lou  le  changement  de  conformation.  La caractérisation   de  Mntl-1 dans  des  vésicules  RSO  démontre  que  le  CaCh   favorise l'accumulation   du   Cd2+.   De  plus,   le  rôle   respectif  et   l'accessibilité   des   résidus correspondant à des sites de divergence de type Il entre l'outgroup  et la famille Nramp,
sont en accord avec le modèle topologique existant et avec la structure tridimensionelle prédite  pour EcoliA,  basée sur  une homologie  possible avec  la famille de  la protéine LeuT ("Leucine transporter"), dénommé "Neurotransmitter: sodium symporter".


identifier: D'Amour, François  (2009). L'Effet de l'inhibition de la maturation du phagosome par le LPG de l.Donovani sur la présentation antigénique via le CMH II chez le macrophage  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 108 p.

subject: Leishmania lipophosphoglycan complexe majeur histocompatibilite

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.
La  leishmaniose   viscérale  est  une  maladie  parasitaire  qui  touche  environ   12 millions de personnes. Malheureusement,  il n'existe encore aucun vaccin efficace pour immuniser les populations à risque, retrouvées principalement  en Amérique centrale et du sud, en Afrique de l'est  et en Inde. L'agent  causal, le protozoaire  Leishmania donovani, entraîne des lésions au foie, à la rate et à la moelle osseuse qui peuvent être mortelles si elles ne sont pas traitées.

Pour établir l'infection, la forme promastigote  deL. donovani réussit entre autres à résister à l'action  antimicrobienne des macrophages  en survivant à l'intérieur des phagosomes. Pour ce faire, le promastigote bloque de façon localisée la maturation du phagosome, empêchant ainsi l'acquisition  de différentes  molécules microbicides par ce compartiment.  Il a été démontré que le lipophosphoglycan  (LPG), une molécule abondamment retrouvée à la surface du promastigote, entraîne ce défaut de la maturation du phagosome chez le macrophage.

Certaines  études  ont  aussi  démontré   que  Leishmania   peut  aussi  nuire  à  la présentation  antigénique  via  le  CMH  TI   chez  le  macrophage.  Or,  tous  les  processus nécessaires à la digestion, à l'apprêtement et à la présentation antigénique  via la CMH TI peuvent se dérouler dans le phagosome.

L'hypothèse de ce travail est que l'altération de la maturation du phagosome  par le LPG peut mener à une diminution de la présentation antigénique vie la CMH II chez le macrophage. En ralentissant l'acquisition  de nombreuses molécules au phagosome suite à la  phagocytose,   le  LPG  pourrait   nuire  à  la  destruction   du   parasite  ainsi  qu'à   la présentation de ses antigènes.

Pour vérifier l'impact  du LPG sur la présentation  antigénique  via le CMH TI chez le macrophage,  nous  avons  procédé  à des  expériences  de  présentation  antigénique  en utilisant  l'antigène modèle  OVA323_339. Pour  ce faire,  nous  avons  produit  des promastigotes  de type sauvage et déficients en phosphoglycans  (lpg2  KO) qui sécrètent une forme tronquée de l'ovalbumine (OYAt). Des particules de zymosan recouvertes d'ovalbumine et de LPG ont aussi servi à vérifier la capacité des macrophages à présenter OV A323-339•

Les résultats démontrent  que les promastigotes  de type sauvage et lpg2  KO qui sécrètent   le  OVA323_339   n'entraînent   pas  l'activation   des  hybridomes   de  cellules  T spécifiques  à l'antigène. L'utilisation  de particules de zymosan recouvertes de LPG n'a pas non plus montré d'impact  de ce glycoconjugué sur la présentation antigén ique. Ensemble, ces résultats suggèrent que l'inhibition  de la maturation du phagosome par le LPG  n'entraîne pas d'altération de la présentation  antigénique  via le CMH  II chez  le macrophage.


identifier: Daugan, Matthieu  (2011). Étude de l'apparition tardive des anticorps neutralisants dans le cadre d'une infection par le virus de la chorioméningite lymphocytaire  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 81 p.

subject:
lcmv
hepatite c
vih
vsv

abstract:
Les infections virales persistantes sont un réel problème de santé publique. À l'échelle mondiale, les seuls virus du SIDA et des hépatites B et C représentent  plus de 500 millions de cas. Une des particularités de ces infections est de présenter, contrairement aux infections aigues, une apparition tardive  des anticorps neutralisants (AcN) normalement présents pour empêcher la dissémination des particules virales dans tout l'organisme. Le but de ce projet de maîtrise est d'étudier les mécanismes impliqués dans cette réponse humorale tardive suite à une infection  par un virus murin modèle des infections humaines persistantes : le virus de la chorioméningite lymphocytaire (LCMV).

Deux hypothèses ont été privilégiées dans ce projet :

L'interleukine   10  (IL-10)  est  fortement    produite   durant   les infections persistantes et inhibe la réponse cellulaire, elle pourrait aussi avoir un effet identique sur la réponse humorale.
LCMV provoquerait  un défaut  de la maturation  d'affinité, entrainant ainsi un retard dans l'apparition des AcN.

La première hypothèse est basée sur l'analyse de la production  d'AcN dans le cadre d'une infection en l'absence d'IL-10. Des souris IL-10 KO et C57BL/6 ont été infectées avec LCMV Clone 13 (persistant) ou Armstrong (non persistant) et l'apparition  des AcN contre  le virus ou la persistance virale  ont  été observées. Les résultats ont  permis d'arriver à la conclusion que I'IL-10 n'est pas impliquée dans la production tardive des AcN dans le cadre d'une infection par LCMV.

La seconde hypothèse repose sur une analyse parallèle de l'affinité  des anticorps (Ac) contre un antigène non lié dans le cadre d'infections à deux virus : LCMV et le virus de la stomatite vésiculaire (VSV), qui entraine une infection aigue. Des souris ont été infectées avec l'un ou l'autre  des virus puis immunisées quelques jours après infection par une

injection de nitrophenyl (NP). La réponse humorale montée contre le NP a ensuite été analysée à différents moments post-immunisation par prélèvement de sang sur lequel a été pratiqué un test ELISA contre le NP. Ces études ont démontré un délai de la réponse lgM  et  lgG contre  le  NP chez les animaux infectés  avec LCMV contrairement  aux animaux infectés avec VSV ou non-infectés. Cependant, l'affinité  des dits-Ac n'était pas affectée par la nature de l'infection.

Dans leur ensemble, les résultats obtenus ne démontrent  pas une influence de I'IL-10 sur la cinétique et la vigueur de la réponse humorale, mais confirment les spéculations que LCMV module  la réponse humorale  globale et  non pas seulement celle dirigée spécifiquement contre lui-même. Ces résultats ouvrent la porte à la compréhension des mécanismes de persistance des virus humains et murins. Une investigation plus poussée à propos des mécanismes impliqués dans cette apparition tardive globale des Ac et lors d'infections  par  d'autres  virus  persistants  permettrait   de  dresser un  portrait   plus complet du processus menant au retard de la réponse humorale.


identifier: De Gagné, Julie  (2005). Réponse des macrophages murins exposés à des métaux lourds  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 134 p.

subject: metaux polluant toxicite macrophage

abstract:
Parmi les polluants environnementaux reconnus pour leur toxicité et leur propagation à travers le monde, les métaux lourds sont certainement d'une première préoccupation. Depuis que 1'humain est exposé à des métaux toxiques, les effets potentiels de ces métaux sur le système immunitaire méritent une évaluation. Des études démontrent que les métaux lourds peuvent induire des effets immunomodulateurs tels  que  l'augmentation  de  la  susceptibilité à  des agents infectieux, l'apparition de maladies néoplasiques ainsi que de maladies auto-immunes. Afin de se protéger de cette agression, la cellule fabrique des molécules riches en groupements thiols (cystéines, glutathion, métalloprotéines), qui sont capables de neutraliser les métaux en les liant. Dans le présent travail, nous avons tout d'abord évalué la toxicité des métaux lourds (CdCh, CH 3HgCl,
HgCh, SeC4 et ZnCh) suite à des expositions in vitro avec des macrophages. Les

tests de viabilité cellulaire et de phagocytose par cytométrie de flux ont été utilisés afin d'évaluer  les effets de ces xénobiotiques sur la viabilité et la capacité à phagocyter des macrophages, la phagocytose étant une fonction importante de ces derniers. Nous avons déterminé l'effet  de l'activation  des macrophages sur la courbe de toxicité des métaux. Nous avons d'abord  pu vérifier notre protocole d'activation des macrophages  préalablement activés par la Concanavaline A, en suivant 1'augmentation de 1'expression du CMH Il. Pour ce qui est de l'effet de l'activation cellulaire, nous avons remarqué, pour la plupart des métaux, que les cellules stimulées phagocytent plus que les cellules non stimulées. Par la suite, nous avons déterminé si l'effet protecteur de l'activation est lié à des différences de niveaux intracellulaires de thiols. Nous avons aussi observé que les macrophages ayant subie  une activation préalable à  l'exposition  aux  métaux lourds ont une augmentation considérable du niveau intracellulaire en thiols.


identifier: De Léséleuc, Louis  (2005). Rôles divergents du récepteur orphelin Nur77 dans la régulation de l'apoptose  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 161 p.

subject: apoptose cellule T

abstract:
Nur77 (NGFI-B, TR3) est un récepteur nucléaire orphelin impliqué dans des réponses précoces  à divers stimuli.  Il remplit des  fonctions  biologiques  multiples ct  parfois opposées. Nur77 est essentiel à l'apoptose des cellules T lors de la sélection négative ct de l'activation par le ReT. Il semble également jouer un rôle dans la régulation de l'apoptose chez les cellules normales ou tumorales soumises à divers stimuli, dont des dommages à l'ADN. Dans cc cas, son activité serait  régulée  par sa localisation  intracellulaire.  Nur77 est également  exprimé  en réponse  aux facteurs de croissance ct est abondant dans plusieurs tumeurs. De plus, son expression  protège contre certains stimuli apoptotiqucs. Le but de cc projet de doctorat fut d'élucider les mécanismes de régulation de l'apoptose par Nur77.

Le premier volet consistait à étudier la localisation de Nur77 lors de l'apoptose par transfection d'un fusion GFP dans des cellules HeLa. La localisation cytoplasmique de Nur77 n'a été affectée par aucun agent génotoxique. Toutefois, nous avons observé l'apparition rapide ct réversible de corps nucléaires suite à certains traitements. Les rayons UV, la camptothécine,  la cisplatine et le peroxyde d'hydrogène ont provoqué l'apparition rapide(lt 4h) de corps nucléaires dans  une majorité de cellules.  En  revanche,  un traitement  avec  de l'étoposidc  ou des  rayons gamma n'a induit que peu ou pas de corps nucléaires après 16 h d'incubation. Une troncation de Nur77  en N-terminal  a empêché  la formation de corps nucléaires, alors qu'une  délétion  en C terninal  n'a pas affecté la localisation. Les corps nucléaires ne se sont pas superposés à d'autres structures  bien connues. Des inhibiteurs phannacologiques de voies d'activation ou de fonctions physiologiques n'ont eu aucun impact sur cc phénomène, qui fut observé dans d'autres types cellulaires. Cependant, l'inhibition de la transcription par l'actinomycine D ou le ORB a reproduit le même  phénomène, ce qui  porte à croire que ces structures  sont la conséquence  d'un stress transcriptionnel  et non pas de dommages en tant que tels. La séquestration de Nur77 dans ces corps nucléaires a mené à une inhibition de son activité transcriptionnelle.

Le  second  volet  consistait  à  évaluer  le  rôle  apoptotique  de  Nur77  dans  un  modèle cellulaire. Des cellules HEK293 exprimant de façon stable Nur77 ainsi qu'une forme dominante négative  (DN-Nur77)  ont  été  générées.  Les  cellules  exprimant  Nur77  étaient  résistantes  à l'étoposidc, la camptothécinc ct la thapsigargine. Fait intéressant, Nur77 augmentait l'apoptose par de hautes concentrations de FasL mais a diminué  l'apoptose suite à  un traitement combiné  de faibles doses de FasL et de cycloheximidc. La localisation cellulaire de Nur77 ne fut pas affectée par  aucun  traitement.  L'activité  basale  de  NF-KB ct  la  transcription  du  gène  clAP 1  furent amplifiées chez les cellules 293Nur77. Cette augmentation fut insensible à l'inhibition du protéasome. Des inhibiteurs de la liaison de NF-KB à l'ADN ont neutralisé l'effet anti-apoptotiquc de  Nur77.  Les cellules  DN-Nur77  étaient  pour leur  part très sensibles  à  FasL  ct  également résistantes à la thapsigarginc, cc qui indique que Nur77 peut avoir un potentiel à la fois pro- ct anti-apoptotique  dans  la cellule.  L'importance  potentielle  de  Nur77  dans  la  physiologie  des cellules normales et tumorales est discutée.


identifier: de Montgolfier, Benjamin  (2009). Rôles des connexines dans les gonades mâles d'omble de fontaine (Salvelinus fontinalis), un marqueur de maturation  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 296 p.

subject: spermatogenese salmonide

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.
La spennatogenèse est un processus nécessitant de nombreuses  interactions  entre cellules genninales   et  somatiques.   Les  jonctions   lacunaires  sont  identifiées   comme   jouant  un  rôle important dans la communication  cellulaire. Les jonctions lacunaires permettent le passage bidirectionnel  de  petites  molécules  (pr 1  kDa)  entre  cellules  adjacentes.  Ce  sont  des structures composées  de deux  com1exons, eux-mêmes  constitués  par  six  protéines  oligomérisées  autour d'un  pore central, appelées connexines  (Cxs). Panni ces protéines,  la Cx43 est présente dans le testicule de rongeurs  et d'humain et des études  ont démontré  qu'une baisse  de Cx43 dans  le testicule entraînait une diminution de la spennatogenèse, voire son inhibition complète.
L'omble de fontaine est un salmonidé qui se reproduit chaque automne. Durant la spermatogenèse,  les cellules gem1inales se développent de façon synchrone.  Il devient alors aisé de suivre étape par étape ce processus, et d'étudier avec précision chaque stade de maturation des gonades.
L'objectif  principal  de  cette  thèse était  de  déterminer  si  les Cxs régulent  la spermatogenèse  chez  1'omble  de  fontaine.  Plus précisément,  nous  avons  défini  quatre  sous objectifs : 1) identifier et localiser les connexines dans le testicule de truite arc-en-ciel ; 2) étudier l'impact  des effluents municipaux  sur les niveaux d'expression des ARNm des connexines chez l'omble   de  fontaine; 3)  établir  le  lien  entre  les  honnones   stéroïdiennes   et  l'expression   des connexines, chez l'omble  de fontaine; et 4) étudier les mécanismes  de régulation  du promoteur de cx43.
Les résultats obtenus ont pem1is d'identifier quatre Cxs possédant  une expression et une localisation  spécifique  dans  le  testicule  de  la  truite  arc-en-ciel  (Oncorhynchus mykiss) et  de l'omble  de fontaine (Salvelinus fontinalis) (Cx43, Cx43.4, Cx30 et Cx31).  De plus, l'exposition d'ombles  de fontaine à des effluents municipaux a pennis de montrer l'augmentation précoce des niveaux de Cx43 et Cx31 dans le testicule d'individus dont la spermatogenèse était initiée. Ces résultats suggèrent  le rôle possible  de la Cx43 comme  marqueur  précoce  de la maturation. Les suivis des  variations  des  hormones  stéroïdes,  des Cxs  et  des  récepteurs  aux  androgènes,  aux hormones  thyroïdiennes  et  de la gonadotropine  1, ont  pennis  d'observer les niveaux  des  Cxs durant la spermatogenèse  et de montrer in vitro que les niveaux de cx43 n'étaient pas régulés par la 11-CT,  mais dépendant  des  niveaux  d'AMPc  (messager  secondaire  de  la GtH 1) et de T3. Enfin,  nous  avons  étudié  le  promoteur  de  cx43.  Une  séquence  partielle  de  607  pb  de  son promoteur a été séquencée. Des expériences de retardement sur gel, puis des expériences de transfection  avec  différents  fragments  du  promoteur  de  cx43  d'omble de  fontaine  dans  des cellules gonadiques de truite arc-en-ciel  (RTG-2) ont démontré que la fixation de C/EBP et tr beta sur le promoteur activait 1'expression de cx43 confinnant  ainsi les observations précédentes.
En conclusion, ces travaux ont pennis d'identifier et de localiser pour la première fois ces quatre Cxs dans le testicule de salmonidés et de montrer que leur expression varie durant la spermatogenèse.  Toutefois,   la  11-CT  n'a  aucun  effet  sur  les  niveaux  d'ARNm   de  cx43,  à l'inverse de la FSH et de T3  qui semblent augmenter son expression  dans le testicule d'omble  de fontaine.


identifier: de Moraes, Rosa-Maria  (2006). Étude histopathologique comparative des infections par des baculovirus chez deux espèces de tordeuse Choristoneura fumiferana (Clemens) et choristoneura occidentalis (Freeman)  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 146 p.

subject:
baculovirus
tordeuse
choristoneura fumiferana
choristoneura occidentalis
bourgeon
epinette
occidentale

abstract:
Les espèces du genre Choristoneura font partie de l'ordre des lépidoptères et de la famille des Tortricidés. Ils sont les plus importants insectes ravageurs de conifères d'Amérique du Nord. Durant les 25 dernières années, plusieurs efforts furent déployés afin de développer et de mettre en place des stratégies de lutte permettant de contrer Jes pertes économiques associées aux épidémies périodiques de ces insectes. Depuis le début du 20e siècle, J'application d'insecticides chimiques était la principale stratégie utilisée pour réduire les dommages. Actuellement, de nouvelles avenues de lutte sont en usage, notamment celle à base de Bacillus thuringiensis. Afin de diversifier les modes de lutte, de nombreuses recherches sont menées afin d'identifier d'autres organismes entomopathogènes capables  de réduire l'impact  des populations d'insectes  ravageurs. Dans ce contexte, J'emploi de certains hyphomycètes entomopathogènes et de certains virus, notamment ceux de la famille des Baculoviridae, est envisagé.
La tordeuse des bourgeons de 1'épinette, Choristoneura fumiferana, et la tordeuse occidentale de l'épinette, Choristoneura occidentalis, sont deux importantes espèces d'insectes ravageurs, qui affectent la production de la biomasse des forêts de conifères du Canada. Ces insectes sont naturellement susceptibles aux infections baculovirales causées par  certains  nudéopolyédrovirus   et  granulovirus.  Chez  les  insectes,  il  existe  des différences notables dans le développement et la sévérité des maladies associées aux infections par ces virus. Il est généralement admis que les nucléopolyédrovirus sont plus efficaces pour réduire les populations d'insectes que les granulovirus. Des études ont démontré que, durant la première phase de l'infection, les granulovirus passent plus de temps dans les cellules de l'intestin moyen avant de se rendre aux autres tissus larvaires augmentant du même coup le temps d'infection.
Plusieurs études indiquent de grandes variations dans l'efficacité des baculovirus à contrôler les populations de C. fumiferana et de C. occidentalis. Des résultats prometteurs ont été obtenus en laboratoire et au terrain suite à l'application d'un granulovirus contre les  larves  de  la  tordeuse  des  bourgeons  de  l'épinette.  Par  contre,  l'utilisation  du granulovirus contre les larves de la tordeuse occidentale de l'épinette ne donne pas les résultats attendus. Dans ce cas, l'emploi des nucléopolyédrovirus semble plus prometteur. Dans  ce   sens,   une   meilleure   connaissance   histologique   touchant   les   infections baculovirales chez  les  tordeuses  est  importante  afin  d'établir,  de  comprendre  et  de comparer l'évolution de la pathologie reliée au tropisme cellulaire des infections chez C. fumiferana etC.  occidentalis. L'étude histologique de la pathologie des infections par les granulovirus et les nucléopolyédrovirus chez ces deux espèces de tordeuses devrait permettre de mieux comprendre les relations hôtes-virus et, éventuellement, d'intégrer ces connaissances dans l'élaboration de meilleures stratégies de lutte biologique.
L'hypothèse proposée dans ce projet est que la susceptibilité de C. fumiferana et de C. occidentalis au granulovirus et au nucléopolyédrovirus est due à des variations au niveau de la cinétique de l'infection et des voies de prolifération des virus chez chaque espèce d'insecte. Afin de vérifier cette hypothèse, différents groupes de larves des deux espèces ont été infectés avec le Ch:fuGV (granulovirus de C. fumiferana) ou le CfMNPV (multiple  nucléopolyédrovirus  de  C.  fumiferana).  La  cinétique  de  l'infection,  des épreuves biologiques ont été réalisées. Finalement, des coupes histologiques des larves infectées par les deux virus ont été effectuées, analysées et comparées afin de suivre l'évolution de la pathologie virale et d'identifier les différences pouvant exister au niveau de l'infection des tissus larvaires des deux espèces d'insectes.
Les résultats des épreuves biologiques indiquent que les larves de C. fumiferana sont plus susceptibles au ChfuGV que les larves de C. occidentalis. En effet, la dose létale du granulovirus qui provoque 50% de mortalité dans la population larvaire est significativement plus faible chez la tordeuse des bourgeons de l'épinette que chez la tordeuse occidentale de l'épinette. De plus, le temps requis pour observer une mortalité de
50% des larves pour une dose spécifique est significativement plus court chez C. fumiferana que chez C. occidentalis. Par contre, aucune différence significative n'est observée au niveau de la dose létale et le temps moyen de survie causant une mortalité chez les larves des deux espèces d'insectes soumises au CfMNPV. Ces résultats appuient les observations antérieures suggérant une plus grande spécificité des granulovirus.
Pour chaque espèce d'insectes, des études histologiques de la pathologie associée aux ChfuGV et au CfMNPV furent réalisées en observant des sections de tissus larvaires traités par la coloration d'Azan.    De plus, la présence des virus a été détectée par hybridation  « in  situ » ou  par  l'immunohistochimie des  deux  protéines baculovirales (granuline et protéine Pl 0). Les observations histologiques ont démontré une altération morphologique importante au niveau de l'intestin moyen chez les larves de C. fumiferana infectées par le ChfuGV. Ces altérations n'ont pas été observées chez les larves de C. occidentalis soumises au même virus. Cette variation pourrait expliquer en partie les observations faites au  niveau de  la pathogénicité du ChfuGV chez C. fumiferana et semble découler d'une spécificité plus grande entre le granulovirus et les larves de cette
espèce. Les observations histologiques montrent que le ChfuGV a un tropisme tissulaire élargi puisque, dans le cas des deux espèces, il affecte plusieurs tissues, notamment les corps gras, la matrice trachéale et la cuticule. Au niveau de l'infection par le CfMNPV, aucune variation n'a été trouvée au niveau des tissus infectés des deux espèces. Les résultats montrent un polytropisme tissulaire du virus qui affecte l'intestin moyen, la matrice trachéale, les corps gras, les muscles et l'épiderme.
Un deuxième volet de ce projet a été ajouté suite à l'observation des tissus de larves  infectées  avec  le  ChfuGV. En  effet,  la  présence  de  particules  virales  a  été remarquée et détectée dans les gonades des larves de C. fumiferana, infectées sept jours auparavant. À partir de ces observations, une expérience a été réalisée afin d'étudier  la possibilité d'une transmission verticale du ChfuGV chez la tordeuse des bourgeons de l'épinette. Pour la première fois, les résultats montrent que chez des larves survivantes à l'infection par le ChfuGV, on retrouve des particules virales au niveau des femelles et des larves de la progéniture. Enfin, des particules virales ont été détectées chez les œufs, mais non chez les chrysalides.


identifier: Dekimpe, Valérie  (2010). Étude approfondie des systèmes de communication intercellulaire chez la bactérie Pseudomonas aeruginosa  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en biologie, 457 p.

subject: quorum sensing haq hhq

abstract:
Depuis la découverte de la pénicilline en 1928, les antibiotiques sont devenus le traitement antibactérien le plus efficace dans la lutte contre les infections bactériennes. Toutefois, la découverte de chaque nouvel antibiotique s'est  toujours soldée par l'apparition d'un phénomène de résistance à celui-ci, dû à l'impressionnante adaptabilité bactérienne (Clatworthy et al., 2007).
Les antibiotiques tuent ou  inhibent la croissance des  bactéries en ciblant des composants propres aux procaryotes tels que la paroi bactérienne, la réplication de l'ADN ou la synthèse ribosomale. Ce mécanisme d'action  génère une pression sélective favorisant la survie de bactéries résistantes. Idéalement, les futurs traitements antibactériens devraient limiter le phénomène de pression sélective. Dans ce but, cibler non pas la croissance bactérienne mais plutôt l'expression de la virulence ou l'interaction hôte-pathogène devient une avenue plus prometteuse. Ainsi, la diminution de l'effet pathogène des bactéries permettrait au système immunitaire de les éliminer efficacement et sans dommage pour 1'hôte.
Les systèmes de  communication intercellulaire permettent aux  bactéries de  se synchroniser dans 1'expression de nombreux facteurs en fonction de leur densité de population. Ceux-ci font donc partie des cibles les plus intéressantes pour lutter contre les pathogènes bactériens, puisqu'ils régulent généralement l'expression de leur virulence sans affecter leur croissance. Il est donc fondamental de cerner précisément le fonctionnement de ces systèmes de communication afin d'élaborer des stratégies fines pour les inhiber efficacement.
La présente thèse porte sur 1'étude approfondie des trois systèmes de communication intercellulaire chez la bactérie Pseudomonas aeruginosa. Dans le premier chapitre, les systèmes Las et Rhl seront présentés, ainsi que les contributions personnelles que j'ai apportées pour une meilleure compréhension de leur interaction. Les deux autres chapitres portent sur le troisième système de communication découvert chez P. aeruginosa,  et appelé MvfR-PQS. Dans un premier temps, j'apporte  des  précisions importantes sur les voies de biosynthèse des molécules- signal, appelées les 4-hydroxy-2-alkylquinolines ou HAQ, impliquées dans ce nouveau système. Dans un second temps, je résume les connaissances apportées sur !•étude d•une protéine, nommée PqsE, jouant un rôle fondamental dans 1•expression des facteurs de virulence contrôlés par ce système.


identifier: D'Élia, Michele  (2009). Régulation des effets des glucocorticoïdes sur les lymphocytes T lors de la brûlure sévère  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 243 p.

abstract:
Le temps d'hospitalisation ainsi que le pronostic de survie des patients gravement brûlés est grandement  influencé par la sévérité de la brûlure, son étendue ct les soins apportés par  le  personnel  hospitalier.  Une  meilleure  compréhension  des  conséquences physiologiques  de la brûlure chez les patients revêt une importance  particulière  puisque c'est  à  partir  de  ces  travaux  de  recherche  que  des  traitements  plus appropriés  seront prodigués. Une brûlure grave est en fait l'agression  la plus intense que le corps humain peut subir. Au-delà des blessures cutanées, il y a les organes vitaux qui sont en hypcr réaction. Les grands-brûlés sont des polytraumatisés faisant face à plusieurs conséquences médicales graves : perte de masse musculaire importante, cc qui diminue la capacité de se rétablir,   perte   d'eau    importante,   risque   d'infection    majeure   au   niveau   du   sang (septicémie) causée par la perte de la peau et la perméabilité accrue de la barrière gastro intestinale,  déstabilisation   des  fonctions  vitales,  accumulation  des  déchets  cellulaires causée par le stress oxydatif ct une dysfonction généralisée du système immunitaire.

De nombreuses études portant sur la brûlure ont démontré  l'effet  négatif sur le système immunitaire de divers médiateurs solubles. On compte parmi ces facteurs immunosuppresseurs : les cytokines  pro-inflammatoires,  les prostaglandines  E 2  (PGE2), l'oxyde  nitrique (NO), les hormones de stress. La sécrétion massive d'hormones de stress tels les catécholamines et les glucocorticoïdes (GC) est une adaptation de l'organisme  à la brûlure sévère. Le cortisol (Cort) est le principal GC et exerce plusieurs rôles tels que : le catabolisme des graisses ct des protéines, le contrôle de la glycémie et de la réponse immunitaire.   Dans   les  premières   24  à  72  heures  suivant   la  brûlure,   la  sécrétion d'hormones de  stress  est  maximale  et sert  à  contrôler  la  réponse  inflammatoire  et  à empêcher l'apparition  du syndrome de la réponse inflammatoire systémique (SRIS) chez les grands-brûlés.

Les lymphocytes T sont des cellules particulièrement sensibles à l'action  des hormones de stress.  Leurs  fonctions  sont  déprimées  chez  les grands-brûlés.  Des  nombreuses  études menées soient à partir du sang de patients gravement brûlés ou sur des modèles animaux ont  démontré  l'influence   négative  des  GC  sur  le développement  et  les fonctions  des lymphocytes   T.  La  manifestation   le  plus  spectaculaire   de  l'action   des  GC  sur   le développement  des  lymphocytes  T  a  été  démontrée  en  laboratoire  à partir  de  divers modèles. Les GC sécrétés suite à la brûlure causent l'apoptose  massive des thymocytes entraînant  à leur  tour une atrophie  du  thymus visible au jour  1  post-brûlure.  Le stress oxydatif  est  un autre  facteur qui  vient influencer  les fonctions  des  lymphocytes  T. La balanec intracellulaire entre molécules anti- et pro-oxydantes permet l'activation  adéquate ct la prolifération de ces cellules. La brûlure sévère crée un déséquilibre ct favorise l'accumulation de radicaux  libres.  Des nombreuses  études en ont  fait état comme  une cause d'immunosuppression.

Le but de cc travail était de vérifier la régulation des effets des GC sur les lymphocytes T lors de la brûlure sévère. Dans un premier temps, nous voulions identifier les mécanismes responsables de la sensibilité des thymocytes aux GC sécrétés dans les premières heures suivant la brûlure. Dans un deuxième temps, nous voulions évaluer la sensibilité aux GC et au stress oxydatif des lymphocytes T retrouvés en périphérie au jour 10 post-brûlure.

Dans  le  premier  volet  de  cette  recherche  nous avons  démontré  que  la brûlure  sévère augmente les niveaux du récepteur à GC (GR) et induit l'expression  de l'enzyme  Il beta hydroxystéroïdes  déshydrogénase  de type 1  (11 -HSDI) au niveau des thymocytes. De plus,  nous  démontrons  que  l'expression   de  la  11 -HSDI  rend  les  thymocytes  plus sensibles aux hormones de stress en augmentant le pool intracellulaire GC actifs. In vitro, nous  avons  observé  que  l'exposition   de  thymocytes  aux  cytokines  pro-inflammatoires telles  interleukine  (IL)-1, I'IL-6  et  le  tumor necrosis factor (TNF)-a  augmentait  la conversion  de GC  inactifs en GC actifs entraînant  ainsi  leur apoptose.  En résumé, ces résultats  montrent que l'atrophie  thymique visible au jour 1  post-brûlure est causée  par l'augmentation   des  niveaux  plasmatiques  de GC, de l'expression  du GR  et de la 11   HSDl  chez les thymocytes. Ces trois facteurs sont responsables de l'augmentation  de la sensibilité des thymocytes aux GC.

Dans  un deuxième  volet,  nos études  se  sont  portées  au  jour  10 post-brûlure  où  nous voulions vérifier ce qu'il  advenait de la sensibilité des lymphocytes T périphériques aux GC et au stress oxydatif. Jusqu'à  présent, aucun travail de recherche n'avait  été effectué en cc sens.  La première étape fut de  vérifier comment  le stress oxydatif  influence  les fonctions  des  lymphocytes  T  de  souris  brûlées.  Pour  ce  faire,  nous  avons  utilisé  un modèle de culture cellulaire ex vivo. De nombreuses études utilisant cc même modèle ont montré une dysfonction des lymphocytes T au jour 10 post-brûlure. En culture cellulaire, l'ajout  de 2-mercaptoéthanol  (2-ME) au milieu permet de diminuer le stress oxydatif du milieu  extracellulaire  ct stimule  la  prolifération  des  lymphocytes  T.  Le 2-ME  permet l'entrée  de cystéine dans ces cellules. Cet acide aminé est essentiel pour les lymphocytes T.  In  vivo, la  cystéine  est  livrée  aux  lymphocytes  T  par  les  cellules  présentatrices d'antigènes (CPA)  lors de la présentation antigénique.  In vitro, lorsque ces cellules sont cultivées  sans  CPA  elles  ne  peuvent  proliférer,  d'où   l'utilité  de  l'ajout  2-ME.  Notre modèle consistait à vérifier la prolifération in vitro de cellules T isolées de souris brûlées/témoins  dans un milieu de culture avec et sans 2-ME, cc qui recréait un micro environnement réducteur ou oxydatif. À notre grande surprise, nous avons observé la prolifération de lymphocytes T de souris brûlées même dans un milieu exempt de 2-ME. Ceci  nous a amené  à identifier  le mécanisme  responsable  de cette  prolifération.  Nous avons  découvert  un système  de  transport  exprimé  à  la surface  des  lymphocytes  T de souris brûlées qui permettait d'augmenter  la concentration intracellulaire en cystéine ct favorisait leur prolifération.

La seconde étape fut de vérifier dans ces mêmes conditions de culture la sensibilité aux GC des lymphocytes T de souris brûlées. Nous avons observé que ces cellules sont moins sensibles  à l'apoptose  induite par les GC et réfractaires  à leur action anti-proliférative. Cette  résistance  semble  passer  par  la  phosphorylation  de  la  protéine  p38  Mitogen Activated Protein Kinase (MAPK).  L'inhibition  de la phosphorylation  de cette protéine chez  les  lymphocytes  T  de  souris  brûlées  tend  à  normaliser  la  production  d'IL-2   et d'interféron-y  (IFN-y), deux cytokines fortement produites suivant leur activation.

En résumé, ces travaux de recherches démontrent que la génération intracellulaire de GC actifs est un mécanisme important modifiant la sensibilité des thymocytes aux hormones de stress.  Aussi,  nous  montrons que  la sensibilité  aux GC est variable  en fonction  dtemps post-brûlure ct de la nature des cellules puisqu'au jour 10, les lymphocytes T périphériques ont développé une certaine résistance aux hormones de stress. Qui plus est, les fonctions de ces cellules ne sont plus limitées par les besoins en cystéine, puisqu'elles ont trouvé un moyen d'assurer  son importation via l'expression  d'un système de transport spécifique.


identifier: Demers, Mélanie  (2007). Rôle de la galectine-7 dans le développement du lymphome  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 233 p.

subject:
galectine 7
lymphome
cancer

abstract:
Le lymphome non-Hodgkinien est un des cancers les plus difficilement traitables car il est caractérisé par une croissance anarchique et démesurée. C'est  par le biais de métastases que le lymphome progresse vers un phénotype agressif et déjoue toutes nos tentatives de répression par les thérapies. Pour étudier les mécanismes fondamentaux qui contrôlent  la dissémination  des cellules cancéreuses, notre laboratoire fait appel à un modèle expérimental de lymphomagenèse permettant d'étudier  les différents stades du processus métastatique.  L'analyse  comparative de variants hautement métastatiques et des  cellules  parentales  non-agressives  par  matrices  différentielles  d'ADN complémentaire nous a permis d'identifier  une forte augmentation de l'expression  du gène de la galectine-7 dans les lymphomes agressifs. Cette protéine est surtout reconnue comme  marqueur  d'épithélium  stratifiés  et de  kératinocytes.   Dans cette thèse, nous avons déterminé que la transfection de la galectine-7 dans les cellules lymphomateuses favorisait la croissance et la dissémination du lymphome, et ce en induisant l'expression de gènes pro-métastatiques comme MMP-9, un gène associé à un mauvais pronostic des lymphomes non-Hodgkiniens. Pour la première fois, une fonction pro-métastatique était associée à la galectine-7.
Dans un deuxième temps, nous avons démontré que 1'inhibition de la galectine-7, par la transfection d'un antisense du gène dans les variants agressifs réduisait significativement leur potentiel métastatique. De plus, l'analyse par PCR en temps réel de
1'ARN  de 50 échantillons provenant de patients atteints de néoplasmes lymphoïdes ont
révélé qu'une  grande proportion exprimait de forts niveaux de galectine-7. En revanche, aucune expression significative de la galectine-7 n'a  été détectée dans les lymphocytes normaux.
Finalement,  nous  avons  établi  que  1'induction  de  la  galectine-7  lors  de  la
progression vers le phénotype agressif n'est  pas associée à p53 dans les cellules lymphomateuses. L'analyse  du  promoteur des variants agressifs en comparaison avec celui des cellules parentales nous a permis de constater que son expression est contrôlée, du moins en partie, via la méthylation de l'ADN. De plus, le clonage fonctionnel du promoteur de la galectine-7 nous a permis de démontrer que son expression semblait également être reliée à l'activation  de la voie de I'AMP cyclique. Dans l'ensemble, nos travaux suggèrent que lors de la progression vers le phénotype agressif, les cellules cancéreuses  subiraient une pression  sélective qui entraînerait des changements intrinsèques favorisant l'activation transcriptionnelle du gène codant pour la galectine-7, entraînant le développement d'un phénotype agressif des lymphomes.


identifier: Desjardins, Jessica  (2010). Rôle des protéines accessoires du coronavirus humain OC43  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 128 p.

subject: hemagglutinine esterase

abstract: Le coronavirus respiratoire humain OC43 possède la capacité d'envahir et d'infecter le système nerveux central (SNC) humain et de provoquer une maladie neurologique dans un modèle animal murin. Panni les possibles déterminants viraux de la neurovirulence, son génome contient notamment des gènes encodant des protéines accessoires, aussi appelées « groupe-spécifiques », dont le rôle dans 1 'infection demeure méconnu, mais semble, au moins en partie, associé à la relation hôte-virus: une protéine structurale, 1'hémagglutinine-estérase  (HE) et deux protéines non-structurales, ns2 et nsl2.9. L'objectif de ce projet était de déterminer le rôle de ces protéines en délétant, inactivant ou mutant les gènes correspondant par génétique inverse à l'aide  d'un clone infectieux d'ADNe du virus produit au laboratoire. Leur implication dans la neurovirulence a été étudiée lors de l'infection des cellules du SNC à l'aide d'une lignée cellulaire neuronale, les cellules LA-N-5, et grâce à un modèle murin d'infection intracérébrale. L'absence de la protéine HE ou de son activité acétylestérase a rendu impossible la production de virus recombinant infectieux, suggérant que la protéine HE pourrait être essentielle à la réplication virale. D'autre part, les virus recombinants dont les gènes ns2 ou ns12.9 ont été inactivés ont montré une cinétique de réplication semblable à celle du virus sauvage en culture cellulaire. Ces protéines non-structurales ne sembleraient donc pas avoir de rôle essentiel dans la réplication virale in vitro. Toutefois, des essais d'infection  du SNC de souris ont démontré que l'absence  de la protéine ns2 provoquait un délai dans l'apparition de la neurovirulence et de la mortalité, associé à une élimination moins rapide du virus au SNC. Dans le cas de l'absence de la protéine nsl2.9, ces essais d'infection in vivo ont même démontré une atténuation complète de la neurovirulence, possiblement associée à une diminution de la réplication du virus qui était éliminé plus rapidement du SNC. Ces  résultats suggèrent que  la protéine accessoire HE est essentielle à l'infection de cellules cibles, alors que le rôle des protéines ns2 et nsl2.9 serait plutôt associé à la relation virus-hôte possiblement par l'entremise d'une interaction avec le système immunitaire


identifier: Desmeules, Patrice  (2006). Caractérisation de la toxicité ovariennne de métabolistes du cyclophosphamide  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 110 p.

subject: fertilite ovocyte infertilite follicule toxicite ovaire

abstract:
Les  tendances  actuelles  de  fertilité  dans  les  sociétés  occidentales  sont  telles  que  les femmes ont moins d'enfants  et reportent à plus tard la venue de leur premier.   Dans ce contexte d'allongement de la période où des xénobiotiques  peuvent interférer avec les gonades avant  la conception surgit le besoin croissant d'avoir  les outils pour mieux évaluer les dommages potentiellement causés aux gamètes femelles.  L'ovaire  est ainsi fait qu'il  contient un nombre fini de follicules dormants non renouvelables (primordiaux)  qui s'épuise  progressivement jusqu'à  la ménopause.   Les ovocytes  qui s'y  trouvent à l'état  quiescent  peuvent perdurer  ainsi  plusieurs années et risquent de subir des atteintes multiples avant d'être ovulés.

Plusieurs  xénobiotiques  ont été  identifiés comme  ayant  le potentiel  d'entraîner spécifiquement  une perte accélérée des follicules dormants.   De cette perte, qui est irréversible, peuvent surgir l'infertilité  et une apparition prématurée de la ménopause; en effet, ces follicules entretiennent le pool de follicules en croissance qui soutiennent la fonction ovarienne.   Ces conséquences  sont  fréquemment  observées  chez  les  survivantes  de  traitements  de radiochimiothérapie.    Les agents  y étant  utilisés, particulièrement  la radiation  ionisante  et les agents alkylants, affectent des follicules ovariens de divers stades, mais les follicules primordiaux y  sont  particulièrement  sensibles.    Bien  que  l'incidence   des  effets  de  ces  traitements  assez répandus  soit  relativement  bien  décrite,  le  mécanisme  spécifique  pour  expliquer  la dégénérescence  des follicules  dormants demeure incompris.   Cela est du en grande  partie à la difficulté éprouvée à isoler des fractions pures de ces petits follicules, éparpillés au travers de la masse de follicules en croissance, pour mener de telles études.

Dans cette étude, un système de culture d'ovaires  néonataux de souris a été utilisé pour caractériser la toxicité ovarienne d'un des agents alkylants les plus couramment utilisés en chimiothérapie, le cyclophosphamide  (CPA).   Les ovaires à ce stade donnent justement accès à une grande  proportion  de  follicules  primordiaux.    Ils pourraient  donc  s'avérer  précieux  pour mener des investigations plus approfondies sur les mécanismes sous-jacents à la dégénération de ces follicules, par ce composé et d'autres.  Cette étude a tenté d'établir  les conditions pour étudier ces mécanismes in vitro. La comparaison de la toxicité de différents métabolites du CPA chez la

souris a permis de voir que l'on pouvait reproduire les effets de cet agent sur les petits follicules en utilisant directement la moutarde phosphoramidée (MP).  Par ailleurs, le potentiel ovotoxique d'un  produit de dégradation volatile de la MP a également été soulevé.  Les effets de la MP ont ensuite été caractérisés dans le temps pour montrer que la dégénérescence des petits follicules était assez rapide (24 à 72 h) et qu'eUe se soldait par la fragmentation de 1'ADN.  Cependant, des différences de réaction des ceUules somatiques et germinales ont été notées en fonction du stade folliculaire en histologie normale.  Il en fut de même quant à la localisation d'un  marqueur de
1'apoptose, la caspase 3 activée, qui fut détectée presque exclusivement dans les cellules somatiques des foUicules activés.  La comparaison de la toxicité de la MP entre la souris et le rat a  par ailleurs été entreprise.  Les résultats, présentés en annexe, ont confirmé l'existence d'une grande différence de sensibilité des follicules primordiaux entre ces deux espèces. Cependant, ils suggèrent qu'eUe ne soit pas due à des divergences dans le métabolisme général du CPA, tel que proposé auparavant, mais à des différences physiologiques d'origine cellulaire.  L'investigation de ces bases cellulaires a été amorcée avec le système in vitro en regardant si les ovocytes pouvaient détecter des cassures d'ADN.    Les résultats disponibles en annexe suggèrent qu'il existe  des  différences  dans  la  capacité  de  réparer  de  telles  lésions  en  fonction  de  l'état d'activation  de l'ovocyte.   Ainsi, les résultats obtenus lors de cette étude ont permis de poser quelques conditions qui pourront mener à des investigations plus poussées des mécanismes de la toxicité du CPA dirigée envers les follicules primordiaux avec l'aide  du système de culture
d'ovaires néonataux.


identifier: Desrosiers, Jérémie  (2009). Impact du diabète gestationnel mellitus et d'une exposition à de faibles niveaux de polluants environnementaux sur le système dopaminergique placentaire humain  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 78 p.

subject: dopamine recepteur placenta plomb manganese ddt

abstract:
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Nos  travaux  antérieurs ont  démontré que  les  récepteurs  D2-dopaminergiques  (long  et court)  sont exprimés et fonctionnels dans Je trophoblaste placentaire humain  à terme.   Par contre, la  présence   du   récepteur  D1 -dopaminergique  dans   le  système   placentaire  humain   demeure
controversée.  Le premier  but de cette étude est de confirmer ou infirmer  la présence  du récepteur D1  dans  le  placenta   humain.  Des  études   récentes   démontrent  que  Je diabète   gestationnel et l'exposition à différents polluants  environnementaux altèrent  la biodisponibilité de la dopamine et  l'expression de  ses  récepteurs   dans  divers  tissus.    Le  deuxième but  de  cette  étude  est  de déterminer si Je diabète  gestationnel et la contamination maternelle à divers  polluants environnementaux  persistants affectent   également l'expression  des  récepteurs de  la  dopamine dans Je tissu placentaire.
Nos  travaux  antérieurs ont  démontré que  les  récepteurs  D2-dopaminergiques  (long  et court)  sont exprimés et fonctionnels dans Je trophoblaste placentaire humain  à terme.   Par contre, la  présence   du   récepteur  D1 -dopaminergique  dans   le  système   placentaire  humain   demeure
controversée.  Le premier  but de cette étude est de confirmer ou infirmer  la présence  du récepteur
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D1  dans  le  placenta   humain.  Des  études   récentes   démontrent  que  le diabète   gestationnel et

l'exposition à différents polluants  environnementaux altèrent  la biodisponibilité de la dopamine et  l'expression de  ses  récepteurs   dans  divers  tissus.    Le  deuxième but  de  cette  étude  est  de déterminer si le diabète  gestationnel et la contamination maternelle à divers  polluants environnementaux  persistants affectent   également l'expression  des  récepteurs de  la  dopamine dans le tissu placentaire.
Les hypothèses de recherche  sont:  (1)  Je récepteur dopaminergique D1  est exprimé  dans

Je placenta  humain  et (2) que les polluants  environnementaux et le diabète  gestationnel entraînent une  altération   de  l'expression  des  récepteurs  placentaires de  la  dopamine. Pour  vérifier  ces postulats, les objectifs sont 1) déterminer si Je récepteur  D1  est exprimé dans le placenta  humain;
2) comparer l'expression des  récepteurs D1  et D2  dans  les placentas de grossesses compliquées par  Je diabète   gestationnel  par  rapport  aux  placentas   de  grossesses normales  et  3)  comparer l'expression des récepteurs D1  et D2 dans  les placentas  contaminés par de faibles  concentrations de plomb, manganèse et pesticides  par rapport à des placentas  non-contaminés.
Résultats:  Les   analyses  d'immunohistochimie  démontrent  que   le  récepteur  D1   est
exprimé  dans  Je trophoblaste villeux  de  placentas  humains normaux  à terme.    Les analyses  de PCR  en  temps  réel  et  d'immunobuvardage de  type  Western  démontrent que  l'expression des protéines  des récepteurs D1 et D2 est augmentée dans  le placenta  proportionnellement à la contamination de plomb  dans Je cordon  ombilical, alors que l'expression placentaire de I'ARNm du récepteur  D2 est diminuée. L'expression de l'ARNm du récepteur D1  est également augmentée lorsque  de  faibles  doses  de  DDE  (métabolite du  DDT)  sont  présentes dans  le sang  fœtal  du cordon   ombilical.    Nos  résultats   démontrent  également  une  augmentation  du  récepteur   D1 placentaire dans les grossesses diabétiques par rapport  à la grossesse normale  mais pas d'effet sur Je récepteur D2.  Ces résultats  suggèrent que Je diabète  gestationnel ainsi qu'une faible exposition maternelle  au   plomb   et   au   DDT   environnemental   affectent  le  système    dopaminergique placentaire.  Les résultats  démontrent aussi l'expression du récepteur D1  dans placenta  humain et l'expression  de RD2 dans le cytotrophoblaste  villeux pour la première fois.   D'autres  études sont nécessaires afin d'approfondir notre compréhension  du rôle des récepteurs dopaminergiques placentaires  et  les  effets  des  complications  obstétriques  et  d'une   exposition  maternelle  aux polluants environnementaux  sur les fonctions placentaires.


identifier: Disnard, Julie  (2009). Caractérisation de la diversité bactérienne d'un biofilm contaminant une usine de pâtes et papiers  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 83 p.

abstract:
L'usine  de  production  de  pâte et  papier de  Domtar  située  à Windsor, Québec, produit plusieurs tonnes de papier par année et utilise l'eau d'une  rivière adjacente pour la totalité  de  ses  procédés.  L'eau   blanche  résultante  subit  des  traitements  physique  et biologique  avant  d'être  rejetée  dans  la rivière  afin  de  respecter  les  normes environnementales. Dans le but de réduire le volume d'eau  devant être traité, elle est réutilisée par recirculation dans la machine à papier. Une biomasse bactérienne diversifiée s'y  développe car l'eau  blanche  contient une quantité importante  de cellulose, d'hémicelluloses et d'adjuvants divers. Il y a par conséquent formation  de biofilms sur l'acier inoxydable à une température variant de 35 à 50°C. En altérant la qualité du papier en formation, en accélérant la corrosion du métal et en bloquant les tuyaux, ces biofilms réduisent le rendement des machines à papier. Des biocides sont utilisés pour contrer le problème du développement  bactérien semi cependant, cela engendre des coûts économiques et environnementaux importants, et n'apporte pas les résultats escomptés.
Par une collaboration de Carole Beaulieu et Ryszard Brzezinski de l'Université Sherbrooke  ainsi que  Richard  Villemur  de  l'INRS-Institut  Armand-Frappier,  l'objectif général de ce projet est d'isoler des microorganismes indigènes capables d'inhiber l'attachement  des microorganismes  primaires (initialement  responsables de la formation des biofilms). La contribution du laboratoire du Dr Villemur est de caractériser et de faire un suivi de la diversité bactérienne du biofilm.
L'hypothèse de départ était que le suivi de la diversité bactérienne pourrait être effectué à l'aide d'outils de biologie moléculaire basé sur l'ARNr 16S. Les objectifs spécifiques de ce projet étaient  les suivants.  Il s'agissait  d'abord  d'évaluer  la diversité bactérienne des biofilms de l'usine de pâte et papier de Domtar, Windsor par la méthode du  PCR-DGGE  pendant  une  période  d'un  an.  Ensuite,  une génothèque  des  gènes  de
1'ARNr 16S devait être construite pour permettre la conception de sondes spécifiques aux groupes  bactériens  d'intérêt.   Finalement,  un  protocole  de  CARD-FISH   devait  être optimisé afin d'observer  et de quantifier ces bactéries dans les biofilms de l'usine.
Par la méthode du PCR-DGGE, nous avons noté le caractère très complexe de la flore bactérienne des biofilms de l'usine  de P amp P de Domtar à Windsor. Globalement, les différents échantillons ont montré qu'il  y avait une forte diversité de la flore bactérienne avec des dominances sporadiques illustrées par l'intensité des bandes sur DGGE. Nous avons aussi recherché Meiothermus  sp., un genre bactérien dominant une génothèque faite sur l'eau blanche de l'usine. Les PCR spécifiques ont montré que Meiothermus sp. était présent dans 7 échantillons sur 33 quoiqu'absent de la génothèque. Si Meiothermus sp. est une bactérie primaire, il est possible qu'elle ne puisse pas survivre au cours de la maturation du biofilm. Sa présence imprévisible pourrait ainsi être expliquée. Le séquençage des gènes de 1'ARNr 16S de 77 clones représentatifs des 178 clones criblés de notre génothèque a permis de les classer en 15 catégories appartenant à différents niveaux taxonomiques. Les Chloroflexi, représentant près du cinquième des clones (21,3%), pourraient contribuer, par leur agencement en filaments, à maintenir la structure visqueuse des biofilms.
La diversité bactérienne de 3 autres usines de PampP du Québec n'utilisant pas le même procédé qu'à  Windsor a été étudiée par PCR-DGGE. Cependant, comme pour l'usine  de Windsor, le profil bactérien n'était  pas typique d'une  usine mais plutôt de l'emplacement dans une usine.
À partir des résultats des génothèques faites sur l'eau blanche en 2006 par Véronique Prince de l'Université de Sherbrooke et les biofilms, nous avons conçu 8 sondes spécifiques. Un protocole de CARD-FISH (Rapporteur de dépôts catalytiques en hybridation fluorescente in  situ)  a été optimisé et chaque cible bactérienne a pu être visualisée par CARD-FISH. La quantification par pixel des images de microscopie confocale nous a permis de comparer nos résultats de génothèque (janvier 2007) à des biofilms récoltés en juillet 2008. Les Chloroflexi étaient aussi dominants dans nos analyses de CARD-FISH (20%).
Dans une perspective d'avenir, la méthode développée au cours de ce projet pourrait permettre de mesurer l'impact des microorganismes compétiteurs étudiés à l'Université de Sherbrooke sur des biofilms de laboratoire et des biofilms des usines. D'autres sondes pourraient être développées et des expériences de CARD-FISH permettraient d'étudier  la flore affectée par ces bactéries inhibitrices de formation des biofilms.


identifier: Djouder, Hamida  (2011). Efficacité d'un procédé membranaire pour le traitement des eaux usées  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 92 p.

subject: vibrio fischeri pseudokirchneriella subcapitata salvelinus fontinalis truite filtration Montreal Mercier

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. Depuis quelques années  les gouvernements  encouragent  les entreprises  à trouver de meilleures techniques pour la filtration des eaux usées ou contaminées.  La recherche de nouvelles  technologies  de traitement  des eaux plus efficaces et plus écologiques  est l'un des plus importants enjeux de notre société moderne, autant sur le plan économique que social. L'eau est de plus en plus polluée et le phénomène d'urbanisation  entraîne des quantités d'effluents à traiter qui augmentent  sans cesse. Il devient  donc  nécessaire de trouver une technique qui est à la fois efficace, durable et économiquement  rentable.
Notre projet consiste à évaluer l'efficacité d'un système de filtration membranaire à  traiter  des  eaux  contaminées.  La  première  partie  est  consacrée  à  la  filtration  des effluents  de la Station d'épuration de la Ville de Montréal,  des eaux souterraines  de la Ville de Mercier et du Technoparc par des membranes de nanofiltration conçues par la compagnie Hayka Inc. (Montréal). Suite aux filtrations, des tests colorimétriques  ont été réalisés  pour  déterminer  les  propriétés  physicochimiques   des  eaux  filtrées.  Dans  la deuxième partie, des bactéries (Vibrio fischeri), des algues (Pseudokirchneriella subcapitata) et des cellules  immunitaires  de  truites  mouchetées  (Salvelinus fontinales) ont  été exposées  aux eaux  traitées.  L'observation de  la viabilité  de ces trois  types de cellules a permis d'analyser la toxicité des eaux traitées. De plus, l'influence  de ces eaux sur l'activité  phagocytaire des cellules immunitaires des truites mouchetées a été étudiée.
Les résultats  montrent que les éléments  chimiques sont remarquablement  réduits par les procédés  membranaires  conçus  par Hayka.  Une stimulation  de la luminescence des bactéries V. fischeri et de la croissance des algues P. subcapitata a été observée pour les effluents filtrés comparativement  aux résultats obtenus dans les cas des effluents non filtrés.
Cependant, une  inhibition de la luminescence (C125 et CI50) n'est observée que pour les bactéries V. fischeri exposées,  respectivement  aux effluents  non filtrés de la Station d'épuration  de la Ville de Montréal et à ceux non filtrés de l'unité  du traitement des eaux souterraines  de la Ville de Mercier.  D'autre  part, une inhibition de la croissance (CI50) des algues a été observée uniquement  pour les effluents de l'UTES  non filtrés et filtrés par  les procédés  membranaires.  Enfin,  les effluents  de Montréal,  ceux    de 1'UTES  de Mercier non filtrés et filtrés par les procédés membranaires ainsi que les eaux traitées des trois  zones  du  Technoparc   n'ont   pas  affecté  la  viabilité,  la  capacité  et  l'efficacité phagocytaire des cellules de truites mouchetées. Alors que, les effluents de l'UTES  traités par la membrane fine (NF2) ont affecté significativement   la viabilité des cellules.
Les  résultats   obtenus   montrent   que   les  procédés   membranaires   permettent d'améliorer  la qualité des effluents. Par contre, des ajustements doivent être apportés aux membranes pour  filtrer efficacement certains types d'eaux  usées.