identifier: Denoncourt, Patrick  (2002). La conservation de l’ensilage par un bioenrobage  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 218 p.

subject: biopolymere polymere ensilage fourrage bioenrobage conservation

abstract:
Les ensilages jouent un rôle majeur dans la production agricole au Québec.  Les plantes conservées  sous forme d'ensilage  représentent environ 30% des surfaces  cultivées  (plus  de
500 000 ha) et environ 3 millions de tonnes (sur une basse sèche) d'aliment  pour le bétail. L'exploitant  agricole qui désire bien valoriser les fourrages par le biais d'un  ensilage doit tirer profit de deux activités biologiques très importantes. L'activité  enzymatique  crée rapidement des conditions anaérobies lorsque le remplissage des silos est rapide et l'étanchéité du silo est très bonne. De plus, l'activité  fermentaire des bactéries lactiques doit être favorisée. Ces paramètres requièrent des sucres fermentescibles en quantité suffisante inhibant ainsi les fermentations nuisibles. Pour arriver à ce résultat, les plastiques ont toujours  été préconisés. Mais vu la problématique entourant la disposition des plastiques conventionnels utilisés dans l'industrie   fourragère,  il  est  important  d'envisager d'autres   solutions  de  conservation de l'ensilage.  L'enrobage  biodégradable œuvre dans le respect de notre environnement  et il est bon  d'explorer   cette  voie  afin  d'en   arriver  à  un  enrobage  offrant   une  conservation   de l'ensilage  équivalente à celle qu'offre  présentement le plastique non biodégradable.  Ce projet de  maîtrise  propose  des  solutions  environnementales  tout  en  tenant  compte  du  souci  de maintenir les coûts de production à un niveau acceptable. Elle permet d'ouvrir  de nouvelles avenues d'expansion des productions animales tout en respectant l'environnement.

Les  enrobages  biodégradables  sont  souvent  développés  pour  être  utilisé  sous  des conditions contrôlées visant surtout l'industrie alimentaire. Les enrobages biodégradables destinées au domaine agricole doivent  faire face à des agents physiques  et de dégradations différents  de  ceux  retrouvés  dans  l'emballage  des  produits  alimentaires.   La  plupart  des enrobages  biodégradables  comestibles  sont  de  nature  hydrophile,  limitant  leur  capacité  à accomplir  les fonctions désirées.  Nous  avons donc dirigé  nos  recherches  vers  le développement   de   formulations   de   revêtement   hydrophobes   qui   serait   appliquées   sur l'enrobage. L'efficacité  de conservation  de l'ensilage  par les enrobages  biodégradables  est évalué par différents paramètres biochimiques tels que le pH de l'ensilage, la matière sèche, le niveau de sucres solubles  dans  l'eau,  le niveau  d'azote  ammoniacal  ainsi  que  la présence d'acide  lactique, acétique, propionique et butyrique. Les comptes microbiens  des populations des  aérobes,  anaérobes,  des  Lactobacillus,   des  moisissures,  des  levures   ainsi   que  des coliformes sont également pris en considération.

Les  ensilages  enrobés  par  un  bioenrobage  avait  nettement  amélioré  la  qualité  de l'ensilage  par  rapport  aux  ensilage  exposés  à  l'air.  Le  scellement   de  l'ensilage   par  le bioenrobage pem1ettait de stabiliser  le pH à 4.39 durant 120 jours d'entreposage.  Une valeur de pH comparable à celle retrouvée dans l'ensilage scellé par les films de plastique (4.72). L'application du bioenrobage  sur l'ensilage  pennettait  également  de stabiliser  le contenu  en matière sèche à une valeur de 36.25% pendant 120 jours. Un recouvrement  de l'ensilage  par le bioenrobage  présentait  une valeur  en sucres  solubles  dans  l'eau  qui  est  comparable  au plastique  durant  70 jours  avec  respectivement  une  moyenne  en sucre  de  2.69%  ms et de
2.45% ms. Après 135 jours, une plus faible valeur en azote ammoniacal était observée dans l'ensilage recouvert par le bioenrobage  (42.82%Ntot) comparativement  à l'ensilage scellé par le plastique  (64.56  %Ntot).  Un  ensilage  enrobé  montrait  un  niveau  de  production  d'acide lactique supérieur après 135 jours de fem1entation de 0.56%  ms alors que l'ensilage  protégé par  le  plastique   présentait   un  contenu  de  0.17%   ms  d'acide   lactique.   Le  bioenrobage permettait de retarder la production d'acide butyrique jusqu'à 70 jours d'entreposage comparativement  à la détection de cet acide au 3c et au 42c jour d'entreposage  pour l'ensilage exposé  à l'air et à l'ensilage  scellé  avec  le plastique  respectivement.  Cet  essai  avait  aussi montré  que  les  ensilages  scellés  avec  les  bioenrobages   permettaient   de  maintenir   une population d'aérobes inférieure au plastique pendant l'entreposage. Le bioenrobage présentait une croissance en BAL comparable au plastique. L'enrobage s'était avéré plus efficace que le plastique pour le contrôle du développement des coliformes retardant durant 70 jours le développement de colifonnes.


identifier: Desloges, Nathalie  (2002). Caractérisation des gènes UL12, UL25 et UL28 du virus de l’herpès bovin 1 et fonction du gène UL28 dans la réplication virale.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 161 p.

type:
Thèse
Non évalué par les pairs

subject: genes herpes bovin replication virale virus

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Le virus de l'herpès  bovin 1 (BHV1) est responsable de maladies respiratoires et génitales sévères  du  bétail,  ce  qui  occasionne   des  pertes  économiques   considérables   pour  les éleveurs.  Le  génome  viral  est  à  présent  complètement  caractérisé,  ce  qui  a  permis  la localisation  des  différents  cadres  de  lecture  ouverts  (ORF;  "open  reading  frame")  par analogie avec les autres virus alphaherpès.  Mon  projet de recherche avait comme objectif d'étudier la fonction des ORFs UL12, UL25 et UL28 dans la réplication du BHV1 sachant que  leurs homologues  chez le virus de l'herpès  simplex 1 (HSV1) sont impliqués dans le processus  de  clivage  et  d'encapsidation  de  l'ADN   viral  (Goldstein  et  Weiler,  1998a; McNab et al., 1998; Tengelsen et al., 1993). Tout d'abord, dans le but de démontrer hors de tout  doute  que  les ORFs  ciblés  étaient  bel et  bien  fonctionnels  chez  le BHV1, j'en  ai identifié les transcrits, les sites d'initiation de la transcription et les produits de traduction. L'identification  des protéines virales potentielles requérant le développement d'antisérums spécifiques,  j'ai  procédé  à l'expression  d'une partie des séquences  codantes  chez E. coli pour ensuite immuniser des souris avec les protéines recombinantes  purifiées. Les résultats obtenus démontrent clairement que les ORFs ciblés représentent bel et bien des gènes.

Par la suite,  les études  fonctionnelles  des gènes UL25 et UL28 ont été entreprises.  Étant donné qu'une demande de brevet concernant  les résultats obtenus pour le gène UL25 est en préparation  et afm de ne pas nuire à la prise de ce brevet, seuls les résultats concernant le gène UL28 sont présentés dans cette thèse.

Afin d'étudier son rôle, le gène UL28 du BHV1 a été éliminé du génome viral permettant ainsi la création  d'un   mutant  de délétion  spécifique.  Une lignée cellulaire  permissive au BHV1 sauvage (lignée RK13; "rabbit kidney cells") a été génétiquement  modifiée pour lui faire exprimer le produit du gène UL28 du virus (lignée RK13/UL28+). Le développement de cette lignée de complémentation  avait pour  but d'obtenir une lignée cellulaire qui soit capable  de supporter  la croissance  du mutant de délétion viral désiré (BHV1  UL28)  car, s'il s'avérait  que ce gène soit absolument  requis à la réplication du virus dans les cellules infectées, sa délétion du génome viral aurait été létale. Suite à l'obtention de la lignée, j'ai pu entreprendre la construction proprement dite du mutant de délétion désiré en transfectant la lignée avec l'ADN  viral sauvage purifié et un plasmide recombinant dont le gène UL28, bordé des séquences proximales intactes, avait été préalablement remplacé par une cassette d'expression  de  la  J3-galactosidase (B-gal) de  E.  coli. Les  virus  régénérés  suite  à  une
recombinaison  homologue entre les deux molécules d'ADN, présentaient un phénotype  B-gal+ ce  qui  a  facilité  leur  isolation.  Le  mutant  de  délétion  UL28  est  incapable  de  se reproduire sur la lignée cellulaire RK13 qui ne complémente  pas, signifiant que ce gène est essentiel à la réplication du BHVI. J'ai  voulu déterminer  à quelle étape le cycle réplicatif avorte  pour  ce mutant.  La détection spécifique de la protéine tardive Btif encodée  par le gène UL48 a démontré qu'une mutation du gène UL28 ne compromet  pas l'expression des gènes viraux de la classe tardive et que par conséquent, l'expression  des gènes des classes précédentes  ne  serait  pas  compromise   non  plus.  Des  analyses  de  type  Southem   ont démontré  que  la délétion  de ce gène  ne compromet  pas la synthèse d'ADN   viral. Une déficience du gène UL28 n'empêcherait  également pas une encapsidation  précoce d'ADN viral. Cet ADN serait possiblement synthétisé au début de la réplication par un mécanisme non-classique du cercle roulant où des génomes linéaires seraient détachés dès la fin de leur synthèse et encapsidés. Cependant, lors de la réplication par le mécanisme du cercle roulant classique générant de longs concatémères d'ADN, la présence d'UL28  serait requise pour le clivage de ces molécules d'ADN.

En plus d'accroître les connaissances sur les processus de réplication, de clivage et d'encapsidation de l'ADN du  BHVl,  ce projet a le potentiel extrêmement  prometteur  de permettre   le  développement   d'une   toute  nouvelle  catégorie  de  vaccins  qui  auraient l'avantage  de combiner  la sécurité (intransmissibilité,  innocuité)  associée aux  vaccins de type inactivés à l'efficacité des vaccins de type atténués.


identifier: Dupuis, Maryse  (2002). Rôle de la tyrosine phosphatase, TC-PTP, dans l’activation des lymphocytes et des macrophages.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 123 p.

subject: lymphocytes macrophages tyrosine phosphatase ptp phosphorylation

abstract:
La  tyrosine   phosphatase, TC-PTP, est  une  PTP  intracellulaire exprimée de  façon ubiquiste mais retrouvée en plus grande quantité dans les cellules hématopoïétiques. La TC-PTP est impliquée  dans la régulation  du système immunitaire. En effet,  chez des souris déficientes pour l'expression de la TC-PTP (TC-PTP-/-) on retrouve des défauts au niveau  du développement et des fonctions de plusieurs  populations cellulaires hématopoïétiques. En particulier,  des études préliminaires  ont permis de démontrer  que la prolifération  cellulaire  des lymphocytes T et B est inhibée quand  les splénocytes  totaux  isolés  de souris TC-PTP-1- sont stimulés  par la Con A et le LPS respectivement. Afin d'étudier plus en détail  le rôle de cette phosphatase dans  l'activation des lymphocytes, nous  avons  établi  une collaboration avec  le laboratoire du Dr. Michel L Tremblay.

Nous avons montré que le défaut de prolifération  des lymphocytes TC-PTP-1- n'est  pas dû à une propriété intrinsèque des lymphocytes  mais plutôt à une population inhibitrice  présente dans les splénocytes  totaux. En effet, la purification des lymphocytes  isolés à partir de la rate de souris  TC-PTP-1- permet  de  rétablir   leur  prolifération. Par  ailleurs, les  signaux   précoces (augmentation  du calcium  intracellulaire  et phosphorylation  sur résidus  tyrosine) induits suite à une stimulation  avec un anticorps anti-CD3 ne sont pas altérés dans les lymphocytes TC-PTP-1-. Nous nous sommes donc intéressés  à caractériser la population  inhibitrice  présente dans la rate de souris TC-PTP-1-. Différentes  populations de la rate des souris TC-PTP-1- ont été purifiées et testées pour leur capacité à inhiber la proliferation  des lymphocytes T isolés à partir de la rate de souris  TC-PTP+I+. Nous  avons  caractérisé  phénotypiquement et  fonctionnellement cette population inhibitrice. Nous avons montré qu'une population cellulaire enrichie en cellules Gr-1 + isolées de souris TC-PTP-/- supprime la prolifération de lymphocytes T stimulés par un anticorps anti-CD3.  L'inhibition de la synthèse  d'oxyde  nitrique  (NO)  avec le L-NMMA, un inhibiteur d'iNOS, rétablit la prolifération des splénocytes totaux TC-PTP-/-. De plus, il y a une corrélation entre le niveau de NO sécrété et le degré de suppression  de la prolifération cellulaire. La neutralisation  de I'IFN-y  avec  un anticorps  spécifique  abolit  presque  complètement l'activité inhibitrice  des cellules  Gr-1+ et la sécrétion  de niveaux élevés  de NO. Enfin,  l'inhibition  de la prolifération cellulaire des lymphocytes T nécessite un contact cellule-cellule  pour permettre une production suffisante de NO. Nos résultats démontrent aussi que les cellules Gr-1+de souris TC- PTP-/- présentent une sensibilité  accrue à I'IFN-y et au LPS comparé aux cellules Gr-1+de souris TC-PTP+/+. Cette  différence dans  l'état  d'activation des cellules est reflétée par une augmentation de l'expression du marqueur  membranaire B7.1. Pris ensemble, nos résultats indiquent  que  la TC-PTP  semble  jouer  un rôle de régulateur  négatif  lors  de l'activation  des cellules Gr-1+et lors de la signalisation  induite par Jak/Stat.


identifier: Estève, Pierre-Olivier  (2002). Régulation de l’expression de MMP-9 et des TIMPS chez le gliome.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 254 p.

subject: gliome cytokine expression

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.es gliomes représentent la majorité des cancers du cerveau et envahissent les tissus environnant grâce à la sécrétion d'enzymes digérant la matrice extracellulaire, comme les métalloprotéinases de la matrice ou MMPs. Une de ces MMPs, MMP-9, semble essentielle au développement du gliome, mais la régulation de son expression chez le gliome demeure inconnue. Dans cette thèse, nous avons déterminé que l'expression  de MMP-9 peut être induite par les cytokines pro-inflammatoires IL-l  et TNF-a. chez des cellules cancéreuses gliale humaines et de rat. De plus, cette induction de l'expression de MMP-9 est  réprimée  par une cytokine  immuno-suppressive,  TGF-(3, suggérant  une régulation stricte de l'expression de cette MMP par les cytokines chez le gliome.
Dans un deuxième temps, nous avons démontré que l'induction de l'expression de MMP-9 par les cytokines IL-l  et TNF-a. est dépendante d'un isoforme PKC atypique, PKC-Ç. Cet isoforme est activé par IL-l  et TNF-a., ce qui conduit à 1'activation du facteur de transcription NF-KB, nécessaire à l'induction de l'expression de MMP-9 chez le gliome. Troisièmement,  nous avons défini que l'expression  de MMP-9 peut être inhibée par l'activation  d'une  kinase capable de phosphoryler les lipides inositol, l'IP  3-kinase. De plus, la répression  de l'induction de MMP-9 par l'IP  3-kinase  est indépendante  de l'activation  de  NF-KB,  ce  qui  suggère  un  nouveau  mécanisme  de  régulation  de l'expression de MMP-9.
Finalement,  nous avons  démontré  que la surexpression  de l'isoforme PKC-Ç induit l'inhibition de l'expression  de TIMP-1 et TIMP-3 chez le gliome. Cette inhibition, réversée par un inhibiteur de l'activité méthyltransférase, suggère une hyperméthylation des promoteurs de TIMP-1 et TIMP-3.  Cette hyperméthylation provient  de l'augmentation de l'activité méthyltransférase induite par la surexpression de PKC-Ç. Cet isoforme pourrait affecter l'activité méthyltransférase en phosphorylant directement la méthyltransférase  DNMTI.  Ainsi, l'isoforme  PKC-Ç peut contribuer  à l'invasion du gliome, non seulement en induisant l'expression de MMP-9, mais aussi en inhibant l'expression de TIMP-1 et TIMP-3, les deux inhibiteurs préférentiels de l'activité MMP-9.


identifier: Tovar, Diego  (2014). Reconstruction de la géométrie du synclinorium de la Baie des Chaleurs au nord de Bonaventure par l'intégration des données géologiques et géophysiques.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences de la terre, 101 p.

subject:
interprétation structurale
profils sismiques
géométrie
synclinorium
profondeur
cambro-ordovicien
failles acadienne
Bonaventure
Baie des Chaleurs

abstract:
L'objectif de cette étude est d'obtenir un modèle structural pour les profils sismiques 2001-MRN-14A et 2001-MRN-14B – d'une longueur totale de 59 km – acquis par le Ministère des Ressources naturelles dans le synclinorium de la Baie des Chaleurs et l'anticlinorium d'Aroostook-Percé, au Nord de Bonaventure. L'étude vise premièrement à caractériser la géométrie du bassin siluro-dévonien, un bassin successeur post-taconien. Pour cela, une interprétation sismo-stratigraphique contrainte par la carte géologique a été couplée à la modélisation de l'anomalie de Bouguer résiduelle. La base du Groupe de Chaleurs, le Groupe de Mictaw, la discordance taconienne et le socle protérozoïque, localement identifiables sur les profils sismiques, constituent les horizons de référence. Étant donné la qualité faible des données sismiques, la modélisation de l'anomalie de Bouguer résiduelle a été essentielle pour contraindre la géométrie des unités impliquées.
Quatre phases orogéniques reconnues dans la zone d'étude sont représentées par quatre styles de déformation différents. Le premier style de déformation – développé lors de l'orogenèse taconienne – est un système de duplexes vers l'arrière-pays qui implique le Groupe de Maquereau, avec un transport tectonique vers le Sud-est. Le deuxième style de déformation – développé lors d'un épisode d'extension post-taconien – est un système de failles normales listriques contrôlé par un décollement avec une géométrie de plat et rampe. Ces failles convergent en profondeur vers un horizon de décollement au-dessous la discordance taconienne et affectent les roches métamorphiques du Groupe de Maquereau. Le troisième style de déformation – développé lors de la phase de raccourcissement acadien – est représenté par la réactivation des chevauchements taconiens et l'inversion partielle du système de failles normales post-taconiennes, avec un transport tectonique vers le Sud-est. Le quatrième style de déformation correspond à la phase tardive de décrochement dextre acadien, représenté par le système de failles du Grand Pabos, au nord de la zone d'étude.
L'intégration de la cartographie géologique avec l'interprétation des données de sismique- réflexion, la modélisation de l'anomalie de gravité résiduelle et la comparaison avec un modèle analogique a permis d'obtenir un modèle structural cohérent, compatible avec l'ensemble des données disponibles. Ce modèle structural améliore la compréhension de la géométrie de la sous-surface et propose de nouveaux aperçus qui peuvent être utilisés pour mieux comprendre
l'histoire de la déformation dans le synclinorium de la Baie des Chaleurs et l'anticlinorium d'Aroostook-Percé.


identifier: Crémazy, Anne  (2014). Étude des mécanismes de prise en charge des métaux traces trivalents chez les algues unicellulaires.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en sciences de l'eau, 223 p.

subject:
métal trivalent
algues unicellulaires
modèle du ligand biotique
flux d’internalisation
Chlamydomonas reinhardtii
scandium
aluminium
distribution subcellulaire
trivalent metal
unicellular algae
biotic ligand model
internalization flux
subcellular distribution

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de
ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce
résumé peut être lue en PDF. Le modèle du ligand biotique (MLB) est un modèle conceptuel utilisé pour la prédiction de
l’accumulation et de la toxicité des métaux traces chez les organismes aquatiques. Il décrit
l’interaction du métal M avec un transporteur à la membrane biologique comme une réaction de
complexation de surface à l’équilibre. En respectant un certain nombre de prémisses, le MLB
prédit que l’internalisation du métal sera proportionnelle à sa concentration libre en solution [Mz+]
(à composition ionique et pH constants). L’applicabilité du MLB aux métaux bivalents (p. ex. le
Cd, le Cu et le Zn) a été relativement bien étudiée et a été généralement confirmée. En
revanche, des difficultés analytiques ont freiné l’étude de l’applicabilité du MLB aux métaux
trivalents, tels que l’Al. Notamment, l’absence de radio-isotope d’Al adapté au radio-traçage
constitue un obstacle majeur pour l’étude de sa biodisponibilité chez les organismes aquatiques.
Pour contourner cette limitation, nous avons substitué l’Al par le Sc, un analogue chimique de
l’Al possédant un radio-isotope approprié pour le radio-traçage (Sc-46). L’objectif général de ces
travaux était d’étudier les mécanismes de prise en charge de ce métal trivalent chez le
phytoplancton. Plus précisément, nous avons évalué la capacité du MLB à prédire la prise en
charge du Sc chez le phytoplancton.
Les hypothèses de cette étude étaient que (i) par analogie aux métaux bivalents, le MLB
s’applique aux métaux trivalents et donc au Sc; et que (ii) le Sc et l’Al sont suffisamment
semblables chimiquement pour que les mécanismes de prise en charge observés chez le Sc
puissent être présumés chez l’Al.
Dans un premier temps, pour tester l’hypothèse (i), des flux d’internalisation du Sc (Jint) ont été
déterminés chez l’algue verte unicellulaire Chlamydomonas reinhardtii avec des expositions à
court terme (≤ 1 h). Ces expositions ont été réalisées à différents pH (pH = [4,50 – 7,90]),
concentrations en fluorures ([F-] = [0 – 40 μM]) et concentrations en Sc total ([ScT]). Dans ces
différents milieux d’exposition, les concentrations en Sc3+ ([Sc3+]) ont été calculées avec des
logiciels de calculs thermodynamiques. Ces valeurs de [Sc3+] ont ensuite été mises en relation
avec les valeurs de Jint obtenues, avec l’équation du MLB décrivant les flux d’internalisation. Afin
d’évaluer la généralité des résultats obtenus, des expositions au Sc à [F-] = 0 et 10 μM (et à pH
= 5,00) ont aussi été réalisées avec l’algue verte unicellulaire Pseudokirchneriella subcapitata.
Dans un deuxième temps, pour tester l’hypothèse (ii), des flux d’internalisation du Sc ont été
déterminés chez C. reinhardtii à des concentrations variables en Al dissous. Ces expériences
avaient pour but d’évaluer la compétition de l’Al pour la liaison au transporteur membranaire
emprunté par le Sc. Enfin, la distribution subcellulaire de ces deux métaux a été comparée chez
C. reinhardtii après une exposition de 72 h ([ScT] ou [AlT] = 4,5 μM, pH = 7 et [F-] = 380 μM).
A chaque condition de pH et de [F-] testée, les flux d’internalisation du Sc chez C. reinhardtii
suivaient une cinétique de type Michaelis-Menten en fonction de la concentration en Sc (totale
ou libre). Ces profils indiquaient que le Sc en solution était en équilibre thermodynamique avec
les sites de transport à la surface biologique, une prémisse importante du MLB. Pour une même
[ScT], les calculs de spéciation dans les milieux d’exposition prédisaient une diminution de [Sc3+]
de 107 fois entre pH 4,50 et 7,90 et de 2000 fois entre 0 et 40 μM de F-. Cependant, ces baisses
très importantes de [Sc3+] ne se reflétaient pas dans des baisses conséquentes des valeurs de
Jint mesurées chez C. reinhardtii. Ces observations ont été confirmées avec P. subcapitata à [F-]
variable. La compétition des protons pour le transporteur du Sc (effet considéré par le MLB) ne
permettait pas d’expliquer la tendance des valeurs de Jint mesurées dans l’ensemble de la
gamme de pH testée. Plusieurs hypothèses pour expliquer ces déviations aux prédictions du
MLB ont été étudiées. L’augmentation du pH d’exposition de 4,50 à 7,90 a été associée à une
hausse du potentiel négatif de la paroi cellulaire de C. reinhardtii. Cet effet, qui a pour
conséquence d’augmenter la concentration en Sc3+ à la surface cellulaire, était cependant de
trop faible amplitude pour expliquer les fortes valeurs de Jint observées à faibles [Sc3+]. Des
calculs du flux diffusif maximal de Sc3+ nous ont indiqué que la diffusion de cette espèce vers la
membrane biologique était trop faible pour soutenir les valeurs de Jint observées à pH > 5,00 et à
[F-] > 1 μM. Cependant, nos données expérimentales suggéraient que l’équilibre entre le métal
et les sites de transport était maintenu. Ainsi, la seule hypothèse permettant d’expliquer nos
résultats était celle de la participation d’hydroxo- et de fluoro-complexes du Sc au flux
transmembranaire de ce métal, via la formation de complexes ternaires aux transporteurs de
Sc3+. La participation de ScOH2+, Sc(OH)2
+ et ScF2+ permettait notamment de lever la limitation
de diffusion sur la prise en charge du Sc chez C. reinhardtii.
Les expériences réalisées avec l’Al ont démontré que ce métal n’était pas (principalement)
internalisé par le transporteur du Sc chez C. reinhardtii. Nous avons supposé que la différence
de taille entre les ions Sc3+ et Al3+ (sous leurs formes déshydratées et hydratées) pouvait
expliquer ce résultat. Cette observation n’exclut pas que les mêmes mécanismes de prise en
charge soient impliqués pour le Sc et l’Al chez C. reinhardtii. En effet, des études ont déjà
évoqué la prise en charge d’hydroxo- et de fluoro-complexes d’Al pour expliquer des résultats
déviant des prédictions du MLB. En accord avec l’analogie présumée entre le Sc et l’Al, la
distribution subcellulaire de ces deux métaux était très similaire chez C. reinhardtii, avec une
préférence marquée pour les organelles puis les granules, et une très faible association avec les
protéines cytosoliques. Ces similarités ont démontré le potentiel intéressant du Sc à substituer
l’Al dans des études visant à comprendre les mécanismes de toxicité de l’Al.
Le principal résultat de cette étude est que le MLB, dans sa formulation actuelle, ne permet pas
de décrire les flux d’internalisation du Sc chez deux espèces de phytoplancton. En effet, comme
il a déjà été proposé pour l’Al, des hydroxo- et fluoro-complexes du Sc semblent participer à la
prise en charge, via la formation de complexes ternaires de surface. Il apparaît donc de plus en
plus incertain que notre conception actuelle des interactions entre les métaux et les membranes
biologiques soit adéquate pour les métaux trivalents. Il en découle que l’évaluation du risque
environnemental posé par un métal trivalent risque d’être erronée si elle se base sur les
prédictions du MLB, c'est-à-dire sur la concentration de l’ion métallique libre en solution.

The symbols and special characters used in the original abstract could not be transcribed due
to technical problems. Please use the PDF version to read the abstract. The biotic ligand model (BLM) is a conceptual tool for predicting the accumulation and toxicity of
metals in aquatic organisms. It describes the interaction between a metal and a membrane
transport site as a surface complexation equilibrium. Provided that all the model’s assumptions
are respected, the BLM predicts that metal internalization will be proportional to the free metal
ion concentration in solution ([Mz+]) (at constant ionic composition and pH). A relatively large
body of experimental work on the bioavailability of divalent metals (e.g. Cd, Cu and Zn) has
shown good agreement with BLM predictions. However, numerous analytical difficulties have
hindered the conduct of such studies with trivalent metals, such as aluminum. In particular, the
absence of an appropriate Al radio-isotope for tracer experiments is a major hurdle for the study
of its bioavailability toward aquatic organisms. To overcome this limitation, we substituted Sc for
Al, Sc being a chemical analogue with a convenient radio-isotope (Sc-46) for tracer experiments.
Our general objective was to study the uptake mechanisms of trivalent metals with
phytoplankton. More precisely, we evaluated the ability of the BLM to predict Sc uptake in
phytoplankton.
Our hypotheses were that (i) by analogy with divalent metals, the BLM can be applied to trivalent
metals and thus to Sc; and that (ii) Sc and Al share enough chemical similarities such that the
uptake mechanisms observed with Sc could be similar to those involved in the uptake of Al.
To test hypothesis (i), Sc internalization fluxes (Jint) in the green unicellular alga
Chlamydomonas reinhardtii were determined with short-term exposures (≤ 1 h). These
exposures were performed at different pH values (pH = [4.50 – 7.90]), fluoride concentrations
([F-] = [0 – 40 μM]) and total Sc concentrations ([ScT]). In these media, Sc3+ concentrations
([Sc3+]) were calculated with speciation software. These [Sc3+] values were then related to the
obtained Jint values using the BLM equation describing internalization fluxes. In order to assess
the generality of the results, Sc exposures at 0 and 10 μM F- (and pH 5.00) were performed with
an additional unicellular alga, Pseudokirchneriella subcapitata.
To test hypothesis (ii), Sc internalization fluxes in C. reinhardtii were determined over a range of
dissolved Al concentrations. The purpose of these experiments was to evaluate whether Al
significantly binds to the membrane transporter involved in Sc uptake. Furthermore, the
subcellular distribution of these two metals was compared in C. reinhardtii after a 72 h exposure
([ScT] or [AlT] = 4.5 μM, pH = 7 and [F-] = 380 μM).
For each pH and [F-] tested, Sc internalization fluxes in C. reinhardtii followed Michaelis-Menten
kinetics with total or free Sc concentrations. These profiles indicated that Sc in solution was in
chemical equilibrium with Sc at the transport sites on the biological surface, which respects one
important BLM assumption. For a given [ScT], speciation calculations for the exposure media
predicted a decrease of [Sc3+] by a factor 107 from pH 4.50 to 7.90 and by a factor 2000 from 0
to 40 μM F-. However, these important [Sc3+] reductions were not reflected by comparable
decreases in the Jint values measured in C. reinhardtii. These observations were confirmed with
P. subcapitata over a range of [F-]. Proton competition for binding to Sc transport sites (effect
considered in the BLM framework) could not explain the observed trend in Jint values over the
entire tested pH range. Multiple hypotheses were examined to explain these deviations from
BLM predictions. The increase in exposure pH from 4.50 to 7.90 was associated with an
increase of the negative cell wall potential of C. reinhardtii. However, this effect, which has the
consequence of raising [Sc3+] in the cell wall, was too weak to explain the high Jint values
observed at low [Sc3+]. Moreover, calculations of Sc3+ maximum diffusive flux indicated that the
diffusion of this species to the biological membrane was too low to sustain the Jint values
measured at pH > 5.00 and at [F-] > 1 μM. However, our experimental data suggested that a
chemical equilibrium was reached between the metal and its transport sites. Thus, the only
hypothesis that could explain our results was the contribution of hydroxo- and fluoro-complexes
to Sc uptake, via the formation of ternary complexes with Sc3+ membrane transport sites. With
the contribution of ScOH2+, Sc(OH)2
+ and ScF2+, Sc uptake by C. reinhardtii was no longer
diffusion limited.
Uptake competition experiments showed that Al was not (mainly) taken up by C. reinhardtii via
Sc transporters. We hypothesized that the difference in size between Sc3+ and Al3+ hydrated and
dehydrated ions could explain this result. This observation does not rule out the possibility of
common transport mechanisms for Sc and Al in C. reinhardtii. Indeed, accumulation of Al
hydroxo- and fluoro-complexes has already been suggested to explain results deviating from
BLM predictions. In agreement with the proposed analogy between Sc and Al, their subcellular
distribution in C. reinhardtii was very similar, with the strongest preference for the organelles,
then the granules fraction, and with a very low association with cytosolic ligands. These
similarities showed the interesting potential of Sc as a surrogate for Al in toxicity mechanism
studies.
The main conclusion of this study is that the BLM, in its present form, does not provide an
adequate modeling framework for Sc internalization fluxes in two phytoplanktonic species.
Indeed, as already reported for Al, some Sc hydroxo- and fluoro-complexes seem to participate
in the transmembrane flux, via the formation of surface ternary complexes. Thus, it appears
more and more doubtful that our present conception of metal interactions with biological
membranes is adequate for trivalent metals. It follows that the assessment of the environmental
risk posed by these metals is likely to be incorrect if based on BLM predictions, i.e. on the free
metal ion concentration.


identifier: Gruslin, Edith  (2002). Activation de lymphocytes auto-réactifs spécifiques à la protéine basique de la myéline suite à l’infection par le coronavirus murin  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 105 p.

subject: lymphocyte myeline coronavirus morin

abstract: Les maladies auto-immunitaires affectent 3 à 5% de la population. Bien que 1'étiologie de ces  pathologies  soit  inconnue,  des  facteurs  génétiques  et  environnementaux   y  sont fréquemment   associés.  Parmi  les  facteurs  environnementaux   possiblement  liés  à  la sclérose en plaques (SEP), une maladie auto-immunitaire caractérisée par une destruction de la myéline, se trouve une longue liste de virus, incluant les coronavirus. L'infection  de la souris par le coronavirus murin (MHV) fournit un modèle animal d'étude  de la SEP. L'objectif  du   travail   était   de  caractériser   l'induction   possible   de  réactions   auto immunitaires spécifiques au système nerveux central suite à l'infection. Premièrement, la caractérisation du modèle d'étude a été réalisée. Suite à l'injection  intra-cérébrale (i.e.) du MHV, souche A59, la mesure de la charge virale par un test de plages de lyse a indiqué qu'elle  était maximale au cerveau 2 jours post-infection (p.i.) et au foie 4 jours p.i.. Le virus était devenu  indétectable  dans ces deux organes  à 7 jours  p.i.. De  plus, un test ELISA a mis en évidence la production d'anticorps  de façon significative chez tous les animaux  à 7  jours  p.i..  Deuxièmement,  l'activation  de  lymphocytes  spécifiques  à  un antigène du SNC suite à l'infection  par le MHV a été mesurée par un test de prolifération cellulaire. Ainsi, des lymphocytes T spécifiques à une protéine de la myéline (protéine basique de la myéline), et non à des antigènes témoins (ovalbumine, lysats de poumon de souris), ont été détectés à 7 jours p.i. dans la rate de souris infectées mais pas de souris témoins. Troisièmement,  la modulation de la transcription des gènes cellulaires  induite par l'infection  a été étudiée afin d'obtenir des informations sur le mécanisme responsable de 1'activation  de  cette  population  cellulaire  auto-réactive.  Des matrices  d'ADNe   ont révélé un changement significatif de 1'expression de 41 gènes sur les 1176 testés. Parmi ces  changements,  une  augmentation  de  l'expression  de  plusieurs  gènes  (24/41)  a été observée  à 7 jours p.i. La majorité de ces gènes sont  reliés à la réponse immunitaire, certains  étant  impliqués  dans la présentation  antigénique,  d'autres  caractéristiques  des leucocytes ou bien codant pour des chimiokines. Les résultats des matrices d'ADNe  ont été validés par la confirmation  par RT-PCR de certains des changements  observés. La présente étude révèle donc que, dans un modèle animal de SEP, (1) le virus est éliminé du foie et du cerveau à 7 jours p.i. alors qu'au même moment (2) l'activation de cellules T auto-réactives spécifiques à la myéline est observée et (3) qu'une hausse importante de l'expression de différents gènes reliés à l'immunité est détectée. Ceci suggère que l'activation observée des lymphocytes T auto-réactifs est le résultat d'un  processus inflammatoire, bien que des études fonctionnelles exhaustives devront être réalisées pour le confirmer. Cependant, le rôle du mimétisme moléculaire, de la propagation de déterminants et des superantigènes dans l'activation de cette réponse auto-immunitaire n'est pas exclu. Ce travail confirme donc l'activation de lymphocytes T spécifiques à un antigène de la myéline suite à l'infection par le coronavirus murin. La caractérisation des mécanismes sous-jacents fournira des informations importantes dans la compréhension de l'auto-immunité viro-induite dans le contexte de la SEP.


identifier: Hénault, Jill  (2002). Effets de l’expression des récepteurs estrogènes alpha et bêta sur la différenciation de cellules promyéloides HL-60 en neutrophiles  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 137 p.

subject: recepteur estrogene promyeloides hl-60 neutrophile

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Les estrogènes  sont  des hormones capables d'affecter  le système  immunitaire.   Il a été démontré que les estrogènes  peuvent même moduler la maturation et le développement des cellules  immunitaires  dans la moelle osseuse et le thymus.   Les mécanismes  sous jacents à cette modulation sont cependant encore très mal compris.  Puisque les effets des estrogènes  sont  principalement   médiés  par  l'entremise   de  récepteurs  nucléaires,  les récepteurs estrogènes alpha (ERa.) et bêta (ER  ), et que ces récepteurs sont exprimés dans la plupart des cellules  matures et immatures du système immunitaire,  nous avons étudié de rôle de ERa. et ERlors de la maturation de cellules immunitaires humaines.

Pour  ce  faire,   un  modèle  de  différentiation   cellulaire   in  vitro  a  été   utilisé   :  la différenciation  de cellules humaines promyéloïdes HL-60 en neutrophiles  par incubation avec  du  diméthyl  sulfoxide  (DMSO). 	Les cellules  HL-60  n'exprimant   pas  de  façon endogène  le ERB et exprimant  très peu le ERa, il a été possible de les transfecter  pour faire en sorte qu'elles surexpriment  ERa. (HL - 60a) ou ER(HL -60B). 	Ces cellules nous ont permis d'étudier  de façon spécifique le rôle de chacun des récepteurs estrogènes dans le contexte d'une différenciation cellulaire.

Les  cellules  HL-60,  HL-60a et  HL-60B ont été  incubées  pendant  cinq  jours  dans  un milieu contenant  1.25% de DMSO et différentes concentrations  physiologiques  de 17  estradiol  (0 M, 10-8 M et  10-6  M).  Les effets de la surexpression de ERa. et ERsur la concentration,   la  viabilité  et  la  morphologie  cellulaire  ainsi  que  sur  la  présence  de différents marqueurs de différenciation ont été analysés.

En accord avec la littérature,  nos résultats montrent que la viabilité des cellules  HL-60 diminue lors d'une exposition au DMSO et que,  parallèlement, le pourcentage de cellules exprimant des marqueurs de différentiation augmente, indiquant que les cellules se différencient  en neutrophiles.  Les mêmes résultats ont été obtenus pour les cellules HL-
60a.  Cependant,  contrairement  aux cellules HL-60 et HL-60a, la viabilité des cellules HL-60n'est pas diminuée  lors du traitement au DMSO.      De plus, le pourcentage  de cellules HL-60exprimant des marqueurs de différentiation n'est  pas augmenté de façon significative  même après cinq jours d'exposition  au DMSO.   Une étude morphologique montre également  des différences entre  la forme  du noyau des cellules  HL-60P  et des cellules HL-60 et HL-60a.   Nos recherches permettent donc de conclure qu'en  présence de DMSO,  la surexpression  de ERdans les cellules HL-60 influence  négativement  la différenciation de ces cellules en neutrophiles.

Il a également été observé que 1'ajout de différentes concentrations  de 17B-estradiol dans le milieu de culture lors de l'exposition  au DMSO n'influence aucun des résultats obtenus lors de cette étude.  Les effets modulatoires de ERsur la différentiation des cellules HL-
60 en neutrophiles sont donc de nature ligand indépendantes.

Les   résultats   obtenus   lors  de  cette  étude   montrent   pour  la  première   fois   qu'une modulation de l'expression  de ERB dans une cellule immunitaire promyéloïde peut avoir un  impact  sur  sa  différentiation  en  cellule  immunitaire  plus  mature  et  ce,  même  en absence d'estrogènes. La découverte du ERB est relativement récente et son rôle dans les cellules  immunitaires est encore bien mal connu.   Il est évident que des recherches  plus approfondies sur le rôle de ce nouveau récepteur pourrait éventuellement  nous permettre de  mieux  comprendre   par  quels  mécanismes  ce  dernier  influence  la  différentiation cellulaire.


identifier: Lachapelle, Guillaume  (2002). Analyse du mécanisme apoptotique de la glycoprotéine majeure d’enveloppe du virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin (VSRRP)  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 172 p.

subject: vsrrp porc vaccin adenovirus apoptose

abstract:
Le virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin (VSRRP)  occasionne des  pertes économiques  importantes à l'industrie porcine du Québec et des pays  producteurs de porc par son  impact sur la reproduction et la viabilité des porcs. La faible efficacité des vaccins développés  jusqu'à  maintenant contre ce virus de la famille des Arteriviridae, ne permet pas de  prévenir correctement la transmission  de l'agent  infectieux et l'établissement de la maladie causée par le VSRRP. Depuis qu'il  fut démontré  que la vaccination génétique à l'aide de la glycoprotéine GPs permettait la production d'anticorps neutralisants  et menait  à  la  protection  de  porcs  contre  une  infection-défi,   le  développement  d'un   vaccin  de   type recombinant avec cette protéine devint  une avenue très prometteuse.  Vu  leurs  nombreux  avantages,  les adénovirus recombinant humains  (AdV) furent choisis afin d'élaborer  un vaccin sous-unitaire  permettant d'immuniser les porcs contre le VSRRP.  Par contre, une toxicité associée  à la protéine GPs de la souche IAF-Kiop du VSRRP, semblable  à l'apoptose  rapportée pour la même  protéine d'une  souche  Européenne du VSRRP, occasionne  d'importantes difficultés à obtenir de haut titre  viral.  De fortes concentrations en AdV sont  souhaitables   pour  d'éventuelles  applications  de  vaccinations.  Les  principaux  objectifs  du présent mémoire de maîtrise sont de caractériser le mode de maturation  ainsi que la voie apoptotique de la protéine GPs de la souche  IAF-Kiop du VSRRP, puis de mettre au point  une lignée cellulaire exprimant le répresseur CymR  et  la  protéase  PS,   afin  de  produire  à  de  hauts  titres   une  nouvelle  génération d'adénovirus recombinants à des fins de vaccination génétique  chez le porc.  Les résultats  présentés dans ce mémoire supportent  le fait que  la protéine GPs soit  maturée  différemment  lorsque  exprimée  par un AdV, mais que ses  propriétés  immunogéniques  sont  conservées.  Suite  à  l'observation  qu'une  certaine toxicité semblable à de l'apoptose accompagnait  l'infection  de cellules  MARC-145  par les AdV/GPs,  le lien entre apoptose et GPs fut approfondie.  La cascade apoptotique emprunte  la voie mitochondriale,  par le  relargage du  cytochrome  c,  suivie  de  l'activation  de  la  caspase-9  et  de  la 3.  De  plus,  une  lignée cellulaire 293SF CymR PS fut construite afin de permettre la production  de forts titres d'AdV  exprimant un  transgène  toxique,  puisque  son  expression  sera restreinte  dans  ce  type  de  cellule.  Les adénovirus délétés pour  la  protéase (PS)  produits  dans  cette lignée  complémentaires pour  la  PS  seront  un  outil important  en  vaccination  ainsi  qu'en  thérapie génique,  puisqu'ils  représentent  un  moyen  efficace de
stimuler le système immunitaire de l'hôte  sans la production de particules virales, donc plus sécuritaire.


identifier: Leclerc, David  (2002). Études de la localisation tissulaire de la connexine 32 et de la prolifération cellulaire dans le foie des rats traités à l’hexachlorobenzène.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 77 p.

subject: androstenedione hcb hexachlorobenzene hydrocarbure tumeur hepathique

abstract:
L'hexachlorobenzène (HCB) est un contaminant  de la famille des hydrocarbures aromatiques polyhalogénés largement répandu dans l'environnement.  Étant donné ses propriétés   lipophiles,   l'HCB   a  tendance   à  se   bioaccumuler   dans   l'environnement. Plusieurs études ont démontré que l'HCB est cancérigène chez l'animal  et qu'il  est un promoteur de tumeurs hépatiques.   D'autre  part, un dimorphisme sexuel a été démontré dans  la  réponse  des  rats  à  l'HCB.     Les  femelles  sont  en  effet  plus  susceptibles  de développer  des tumeurs hépatiques que les mâles.   Les données actuelles  ne permettent pas de déterminer si le HCB pourrait être cancérigène chez l'humain,  c'est  pourquoi des études ont été entreprises afin de déterminer les mécanismes d'action  de l'HCB dans le développement  de  tumeurs  hépatiques  et  d'en  arriver  à  établir  un seuil  d'exposition acceptable pour la population.

Les travaux du présent mémoire visent la caractérisation les effets de l'HCB sur la promotion de tumeurs hépatiques chez le rat.   L'étude a porté principalement sur la prolifération cellulaire et la localisation dans le foie des rats femelles de la connexine 32 (Cx32),  impliquée dans la communication  intercellulaire, chez les rats mâles et femelles suite  à  un traitement  à l 'HCB.   Une  hausse du  taux de  prolifération  cellulaire  et une baisse de la communication  intercellulaire sont des caractéristiques communes à plusieurs carcinogènes épigénétiques.

Le modèle expérimental  utilisé consiste en l'administration par gavage d'une  dose quotidienne d 'HCB durant 5 jours consécutifs;   les rats sont sacrifiés aux jours 50 ou 100 du protocole de traitement.   La localisation tissulaire de la Cx32 des rats femelles a été observée  au jour  45 du protocole.    Des travaux  précédents  dans  notre  laboratoire  ont démontré que l'HCB  réduit l'expression  de la Cx32 à ce temps chez le rat femelle.  Une analyse  par immunohistochimie  de la Cx32  a été effectuée  afin de déterminer  si cette baisse est localisée en endroits précis du lobule hépatique ou si l'HCB  agit sur l'ensemble des  hépatocytes.      Les  résultats   ont  montré  que  1'HCB   cause   une  diminution   de l'expression  de la Cx32 qui s'étend aux hépatocytes de toutes les régions du foie.

Lors de l'étude portant sur la prolifération cellulaire, les hépatocytes ont été isolés du foie par une technique de perfusion avec une solution de collagénase. La mesure de la prolifération cellulaire au niveau du foie a été effectué par une analyse en cytométrie en flux du contenu en ADN des hépatocytes isolés permettant de déterminer le pourcentage de cellules présentant une ploïdie de 2N, 4N ou 8N.  Les résultats obtenus ont permis de déterminer que le HCB n'induit pas de prolifération cellulaire entre la fin du traitement et le jour 50 ou le jour 100 du protocole, et ce, tant chez les mâles que chez les femelles.

Les résultats infirment l'hypothèse que l'HCB augmente la prolifération cellulaire afin de permettre l'expansion des cellules plus susceptibles de devenir tumorales. Néanmoins, l'ensemble des hépatocytes semblent démontrer une baisse de la communication intercellulaire caractérisée par une baisse de la Cx32.  Une observation novatrice  importante  est   1 'absence  de  lien  entre  la  baisse  de  la  communication intercellulaire et le taux de prolifération de hépatocytes.  Le dimorphisme sexuel dans l'effet hépatique de l'HCB semble donc reposer très fortement sur la perte de communication intercellulaire à la grandeur du foie.


identifier: Lévesque, Annie  (2002). Stratégie de production d’anticorps monoclonaux spécifiques de Ly49B, un récepteur particulier des cellules NK murines.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 141 p.

subject: anticorps monoclonal ly49b recepteur nk cellule tueuse-naturelle rats

abstract:
Les cellules NK de souris peuvent exprimer une variété de récepteurs dont la majorité appartiennent à la famille Ly49 qui contient des récepteurs d'activation et  des  récepteurs  d'inhibition.  Le  récepteur  Ly49B,  ayant  un  ITIM (lmmunoreceptor Tyrosine-based lnhibitory Motif) dans sa portion cytoplasmique, il a le potentiel d'être un récepteur d'inhibition. Toutefois, sa fonction n'a toujours pas été démontrée. Au plan structural, il est le récepteur le plus différent des autres membres de la famille Ly49. Exploitant cette particularité, nous avions comme objectif de produire un anticorps monoclonal spécifique de ce récepteur afin de pouvoir l'utiliser pour déterminer son expression sur différentes cellules notamment les cellules NK, LAK et NKT dans différents tissus de différentes souches de souris, pour analyser la modulation de son expression selon l'haplotype H-2 et finalement pour confirmer sa capacité à inhiber la cytotoxicité des cellules NK.

Tout d'abord, 9 rats ont été immunisés avec des cellules LAK de souris. Après avoir analysé les sérums immuns, 4 rats ont été choisis pour faire des fusions entre les cellules spléniques et des cellules myélomateuses de souris. Lors de ces 4 fusions, 1550 surnageants d'hybridomes ont été analysés en ELISA pour la présence d'anticorps spécifiques de séquences uniques du récepteur Ly49B insérées dans des phages filamenteux. 57% des hybridomes sécrétaient des lg, mais aucune de celles-ci ne réagissait avec le récepteur Ly49B. Afin de diminuer la  compétition  antigénique attribuable aux	autres protéines de  surface des cellules  LAK,  nous  avons  tenté  de  produire  le  domaine  extracellulaire  du récepteur Ly49B soluble en utilisant un système d'expression de protéine dans les levures Pichia pastoris. De nombreuses difficultés sont survenues lors des transformations 	et 	seulement	90 	transformants	ont	pu 	être 	analysés. Malheureusement, aucun de ceux-ci ne sécrétait une forme stable du domaine extracellulaire  du  récepteur  Ly49B.  Finalement,  nous  avons  transfecté  des cellules humaine Jurkat T J77.6 avec l'ADNe du Ly49b inséré dans le vecteur
d'expression eucaryote SRapuro. Cinq rats ont été immunisés avec ces cellules. Après avoir analysé les sérums pour nous assurer que les animaux avaient réagi à  l'immunogène, les fusions ont été effectuées. Lors des 4 premières fusions,
341 surnageants d'hybridomes ont été analysés par cytométrie en flux pour la

présence d'lg spécifiques du récepteur Ly49B. Toutefois, étant donné que seulement 10% des hybridomes produisaient des lg, il n'est pas surprenant qu'aucun de ceux-ci n'ait reconnu le récepteur Ly49B. La dose administrée au dernier rat a été augmentée. Un hybridome produisant un anticorps se liant sélectivement aux cellules transfectées avec l'ADNe du récepteur Ly49B a ainsi pu être identifié. Toutefois, malgré que nous ayons atteint cet objectif, le temps alloué pour mes études de maîtrise ne m'a pas permis de poursuivre sa caractérisation.

En résumé, l'échec des fusions avec les cellules spléniques des animaux immunisés avec des cellules LAK est probablement attribuable au faible niveau d'expression du récepteur Ly49B sur  ces  cellules. L'immunisation  d'animaux avec la portion extracellulaire soluble de la protéine aurait été la meilleure alternative, mais nous ne sommes malheureusement pas parvenus à la produire. Finalement, l'immunisation des rats avec une forte dose de cellules transfectées a porté fruit. Des analyses futures nous permettront de confirmer la spécificité de l'anticorps et d'enfin poursuivre la caractérisation de ce récepteur particulier.


identifier: Longtin, Angélique  (2002). Le rôle de DAP12 dans la phagocytose par les récepteurs Fc  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 119 p.

subject: phagocytose

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.DAP12 est  une protéine  transmembranaire  qui doit s'associer  à un récepteur afin d'être exprimée à la surface de la cellule.   Le domaine cytoplasmique de cette protéine comprend une séquence consensus ITAM ( Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif) suffisante pour initier une cascade d'activation cellulaire.

C'est chez les cellules NK que les fonctions associées à DAP12 ont été le mieux caractérisées, puisque plusieurs récepteurs associés à DAP12 dont la fonction est bien définie ont été identifiés chez ces ceJlules. Par contre, les fonctions attribuées aux récepteurs associés à  DAP12  exprimés  chez  les  ceJlules myéloïdes  (MDL-I,  SIRPB1, TREM-1,  TREM-2, TREM-3) demeurent peu connues.  Par conséquent, nous avons choisi d'étudier  le rôle joué par DAP12 dans l'exercice de différentes fonctions du macrophage.

Pour ce faire, nous avons  exprimé de façon stable dans la lignée de macrophages murins RAW 264.7 une version de type sauvage et une version mutée de la protéine DAP12. Ces deux  versions sont étiquetées à l'aide  d'un  épitope Flag (Fiag-DAP12).     La version modifiée (Fiag-DAP12-Y76F) contient une mutation qui remplace le second résidu tyrosine de l'ITAM pour un résidu phénylalanine (Y75F).  Cette altération prévient le recrutement de la protéine tyrosine kinase Syk à l'ITAM de DAP12 et par la même occasion inhibe les fonctions exercées par DAP12. En effet, le pontage à l'aide d'anticorps de Flag-DAP12, mais non de Flag-DAP12-Y76F, induit la sécrétion de TNF-a. Par conséquent, la surexpression de cette protéine mutée devrait avoir un effet dominant-négatif (DN) sur la cellule.

Nous nous sommes ensuite intéressés aux fonctions exercées par DAP12 lors de la phagocytose  via  les  récepteurs  FcyR.    Dans  ces  expériences,  nous  avons  utilisé  des érythrocytes de moutons opsonisés avec des immunoglobulines de type G (IgG-SRBC).  La phagocytose d'lgG2a-SRBC est augmentée de façon significative chez les cellules exprimant la version mutée de DAP12. Cette hausse est due à la fois à une augmentation de la cinétique

d'attachement et à une augmentation de la cinétique d'internalisation des IgG2a-SRBC. Nous avons alors analysé par microscopie confocale le processus de polymérisation de l'actine filamenteuse lors de l'attachement des lgG2a-SRBC.   Ces expériences ont démontré que la formation de coupes d'actine  sous la particule à ingérer est plus rapide chez les cellules exprimant la forme mutée de DAP12.

Aucun  effet  spécifiquement  associé  à  DAP12  n'a   pu  être  observé  lors  de  la phagocytose  d'lgG2b-SRBC,  d'lgG3-SRBC   et  de  billes  de  latex  nues.     Nos  résultats suggèrent ainsi que la protéine DAP12 est impliquée dans la phagocytose via les FcyRI, en partie grâce à une régulation négative de la polymérisation de l'actine lors de ce processus.


identifier: Moisan, Eliane  (2002). Modulation de l’apoptose des neutrophiles humains par le mercure.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 92 p.

subject: apoptose neutrophile mercure

abstract: Le mercure est un contaminant  de l'environnement qui perturbe le système immunitaire. Il a été démontré que de faibles  niveaux de mercure organique et inorganique  induisent l'apoptose  des  cellules   mononucléées   humaines  (lymphocytes   T  et  B,  monocytes). Cependant,  les effets du mercure sur la viabilité et le type de mort cellulaire induits chez les neutrophiles  humains constituent un sujet très peu étudié. Dans la présente étude, nous avons comparé deux formes chimiques de mercure, soit une forme de mercure organique (MeHgCI) et une forme de mercure inorganique (HgCb).  Des études de cinétiques  et de concentrations-réponses  ont  été  effectuées   in  vitro  par  cytométrie   en  flux  afin  de déterminer  les niveaux  d'apoptose  et de nécrose subis par les neutrophiles  en présence des deux formes de mercure. Les résultats démontrent que le MeHgCl, à de faibles concentrations  (1-7,5 JlM), inhibe l'apoptose  des neutrophiles  humains, contrairement  à ce qui a été observé avec les cellules mononucléées. De faibles niveaux de HgCb  inhibent l'apoptose des neutrophiles,  mais de façon  moins importante  que  le MeHgCI.  De plus fortes concentrations  de mercure organique et inorganique furent nécrotiques, le MeHgCl étant  plus toxique que le HgCb.  De plus, des différences ont été perçues au niveau des modes de mort cellulaire induits par les deux formes de mercure chez les neutrophiles humains.  Tandis  que  le MeHgCl  induit  l'apoptose  de  tous  les  neutrophiles  en  même temps,  des  concentrations  supérieures  à  100  JlM  de  HgCb   induisent  directement   la nécrose sans qu'il  n'y ait de transition évidente en apoptose.


identifier: Ochietti, Benoit  (2002). Nouvelle approche de thérapie génétique ciblant l’expression d’ICAM-1  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 208 p.

subject: therapie genique icam-1

abstract:
ICAM-1 joue un rôle crucial dans le recrutement leucocytaire lors des processus inflammatoires  et  dans le processus  de la présentation  d'antigène.  ICAM-1  représente donc   une   cible   thérapeutique   de   choix   dans   la   lutte   contre   plusieurs   maladies inflammatoires et néoplasiques. Les premiers outils thérapeutiques étaient basés sur l'utilisation  d'anticorps  monoclonaux  dans  le  but  de  bloquer  l'activité   d'ICAM-1. Cependant 1'échec des thérapies  à base d'anticorps force le développement  de moyens alternatifs dans le but de contrôler l'activité  d'ICAM-1.
La thérapie génique permettrait de moduler l'expression  ou l'inhibition  de l'expression  d'ICAM-1  dans un organe ou compartiment biologique ciblé. Actuellement, les transporteurs  d'ADN,  à base de virus ou  de liposomes,  considérés  dans  les essais cliniques, n'ont  pas encore permis d'obtenir  des résultats  positifs, ce qui est notamment dû  aux  limitations  intrinsèques  de  ces  technologies :  toxicité,  agrégations,  réactions immunitaires, etc.
Cette situation pousse 1'industrie à tenter de développer de nouveaux outils, aussi bien  dans  l'amélioration  des  molécules  d'antisens   que  dans  le  design  de  nouvelles stratégies   de  formulation   transporteurs-ADN.   Ces  nouveaux   types  de  transporteurs devront être peu toxiques, permettre une biodistribution de 1'ADN vers un organe ciblé, être simples à synthétiser et de façon économique.
Ainsi, Supratek Pharma inc. a développé un nouveau concept de transporteurs qui permettraient la formation de complexes stables et solubles en milieu aqueux. Ces transporteurs sont basés sur l'attachement de plusieurs blocs possédant des propriétés physicochimiques désirées. La présente étude avait pour buts d'étudier  ces transporteurs, les copolymères ionomériques en bloc, pour le transport de molécules d'ADN  in vitro et in vivo, et de les valider dans des modèles touchant l'expression  d'ICAM-1  chez la souris. Les résultats ont démontré que les polymères ionomériques en bloc permettaient une transfection  d'oligonucléotides  dans  des  cellules  in  vitro et  leur  accumulation  dans différents organes in vivo. L'un  de ceux-ci, le PI2080  (PE0(8K)-g-PEI(2K)), a permis une transfection  des cellules in vitro à un niveau égal ou supérieur à la lipofectine,  un transporteur  commercial.  Suivant  l'injection   i.v.  dans  les  souris,  ce  complexe  s'est accumulé  préférentiellement  dans les  reins. De  plus, un oligonucléotide  antisens  anti ICAM-1  a  conservé  son  activité  inhibitrice  dans  cet  organe  en  bloquant  l'expression

Xl

d'ICAM-1 suivant une injection i.p. de LPS. Un autre polymère, le P85PEI (P85-g PE1(2K)), bien qu'ayant une activité de transfection plus faible que la lipofectine in vitro, a permis l'accumulation d'un oligonucléotide dans le foie tout en évitant presque complètement les reins. Dans le cas du transport de plasmide, le P123PEI complexé à un vecteur d'expression codant pour ICAM-1, a permis une expression d'ICAM-1  dans le foie de souris ICAM-1 déficiente. De plus, cette expression a déclenché le recrutement de neutrophiles  dans  le  foie.  Cette  observation  peut  être  intéressante  à  exploiter  en permettant le recrutement de cellules effectrices dans un organe ciblé.
Une autre partie du projet a porté sur l'étude  des isoformes d'ICAM-1  et leur activité possible chez des souris injectées au LPS. Les résultats ont démontré l'absence d'isoformes dans le foie des souris C57BL/6 et des ICAM-1-déficientes JCGR injectées au LPS, mais la présence des isoformes 4-6 et 3-6 d'ICAM-1  dans le cas des souris ICAM-1-déficientes Tm1Bay. Une infiltration de neutrophiles a également été observée dans ces dernières, ainsi qu'une  sensibilité au choc septique induit  par le LPS.  Ces résultats suggèrent une activité possible des isoformes d'ICAM-1 dans des processus biologiques.
En conclusion, les résultats de ces études ont démontré le potentiel des polymères ionomériques en bloc pour le transport d'ADN in vivo et d'en altérer la biodistribution. Le ciblage de l'activité d 'ICAM-1 par thérapie génique est possible en utilisant ce type de transporteur. Finalement, les isoformes d'ICAM-1 peuvent avoir une activité biologique et  dont leurs fonctions restent à démontrer. lls permettraient probablement des voies alternatives d'activation et de recrutement cellulaire.


identifier: Ouellet, Valérie  (2002). Expression de gènes de mycobacterium tuberculosis chez streptomyces lividans  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 133 p.

subject: mycobacterium tuberculosis streptomyces lividans

abstract:
L'utilisation de Streptomyces bvidans, pour rexpression  de gènes hétérologues,  est  de  plus  en  plus  fréquente.  Il  représente  un  excellent  hôte, puisqu'il s'agit d'un  microorganisme bien connu, non pathogène pour l'homme et avec une capacité  limitée  à dégrader l'ADN  hétérologue. Il est un candidat de choix pour la production  de protéines fonctionnelles de A{vcobacterium tuberculosis, en raison que le contenu génomique en guanine et en cytosine (G+C) des mycobactéries (- 65  %) est similaire à celui de S. lividans  (- 74%). Cette étude a pour but de valider cette hypothèse, en plus de permettre la purification et la caractérisation des protéines sélectionnées et de fonction inconnue.

Les travaux portent,  plus précisément, sur  les  gènes de  la famille PE PGRS (PE pour les motifs proline-acide glutamique trouvés près de l'extrémité N tenninale des protéines,  PGRS pour  "Polymorphie Guanine  c_vtosine  Repetitive Sequences").    Cette   famille,   unique  à   quelques   mycobactéries   pathogènes, comporte 61 gènes dispersés  sur le chromosome codant  pour des  protéines de fonction  inconnue.  Plusieurs   spéculations  existent  quant  aux  rôles  de  ces protéines; entre autres,  elles  auraient  une implication  dans  la capacité de M tuberculosis  à se répliquer dans un macrophage et à y persister. Les facteurs de persistance sont de bonnes cibles thérapeutiques visant la mort de la bactérie, ce qui est de  plus en  plus  difficile  présentement, malgré les assauts du système immunitaire de l'hôte et les antibiotiques disponibles. Ainsi, l'étude des protéines encodées par les gènes de la famille PE-PGRS est une avenue intéressante et ce, non seulement  pour  le développement  de  nouvelles drogues,  mais aussi pour l'amélioration des outils diagnostiques.


identifier: Pagé-Bélanger, Rachel  (2002). Étude protéomique de Desulfitobacterium frappieri PCP-1 lors de l’induction pour la déshalogénation réductrice en position ortho du 2,4,6-TCP.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 141 p.

subject: desulfitobacterium frappieri pcp-1 deshalogenation reducteur proteome

abstract:
Desulfitobacteriumfrappieri PCP-1 est le seul microorganisme connu capable de déchlorer le pentachlorophénol aux positions ortho, meta et para. D. frappieri PCP-1 dégrade  également  un  large  spectre  de  composés  aromatiques  substitués  avec  un groupement hydroxyle ou aminé. Cette activité de déchloration implique au moins deux déshalogénases réductrices associées à la membrane. La déshalogénase I, qui effectue essentiellement de la déshalogénation en position ortho, a été récemment purifiée d'une culture de la souche PCP-1  dégradant le 2,4,6-trichlorophénol (2,4,6-TCP). Afin de mieux comprendre le mécanisme de déshalogénation réductrice en position ortho chez D. frappieri PCP-1, une étude protéomique comparative de la souche PCP-1 cultivée en absence et en présence de 2,4,6-TCP a été entreprise. Des fractions membranaires et cytoplasmiques ont été recueillies pour chaque culture et les protéines de ces fractions ont  été  séparées  dans  des  gels  électrophorétiques  en  deux  dimensions  (2D).  La comparaison  des  fractions  membranaires des lots  induits et  non-induits a  révélé la présence de deux  protéines réprimées (47 et 57 kDa) ainsi qu'une  protéine induite (15 kDa) lors de la déshalogénation en position ortho du 2,4,6-TCP. La déshalogénase 1 s'est  retrouvée tant  dans  les cellules induites  que  non-induites  pour  le  mécanisme étudié, suggérant que cette protéine est constitutive. La déshalogénase I se retrouvait en quantité moins abondante dans les fractions cytoplasmiques que membranaires, ce qui laisse croire que cette protéine est faiblement reliée à la membrane. La séparation de la déshalogénase I (protéine 37 kDa) par électrophorèse 2D a également montré que cette protéine se présente sous plusieurs isoformes. Les protéines d'intérêt identifiées dans les gels après électrophorèse 2D ainsi que la déshalogénase I ont été par la suite digérées à la trypsine avant d'être  analysées par spectrométrie de masse sur un triple quadripôle couplé à une nanoélectrovaporisation. Les séquences peptidiques de la déshalogénase I ont permis d'isoler et de séquencer le gène de la déshalogénase I chez D. frappieri. Cette séquence ne présente aucune homologie significative avec une protéine dont la fonction est connue dans les banques de données. Cependant, un gène similaire a été retrouvé dans le génome de  Desulfitobacterium hafniense. La protéine  réprimée de
47 kDa a été identifiée comme étant la sous-unité p de 1'ATP synthétase alors que la

protéine réprimée de 57 kDa a été identifiée comme une sous-unité de la glycolate oxydase.


identifier: Patenaude, Julie  (2002). Les brûlures sévères modifient l’homéostasie des lymphocytes T en altérant l’activation des cellules T naïves.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 121 p.

subject: immunosuppression brulure lymphocyte cytokine homeostasie

abstract:
Suite à un traumatisme, telle que la brûlure sévère, on observe une altération du système immunitaire conduisant à un état d'immunosuppression chez les patients.   Cette perturbation du système immunitaire a pour conséquence de diminuer les capacités de l'organisme à répondre aux infections secondaires, d'où J'apparition du choc septicémique, principale cause de mortalité observée chez les patients brûlés.   L'immunosuppression est d'origine  multifactorielle et  elle  implique en autre  le relâchement d'endotoxines suite à une perte de la perméabilité du tractus gastro-intestinal, d'où  une translocation bactérienne.   Il s'ensuit également une production massive de multiples médiateurs inflammatoires tels que les protéines du complément, les prostaglandines, les radicaux libres, de l'oxyde nitrique, ainsi qu'une perturbation du système hormonal et du système immunitaire.

Le système immunitaire est un réseau complexe où interagissent diverses cellules et molécules dans le but est de générer une protection adéquate à rorganisme contre divers micro-organismes. Lïnduction d'une réponse immunitaire spécifique implique deux groupes essentiels de cellules:  les lymphocytes ct  les cellules présentatrices de  l'antigène  (CPA).    Il  existe deux  populations bien définies des lymphocytes T, cellules étant l'un des nombreux types de cellules blanches du sang produites dans la moelle osseuse: les cellules T auxiliaires et les cellules T cytotoxiques, qui se distinguent par leur expression des co-récepteurs CD4 et CD8.   Lorsqu'une cellule T naïve reconnaît un complexe antigène-CMH à  la surface des cellules  présentatrices d'antigène,  elle s'active  et  il s'ensuit  une expansion clonale des cellules T, initiant ainsi une réponse immunitaire primaire.  Un contact ultérieur de 1 'hôte avec un un même antigène induira une réponse immunitaire secondaire. qui sera plus rapide et plus forte que la précédente.  La sécrétion de cytokines, telles que l'IL-2  et l'IL-12, amène les cellules T naïves activées à proliférer et à se différencier en population de cellules T effectrices ou mémoires. Le bon maintien des fonctions effectrices de ces cellules est dépendant de l'état d'équilibre qui existe entre les divers signaux de survie et les signaux de mort qu'elles reçoivent; où le signal le plus fort influencera son devenir.   Suivant un traumatisme, le processus de prolifération, le mode d'activation de ces cellules, le relâchement des molécules essentielles à leur survie (cytokines) ainsi que le processus de mort cellulaire sont des mécanismes vulnérables aux changements provoqués par une brûlure sévère.

L'importance du bon maintien du système immunitaire ainsi que sa grande sensibilité suivant un traumatisme, sont des facteurs qui ont influencé l'établissement de ce projet de recherche.   Ainsi,l'objectif de cette étude était de démontrer et de cibler les effets modulatoires d'une brûlure sévère sur l'immunité d'un  organisme, qui dans bien des cas  résultait d'un  état d'immunosuppression.   Des études antérieures ont tenté d'élucider les conséquences d'une  brûlure sévère sur l'ensemble des lymphocytes, en étudiant les changements phénotypiques des populations lymphocytaires, leur capacité de prolifération in vitro et leur habilité à synthétiser des cytokines.   Des études faites dans notre laboratoire, ont également démontré que l'état d'immunosuppression, analysé par divers paramètres, s'établissait au 10" jour suivant le traumatisme d'une  brûlure.   À partir de ces analyses, une approche expérimentale a été établie afin d'élucider les altérations des fonctions lymphocytaires suivant une brûlure sévère, soit par leur capacité à proliférer, leur niveau d'expression et d'activation dans la rate, ainsi que leur niveau apoptotique et/ou d'anergie.   Nous avons donc étudié à partir d'un modèle murin, soumis à une brûlure sévère correspondant à 20% de la surface totale (TBSA), l 'effet du traumatisme d'une brûlure sur l'homéostasie des lymphocytes T tant naïfs qu'effecteurs en relation avec leur niveau d'apoptose et  leur état d'anergie, 1, 5 et 10 jours post-trauma.

Un jour suivant le traumatisme d'une  brûlure. il a été observé une importante baisse de la cellularité dans la rate, une hausse de la capacité des lymphocytes à proliférer in vivo ainsi que augmentation de l'expression des cellules T CD4+ et CD8+ naïves, alors que l'induction de l'apoptose est fortement réduite.  L'analyse de ces résultats a permis de suggérer qu'à cette période suivant le traumatisme, les fonctions effectrices des lymphocytes sont stimulées dans le but d'induire une réponse immunitaire
qui compenserait cette perte massive de cellules dans la rate.  À l'opposé,  nous avons observé au 10ième jour,  une forte  induction d'apoptose  des cellules CD4+ naïves, associée à  une activation de ces dernières. Malgré que le nombre de cellules dans la rate soit supérieur au groupe témoin et que le niveau de prolifération des cellules soit à la hausse, les cellules naïves sont incapables d'induire une réponse adéquate 10 jours post-trauma.   À ce même jour, nous avons également observé que les cellules T, provenant du groupe-brûlé, étaient non stimulables en présence de cellules présentatrices d'antigènes du groupe témoin, soit les macrophages.  De plus, il a été démontré au jour 10 que les macrophages du groupe-brûlé étaient moins efficaces à stimuler les lymphocytes T du groupe témoin. Deux hypothèses émergent de cette  dernière observation:   (1) qu'une  partie des cellules T  sont anergiques et/ou (2) que les macrophages sont incapables d'activer les cellules T.  Cette étude a donc clairement établi que les cellules T naïves activées étaient fortement en apoptose et par conséquent, elles pourraient en partie responsables de l'état d 'immunosuppression suivant une brûlure sévère.


identifier: Petzke, Tracy L.  (2002). L’If Canadian : composition des boutures versus les plantes matures.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 124 p.

subject: if-canadien paclitaxel

abstract:
The isolation of paclitaxel (Taxol®, Bristol-Meyers Squibb) in 1971 by Wani et al. and the eventual approval of it's use as a treatment for breast, ovarian and lung cancer almost twenty years later has greatly increased the study of paclitaxel  and it's analogues, the taxanes.   There are over three hundred and fifty of these natural products already reported from various natural sources, largely from the many species of yew, each with varying structural characteristics and bioactivities. The taxanes are studied not only for their potential anti-cancerous properties but also for the information they may provide towards the elucidation of the biosynthetic pathway of paclitaxel.
The study of the Canadian Yew, Taxus canadensis, has shown that this species of yew differs from the other species of yew not only its appearance, which is smaller and rambling, but also in its composition of taxanes. While major taxanes such as paclitaxel and 10-deacetyl-baccatin III found in the numerous other species ofyew are also found in the Canadian Yew, their proportions are different. Also different is the taxane 9-dihydro-
13-acetyl-baccatin III, which has been reported as the major taxane of the Canadian Yew. Found only in minute quantities in other species ofyew, this taxane is found in quantities three  to  seven  times  greater  than  the  amount  of  paclitaxel  in  the  Canadian  Yew, regardless of the season ofyear  or location of the plant (Zamir et al., 1995:73:655). This difference in the composition of the Canadian Yew versus the other species of yew has spurred the continued study of the Canadian Yew in the laboratory of Dr Lolita Zamir.
ln this study, the taxane content of rooted cuttings of Taxus canadensis was assessed and compared to the content of the previously studied needles and stems of the mature Taxus canadensis plant. The study of the composition ofrooted cuttings was done in order to establish whether a difference in composition between the mature Canadian yew and its rooted cuttings existed, and to thereby lead to the possible establishment of rooted cuttings as a feasible model for future biosynthetic studies, as weil as to possibly lead to the discovery of new taxanes.
Twenty-nine taxanes were isolated and characterized from the rooted cuttings of Taxus canadensis by a series of chromatography purifications, using column chromatography  and  high-pressure  liquid  chromatography  (HPLC)  techniques. The
resulting purified taxanes or mixtures of taxanes were analysed by NMR and mass spectroscopy. These analyses allowed the characterization of three new taxanes as weil as the identification of twenty-six known taxanes, of which fourteen taxanes were isolated for the first time from Taxus canadensis. The three major taxanes isolated from the rooted cuttings were 5-decinnamoyl-taxagifine, 10-deacetyl-baccatin III and paclitaxel, compared to 9-dihydro-13-acetylbaccatin III, taxinine and taxinine E as already reported for the mature Canadian yew (Zamir et al., 1992:33:36:5173, Zamir et al., 1995:73:655).
These results show a difference in the taxane content of the rooted cuttings versus

the mature Taxus canadensis and suggest a change in the taxane content of the plant may be due to the preparation of the rooted cuttings from the mature trees. The previously reported difference in taxane content of the Canadian yew compared to the other yew species, combined with the difference in taxane content of the rooted cuttings compared to the mature Canadian Yew encourages the continued study of the rooted cuttings of the Canadian Yew in our laboratory. This may lead to the possible future use ofthese  plants
as models for biosynthetic studies ofpaclitaxel in the Canadian yew.


identifier: Sauvé, Dominike  (2002). Étude des fonctions auxiliaires des lymphocytes T CD4+ dans un modèle murin de rejet de greffe de peau.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 142 p.

subject: lymphocytes modele murin rejet greffe

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Afin d'approfondir le rôle des réponses alloréactives  directe et indirecte  dans la production en alloanticorps et dans la modulation des cellules T cytotoxiques CD8+, notre laboratoire a développé un modèle innovateur basé sur l'utilisation d'une  lignée de souris transgéniques (2.1 02Tg) pour un récepteur de la cellule T dérivant, d'un  clone de cellule T  CD4+.	Dans  ce  modèle,  un  seul  clonotype   de  cellule  T  est  capable   à lui  seul d'alloréactivité directe et indirecte.   Nous avons utilisé  un système  de transfert  adoptif avec des cellules T CD4+ purifiées provenant de souris 2.102Tg, et effectué des greffes de peau de queue de souris sur des C57BL/6J TcratmttMom croisées avec des souris B6.AKR pour  introduire la  mutation  dans  un  haplotype   H-2k (TCRaKOK). 	Ces  souris  ne possèdent   pas  de  cellules  T  périphériques CD4+ ou  CD8+  TCRaB, et  se  trouvent incapables de rejet de greffe.  Les observations faites indiquent que le rejet des allogreffes se produit dans les deux voies d'alloréactivité entre les jours 14 et 18.  La production en alloanticorps  dans les sérums obtenus avant et après le rejet a été analysée par cytométrie
en flux.  Les résultats démontrent, suite à un transfert adoptif de 10x10 6 cellules T CD4+, une production en anticorps lgG chez les souris ayant rejeté leur allogreffe par la voie indirecte.   Par contre, aucune production en anticorps lgG n'a  été observée  dans la voie directe d'alloréactivité. Ces résultats indiquent donc que la voie indirecte est requise pour les réponses en alloanticorps.  Il a également été démontré,  à partir des résultats obtenus suite au transfert adoptif de différentes quantités de cellules effectrices,   une absence de corrélation entre les réponses en anticorps et le rejet aigu de greffe de peau. Les résultats obtenus  suggèrent  que l'absence de production  en anticorps  suite au rejet de greffe de peau dans la voie directe d'alloréactivité  suggère une absence d'activation des cellules B, possiblement  due à une absence d'activation des cellules T dans les organes lymphoïdes secondaires.     De plus, la présence des cellules T CD4+ semble nécessaire pour permettre la maturation   des cellules T CD8+ en CTL qui vont lyser les cellules cibles du greffon. Ainsi, les événements menant à l'initiation des réponses immunes responsables  du rejet des al ogreffes de peau peuvent différer entre les deux voies d'alloréactivité.


identifier: Sene, Jupiter  (2002). Construction de trois virus de l’immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1) portant des mutations dans le gène nef : contribution à l’étude du rôle de Nef dans la pathogenèse associée à l’infection virale  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 180 p.

subject: VIH-1 virus immunodeficience nef gene

abstract:
Le syndrome  de  l'immunodéficience acquise  (SIDA)  a été  décrit  au  début  des années quatre-vingt  comme une maladie mortelle caractérisée par une immunodépression grave.   Cette   dernière   est   à  l'origine   de   la  vulnérabilité   à   un  grand   nombre   de microorganismes   pathogènes  responsables  de  diverses  infections  opportunistes  et  de certaines formes rares de néoplasmes. Divers travaux sur le virus de l'immunodéficience humaine  (VIH),  l'agent   étiologique  du  SIDA,  postulent  l'existence d'une   corrélation entre le rôle de certains gènes viraux et le développement  de la maladie. Le gène nef, en particulier, a fait l'objet  de nombreuses études. Malgré toutes les connaissances  à date sur ses fonctions in vitro et in vivo, la corrélation entre la présence d'un  gène nef défectif ou intact  et  la progression  ou  non de la maladie  présente  encore  certaines  ambiguïtés  et quelques  controverses.  En  effet,  cette corrélation  était  basée  sur  le degré  de compréhension  de son  importance  dans  le cycle  viral et  sur  les effets  protecteurs  des vaccins vivants atténués dans le modèle animal. De plus, la faible virémie et l'absence d'évidence de progression  vers le SIDA observées  chez des  macaques  adultes  ou  chez des humains infectés, respectivement, par le virus de l'immunodéficience simienne (VIS) ou le VIH portant des mutations dans le gène nef suggéraient  également l'implication de ce gène dans le développement  de la maladie.
Le principal objectif de ce travail était de construire  des VIH-1  mutants  pour le gène  nef,  permettant,   à  l'issue   de   leur  caractérisation   biologique,   d'apporter   une contribution  dans 1'étude du rôle de la protéine Nef dans  la cytopathogénicité,  dans  la cinétique  de la réplication  et/ou dans l'augmentation  de l'infectivité virale in vitro. Les mutations  dans  le gène  nef  introduites  par  mutagenèse  dirigée  par  PCR  nous  auront permis de produire : a) un virus potentiellement  négatif pour la protéine  Nef,  le VIH-1

CDS1.2; b) un second virus qui n'exprime  que les résidus 1-19 de la région N-terminale de la protéine Nef, le VIH-1 CDS2; etc) un dernier virus qui n'exprime  que les résidus
20-206  de la protéine,  le VIH-1  CDS1.  Ces virus construits  et caractérisés  sur  le plan physique  et  partiellement  sur  le  plan  biologique  ont  été  réalisés  de  façon  à  pouvoir vérifier  le rôle de  la  région  N-terminale  dans  la cinétique  de  réplication  virale,  dans l'infectivité  et  dans  la  cytopathogénicité.   De  plus,  l'hypothèse  de  l'implication   du potentiel  fusogénique   associé  à  la  région  N-terminale  dans  le  processus   de  fusion cellulaire  aboutissant  à  la  formation  des  vacuoles  qui  caractérise  les  effets cytopathogènes de l'infection  par le VIH-1  in vitro a été étudiée.  Cette  étude  visait à évaluer ce potentiel (antérieurement décrit et observé sur les liposomes et sur les immunosomes-Nef) dans  le  contexte  d'une  infection  virale  in  vitro. Finalement,   des essais  sur  le rôle de la protéine Nef recombinante  fournie  en  trans dans  la cytopathogénicité  et l'infectivité du VIH-1 LAI dans les cellules CEM ont été effectués.
Les résultats obtenus suggèrent l'existence  d'une  corrélation entre la présence des résidus 20-206 de la protéine Nef et le maintien des titres viraux à des niveaux élevés in vitro. Quant à la courte portion N-terminale formée par les résidus 1-19, elle serait plutôt impliquée  dans les aspects  qualitatifs et quantitatifs  des effets cytopathogènes produits. La  protéine  recombinante  Nef produite dans le système  d'expression baculoviral  a été
purifiée  sur  colonne  héparine-sépharose   à  plus  de  80%  d'homogénéité.  Lorsque   les cellules  CEM   ont  été  préalablement   mises  en  contact  avec  la  protéine  Nef  avant l'infection par le VIH-1 LAI, nous avons enregistré  une augmentation  du rendement  en virus infectieux,  en corrélation avec les effets cytopathogènes  observés dans les cellules infectées.

En dernière  analyse,  grâce à la caractérisation  physique et biologique  des  virus mutants construits ainsi que les essais sur le rôle de la protéine Nef recombinante  fournie en trans dans la cytopathogénicité  et l'infectivité  du VIH-1 LAI dans les cellules CEM, nous avons  montré que la protéine Nef était impliquée dans la régulation  de différentes étapes  du cycle de la réplication du virus, dans l'augmentation  de l'infectivité virale et dans  la cytopathogénicité.   De  plus, le potentiel  fusogénique  de  la région  N-terminale semble se manifester dans l'aspect qualitatif des effets cytopathogènes  produits lors d'infections des cellules CEM, en modulant le degré de la formation  des syncytia  et de vacuoles   résultant   de  la  mise  en  commun  des  membranes  plasmiques  des  cellules fusionnées.  Ainsi, les résultats issus de cette étude nous permettent d'appuyer l'hypothèse de l'implication de Nef dans la progression de la maladie en facilitant la réplication virale à  des  niveaux  plus  élevés.  De  plus,  la  cytotoxicité  directe  de  Nef  sur  les  cellules constituerait  un autre mécanisme permettant d'expliquer  la déplétion encore très ambiguë des lymphocytes  CD4+ chez les sidéens. Donc, il demeure nécessaire et très pertinent de poursuivre les travaux sur le produit du gène nef afin de mieux cerner les propriétés de ce dernier et de mieux évaluer son implication dans la progression de la maladie, car les perspectives de développement de nouvelles stratégies de vaccins préventifs et/ou thérapeutiques  chez l'humain  contre l'infection  par le VIH et l'évolution de la maladie mortelle induite restent encore très prometteuses.


identifier: Simard, Catherine  (2002). Caractérisation de dioxygénases du biphényle produites par ingénierie génétique.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 109 p.

subject: bpc biphenyle dioxygenase

abstract: Les biphényles polychlorés (BPC) sont  des composés xénobiotiques introduits récemment dans l'environnement. La détection de ces produits toxiques dans la biosphère et leur accumulation dans les tissus d'organismes  vivants a dévoilé la limite de notre écosystème à  minéraliser ces  composés. Autre  que  par  l'intervention  de  techniques physico-chimique pour l'élimination de ces contaminants et qui demeurent insatisfaisants jusqu'à présent, l'utilisation de procédés de dégradation par les microorganismes est une avenue  intéressante. Plusieurs microorganismes disposent  d'un  système enzymatique pouvant transformer certains congénères BPC, par la voie de dégradation du biphényle. Cependant, les bactéries aérobies identifiées ne transforment qu'un  nombre restreint de congénères BPC essentiellement ceux à faible teneur en chlore, excluant les congénères à fort  pourcentage de  chlore ou  de  forme  co-planaire. La  dioxygénase  du  biphényle (BPDO),  qui  catalyse  la  première étape  de  la  voie  catabolique  du  biphényle, est déterminante dans le profil de sélection des souches capables de transformer les BPC. Par les connaissances acquises sur le mécanisme réactionnel de la BPDO, ainsi que sur ses éléments structuraux déterminants dans la spécificité de l'enzyme,  il nous est possible d'établir   des  stratégies  de  sa  modification  génétique  afm  d'améliorer   cette  voie catabolique microbienne. L'étude présentée dans ce mémoire comporte deux volets, soit la caractérisation enzymatique d'hybrides de BPDO produits par ingénierie génétique, ainsi que la construction et de la caractérisation enzymatique de BPDO variants produits par recombinaison aléatoire (DNA  shujjling)  entre les BPDO des souches Burkholderia cepacia  LB400 et Comamonas  testosteroni  8356.  Nous avons donc comparé l'activité enzymatique  des BPDO parentales avec celle de BPDO hybrides dans un système in vitro, utilisant des préparations d'enzymes  purifiées et dans un système in vivo utilisant des cellules E. coli exprimant ces enzymes. Ces travaux ont permis de confirmer certaines études antérieures qui mentionnaient que la portion C-terminale de la sous-unité a ainsi que la sous-unité j3 de la BPDO influençaient grandement le profil de transformation des BPC. De plus, nous avons démontré que la BPDO de LB400 est plus flexible à recevoir des modifications structurelles majeures que celle de 8356  par le maintien de l'activité enzymatique de ces hybrides. De même, nous avons identifié trois hybrides LB, LBC et LBCD comme  étant  capables  de  transformer  le  33'44'-tetrachlorobiphényle  encore récalcitrant. Cependant, l'ensemble  de ces  hybrides montre un spectre d'activité  peu varié.  De  ce  constat,  nous  avons  donc  utilisé  l'évolution  moléculaire in  vitro  par recombinaison aléatoire afm d'explorer  un plus grand nombre de BPDO variantes qui pourraient présenter un potentiel catabolique plus large ou varié que ceux	des BPDO identifiées jusqu'à  ce  jour. La stratégie a  été  d'appliquer  la recombinaison in  vitro aléatoire sur les portions du gène bphA en partie C-terminale. Cette approche a permis d'obtenir le mutant II-H intéressant par son habilité à catalyser une oxygénation en ortho meta favorisant une transformation efficace du congénère 2,6-dichlorobiphényle toxique et persistant dans l'evironnement.


identifier: Pilote, Dominique  (2002). Optimisation des conditions de fermentation de la souche ES R2C2 pour la valorisatin du lactosérum.  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 167 p.

subject: lactoserum fermentation lactobacille

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.La valorisation des sous-produits industriels par des procédés biologiques répond à un besoin actuel des industries du secteur agroalimentaire. Le lactosérum qui est issu de la production fromagère est un de ces produits. Sa composition lui confère une charge organique trop importante pour qu'il  puisse être rejeté dans l'environnement sans traitement. Cependant, cette composition en fait aussi un milieu intéressant pour la croissance de bactéries lactiques. Étant donné que les bactéries lactiques utilisent les sucres pour leur croissance, la charge organique du lactosérum s'en trouve diminuée et les produits issus de la fermentation peuvent être récupérés et utilisés pour la valorisation. Dans le cadre de ce projet de maîtrise, les conditions optimales de croissance d'une souche de lactobacille dans le lactosérum ont été déterminées.

Le but du projet est de déterminer les conditions optimales de température, de pH, d'agitation  et de ratio d'inoculation  pour la croissance de la souche ES R2C2 dans le lactosérum ainsi que pour la production d'une matrice protéique malléable (MPMmc) par l'utilisation d'un  modèle mathématique. Cette méthodologie couramment utilisée en fermentation permet de déterminer avec précision et dans un nombre d'essais minimum, les   conditions   optimales   de   croissance   d'un   microorganisme   ou   paramètre   de fermentation.

Le modèle mathématique utilisé est un plan central composite isovariant par rotation. Le plan comporte 27 essais qui servent à déterminer les effets principaux des quatre variables explicatives choisies, les interactions du premier degré (synergie) entre ces dernières, ainsi que 1'erreur expérimentale. Les fermentations ont une durée de 96h et sont conduites en volume de 7 litres de lactosérum stérile. Les variables dépendantes suivies  sont:   la  croissance  bactérienne;   la production  d'acide  lactique;   les monosaccharides et disaccharides ; la production de MPMmc ; le pourcentage (p/p) de solides  totaux  dans  le  MPMmc;  le pourcentage  (p/p)  de  cendres  retrouvées  dans  le
MPMmc.

Le modèle utilisé montre que les variables explicatives  ayant le plus d'influence sur les variables dépendantes étudiées sont le ratio d'inoculation, la température, ainsi que le  pH. L'agitation est  la variable  explicative  ayant le moins  d'influence. Les analyses
montrent  que les conditions  optimales  sont 39 oc pour la température,  5.3  pour  le pH,

15% (v/v) pour le ratio d'inoculation et 10 rpm pour l'agitation.  Dans ces conditions,  la croissance bactérienne maximale atteinte est de 3,3 X108 bactéries/mL, la concentration d'acide  lactique maximale est de 66 mM, alors que la concentration en lactose diminue de
99% après 96 heures de fermentation et que la production de MPMmc est de 33 g/L.