identifier: Graziano, Monica  (2001). La maturation des thymocytes étudiée in situ à l'aide du CFSE et de l'ulex europaeus agglutinnin-1  Thèse.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 323 p.

abstract: Le développement des lymphocytes T est dépendant de signaux fournis par le microenvironnement thymique. Ces signaux peuvent être transmis soit directement, via des contacts lympho-stromaux, soit indirectement via des facteurs solubles produits suite à ces interactions. L'objectif principal de ce projet de doctorat était d'examiner la participation des complexes lympho-stromaux, surtout ceux générés entre les thymocytes et les cellules épithéliales médullaires (CEM), dans le processus de la différenciation et 1'émigration thymocytaire.L'émigration thymique a été, à date, étudiée par l'emploi de divers réactifs. Toutefois, en raison des limitations concernant l'usage de ces réactifs, notamment à cause de leur instabilité, leur toxicité et leur manque de spécificité, nous avons développé une nouvelle technique pour étudier ce processus. Nous avons donc décrit une méthode qui est basée sur l'injection in vivo d'un colorant vital estérifié, le CFSE. Une fois hydrolysé par les estérases des cellules, le CFSE émet à 518 nm et les cellules ainsi marquées peuvent être facilement détectées et analysées par la cytométrie de flux. De plus, les cellules CFSE+ peuvent ensuite être marquées avec des anticorps conjugués à des fluorochromes, qui émettent à d'autres longueurs d'ondes, permettant ainsi une analyse multiparamétrique détaillée du phénotype cellulaire. De cette manière, nous avons démontré que les thymocytes marqués par l'injection du CFSE par voie intrathymique constituent un échantillon représentatif des sous-populations thymocytaires majeures, permettant de déterminer que le taux d'émigration des thymocytes matures est d'environ 2 à 3 millions de cellules par jour, tel que rapporté dans la littérature. En outre, nous avons étudié la cinétique des émigrants thymiques récents dans les organes lymphoïdes périphériques et démontré que le CFSE peut facilement être utilisé pour des études à long terme. Dans une étude connexe et conjointement avec une analyse de l'expression des gènes du thymus, nous avons finalement appliqué cette méthodologie pour étudier l'émigration et la circulation des émigrants thymiques dans la périphérie, chez des souris déficientes en ICAM-1.La lectine Ulex Europaeus Agglutinin-1 (UEA-1) s'attache de façon sélective à une grande population de CEM. Nous avons exploité ce fait pour développer un modèle pour étudier in situ les fonctions des CEM. L'approche expérimentale que nous avons utilisée était d'interférer in vivo avec les interactions thymocytes-CEM par l'utilisation de la UEA-1, tout en gardant intacte l'architecture thymique. Ainsi, en combinant le CFSE, pour son utilité comme indicateur d'émigration thymique et de prolifération, et la UEA-1 pour son attachement sélectif aux CEM, nous avons démontré que les CEM n'étaient pas directement responsables de l'émigration, mais que celles-ci sont impliquées dans le contrôle de la prolifération des thymocytes corticaux. Conjointement à cette étude in vivo, nous avons montré que le traitement de FTOC (fetal thymus organ culture) avec la UEA-1 entraîne une diminution du nombre de cellules TCRap+. En fait, les cellules CD3- et CD310 étaient diminuées de façon marquée. Nous avons ainsi proposé deux scénarios possibles pour expliquer l'ensemble de ces données: 1) l'attachement de la UEA-1 aux CEM pourrait provoquer l'activation de celles-ci, engendrant ainsi une production de signaux qui inhiberaient les thymocytes corticaux, et 2) en raison d'un contact inhibé, une activation moindre soit des CEM, soit des thymocytes médullaires qui normalement s'y attachent, entraîne une production atténuée de facteurs solubles qui seraient responsables de la prolifération des thymocytes.


identifier: Forest, Steve  (2001). Caractérisation du rôle de la région n-terminale de la protéine VP2 du parvovirus porcin  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 121 p.

type:
Thèse
Non évalué par les pairs

abstract: Les connaissances chez le parvovirus porcin et les autres parvovirus ont beaucoup progressé au cours des dernières années, notamment en raison de 1'analyse de la structure de certains parvovirus par cristallographie à rayon X. Toutefois, les relations entre les éléments structuraux de la capside et les fonctions biologiques du virus sont encore relativement peu connues, particulièrement en ce qui a trait à la région N-terminale de la protéine VP2. Cette région, très conservée chez tous les parvovirus, correspond à la portion qui est clivée chez les membres du genre Parvovirus lors de la maturation protéolytique de VP2 en VP3. La signification biologique de cette maturation est toujours inconnue.Nous démontrons ici, par une approche de mutagénèse dirigée, que la portion N-terminale de VP2 est très importante lors du cycle infectieux du virus. Les mutations de délétion réalisées ont pour effet d'anéantir complètement l'infectivité du virus. Nous avons également identifié dans la région du génome codant pour la portion N-terminale de VP2, un segment qui pourrait constituer un court cadre de lecture supplémentaire. Les caractéristiques de ce cadre de lecture sont bien conservées chez plusieurs autres membres du genre Parvovirus et la séquence anticipée de la protéine présente aussi un degré d'homologie intéressant parmi ces virus. Toutefois, aucun ARNm viral ne semble en mesure d'exploiter ce cadre de lecture alternatif, ce qui porte à croire que des mécanismes permettant l'utilisation d' ARNm bicistroniques sont impliqués. La mutagenèse dirigée modifiant le contexte d'initiation aux différents codons de départ ou bloquant la production de cette protéine alternative, surnommée protéine X, se traduit par une modification du phénotype lors de la réplication virale, mettant ainsi en évidence un lien entre ce cadre de lecture et une fonction biologique du virus. Les premiers résultats quant à déterminer le mode d’action de cette protéine virale indiquent que la lyse cellulaire serait un aspect affecté.


identifier: Desharnais, Philippe  (2001). Mécanismes d'induction de l'apoptose par le trubitylétain : implication du CD45 dans le processus d'apoptose nucléaire  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 122 p.

abstract: Le tributylétain (TBT) est une molécule chimique utilisée dans plusieurs formulations industrielles qui représente un potentiel nocif important pour l'environnement. Des études toxicologiques ont démontré que le TBT engendre des effets toxiques chez plusieurs organismes aquatiques dont les poissons, les crabes, les huîtres et les moules ainsi que chez les mammifères. La structure chimique du TBT lui confère la propriété de diffuser au travers des bicouches lipidiques et d'interagir avec les protéines, ce qui engendre de multiples perturbations au niveau de l'homéostasie cellulaire. Chez les mammifères, le système immunitaire est le plus sensible à l'action du TBT. On y dénote une perte de fonction des lymphocytes T périphériques et une importante déplétion des thymocytes corticaux. Il a été suggéré que l'atrophie du thymus engendrée par l'action du TBT serait causée par une induction de l'apoptose des thymocytes corticaux.L'apoptose est un processus de mort cellulaire programmée qui se déroule à l'intérieur d'un organisme afin d'éliminer les cellules âgées, infectées ou dangereuses. Deux voies principales mènent à l'induction d'apoptose à l'intérieur de la cellule: la voie des récepteurs de mort et la voie de la mitochondrie. La voie des récepteurs de mort implique la liaison des récepteurs faisant partie de la famille du TNFR qui, suite au recrutement de molécules adaptatrices, entraîne l'activation de la caspase-8 qui initie une cascade de caspases en clivant les caspases 3, 6 et 7. La voie de la miochondrie est directement reliée à une perturbation du potentiel membranaire mitochondrial qui mène à la libération dans le cytoplasme de divers facteurs, dont le cytochrome c et AIF. Ceux-ci sont responsables de l'activation de la caspase-9 qui engendre ensuite l'activation de la cascade de caspases exécutrices procédant au démantèlement de la cellule. La voie de la mitochondrie est induite entre autres par les dommages génotoxiques, les agents antinéoplasiques et les contaminants environnementaux. Le mode d'induction de l'apoptose par le TBT impliquerait la voie de la mitochondrie. Toutefois, il n'a pas encore été déterminé de cible moléculaire étant responsable de la cytotoxicité du TBT.La grande importance physiologique du système immunitaire et sa vulnérabilité particulière face à divers xénobiotiques, dont le TBT, sont des facteurs qui ont gouvernés à l'établissement de l'approche expérimentale qui était de mieux comprendre le mode d'induction de l'apoptose par le TBT chez les lymphocytes, les principales cellules du système immunitaire. Plus spécifiquement, les objectifs de cette étude étaient de déterminer si le CD45, une protéine tyrosine phosphatase transmembranaire essentielle à l'activation des lymphocytes B et T, possèdait un rôle à jouer dans le processus d'induction d'apoptose par le TBT et de déterminer à quel niveau de la cascade d'évènements biochimiques se déroulant lors de l'apoptose, le CD45 était impliqué.Au cours de cette étude, il a été démontré qu'en réponse au TBT, le CD45 est essentiel à l'induction de la condensation de la chromatine et de la fragmentation internucléosomale de l'ADN, deux changements morphologiques finals de la cascade apoptotique. L'analyse des principales perturbations cellulaires induites lors de 1 'apoptose a permis de déterminer le niveau d'implication du CD45 dans l'induction de ces deux processus. En effet, il est engendré, chez les cellules CD45 positives et CD45 négatives, la mobilisation du calcium à l'intérieur de la cellule, le clivage de IKB-a, la réduction du potentiel membranaire mitochondrial, la libération du cytochrome c dans le cytoplasme, l'activation de la caspase-3 et le clivage du DFF45, l'inhibiteur de l'endonucléase DFF40. Le signal défectif responsable de l'absence d'apoptose nucléaire chez les cellules CD45 négatives impliquerait l'activité des tyrosine kinases et serait localisé au niveau du cytoplasme. De plus, il a été démontré que ce phénomène est spécifiquement relié à l'absence du CD45 et qu'il n'est pas exclusif à l'induction d'apoptose par le TBT.Ceci est la première étude à faire la démonstration d'un tel rôle pour le CD45 et constitue une nouvelle voie de signalisation apoptotique chez les cellules du système immunitaire. Cette étude constitue également l'une des rares où il est démontré une absence d'apoptose nucléaire en présence de l'activition de la caspase-3. D'autres travaux devront être menés afin de mieux caractériser et définir les éléments modulés par le CD45 responsables de l'induction d'apoptose nucléaire. Toutefois, il semble que cette nouvelle voie de signalisation apoptotique est très prometteuse et pourrait faire 1'objet d'intervention thérapeutique.


identifier: Desautels, Catherine  (2001). Étude de l'influence du méthanol sur la production extracellulaire de la GFP par Pichia pastoris.  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 131 p.

abstract:
L'utilisation de micro-organismes pour la production de protéines recombinantes répond à un besoin actuel des industries du secteur des biotechnologies. Grâce à ses nombreux avantages, la levure méthylotrophe Pichia pastoris est de plus en plus utilisée pour la production industrielle de protéines provenant d'organismes variés. Pour ce faire, le gène codant pour la protéine à produire est cloné sous le contrôle du promoteur fort de l'alcool oxydase (AOXI), induit par la présence du méthanol. Dans le cadre de ce projet de maîtrise, la levure P. pastoris est utilisée comme hôte pour produire et sécréter la «GFP», «Green Fluorescent Protein» ou protéine fluorescente verte. La fluorescence de la GFP étant directement proportionnelle à sa concentration, celle-ci peut-être utilisée comme protéine modèle pour étudier 1' effet de différents paramètres sur la production de
protéines hétérologues.Ce projet avait pour but d'étudier l'influence de la stratégie d'alimentation en méthanol sur la production et la sécrétion de la GFP par Pichia pastoris. En effet, l'utilisation du méthanol, alcool inflammable et explosif, est sujet d'inquiétudes pour la production de protéines recombinantes à grande échelle par P. pastoris.Trois séries de fermentation en Erlenrneyers agités ont été effectuées comme première partie de ce travail de recherche. Dans un deuxième temps, des informations supplémentaires sur la culture ont pu être obtenues grâce à 8 fermentations en bioréacteur de 20· L équipé d'appareils d'analyse en continu. Dans tous les cas, le procédé utilisé pour produire la GFP par Pichia pastoris était séparé en deux étapes : d'abord une augmentation de la biomasse a été obtenue par la croissance des cellules sur un milieu riche à base de glycérol, puis la production de GFP a été induite par l'ajout de méthanol. Des stratégies d'ajout du méthanol variant en terme de fréquence et de quantité ont été essayées et comparées avec les résultats décrits dans la littérature scientifique.Parmi les stratégies testées, il a été démontré qu'un ajout unique d'une concentration en méthanol de 1 %(v/v) au début de la phase d'induction permettait d'obtenir de meilleurs résultats en terme de rendement (quantité de GFP sécrétée par quantité de méthanol ajouté) et de productivité (quantité de GFP sécrétée par volume de culture, par heure). Cette stratégie a 1' avantage de diminuer le temps de production, la quantité totale de méthanol utilisée pour l'ensemble du procédé ainsi que les manipulations effectuées avec le méthanol par rapport aux autres stratégies testées. Nous croyons que ce nouveau protocole d'alimentation en méthanol permettra de minimiser les risques associés à l'utilisation de ce substrat pour produire des protéines recombinantes à grande échelle avec Pichia pastoris.


identifier: De Noncourt, Pascal  (2001). L'élastase des leucocytes chez le lymphome non-Hodgkin murin et humain  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 125 p.

abstract: L'élastase des leucocytes (HLE; E.C. 3.4.21.37) est une protéase extracellulaire capable de moduler la réponse immunitaire locale par sa capacité à cliver des immunomodulateurs clés, tels que l'IL-2, CD2, CD4, et CD43. Notre laboratoire a démontré que HLE peut également moduler directement, par clivage protéolytique, l'expression d'ICAM-1 à la surface des cellules. Or, ICAM-1 est essentiel à la dissémination des cellules lymphomateuses aux organes périphériques, possiblement par sa capacité à promouvoir le contact intercellulaire nécessaire à l'induction de :M:MP-9 dans les cellules cancéreuses. Puisque HLE peut également détruire par clivage protéolytique TIMP-1, un inhibiteur naturel de :M:MP-9, nous avons émis l'hypothèse que HLE pourrait être impliquée dans la croissance et la dissémination de cellules lymphomateuses. Cette hypothèse est appuyée notamment par le fait que les cellules de lymphomes malins expriment des niveaux anormalement élevés de :M:MP-9, et que le transfert de cDNA codant pour :M:MP-9 dans les cellules lymphomateuses augmente leur pouvoir tumorigénique. Dans le travail qui suit, nous avons démontré que: 1) HLE a la capacité de se lier à la surfàce de cellules lymphomateuses; 2) que la transfection d'ICAM-1 augmente cette capacité de LE à se lier à leur surface; 3) que l'expression de LE peut être retrouvée dans les tissus de lymphomes de type non-Hodgkin aggressifs, de type B ou T ; 4) que l'expression de HLE dans les lymphomes est inductible via l'activation par l'interleukine-6 et surtout l'interleukine-13; et 5) que les lymphomes non-Hodgkin expriment l'interleukine-13. Ces travaux nous permettent de mettre en évidence pour la première fois le rôle possible de HLE dans le lymphome, et de mieux comprendre de façon générale le rôle et la régulation des protéases extracellulaires dans la métastasie.


identifier: Cléroux, Patrick  (2001). Étude de la variabilité des GP4 et GP5 du virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin et modulation de la réponse immune chez le porc.  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 161 p.

abstract: Vers la fin des années 1980's et début des années 1990's une nouvelle maladie affectant les élevages porcins d'Amérique du Nord et d'Europe est apparue. L'agent causal, le virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin (VSRRP), fut identifié en 1991. Depuis ce temps, le virus s'est répandu dans la majorité, sinon la totalité des pays producteurs de porcs et il est présentement reconnu comme étant l'agent le plus dévastateur affectant 1' industrie porcine. Ce virus, membre de la famille Arteriviridae, est constitué de six protéines structurales regroupées en deux catégories : les protéines structurales majeures (N, M et GPs) et les protéines structurales mineures (GP4, GP3 et GP2). Les principales cellules cibles du virus sont les macrophages alvéolaires porcins (PAMs). ln vitro, le VSRRP ne peut se répliquer que sur les PAMs en cultures primaires et sur les lignées cellulaires dérivées de la lignée de rein de singe MA104 que sont les cellules MARC-145 et CL 2621. Récemment, le service de diagnostic a isolé des isolats de VSRRP ayant perdu la capacité de se propager sur les cellules MARC-145. Étant donné l'existence d'anticorps neutralisants dirigés contre la GP4 et la GPs de la souche LV du VSRRP, suggérant que ces protéines pourraient jouer un rôle essentiel dans la liaison du virus à son récepteur cellulaire, cette étude avait pour but de vérifier l'hypothèse selon laquelle des mutations au niveau de ces protéines pourraient être responsables de la modification du tropisme du virus. D'une part, le séquençage des produits de RT-PCR, correspondant aux gènes codant pour la GP4 et la GPs de quelques isolats cliniques ayant perdu la capacité de se répliquer sur les cellules MARC-145, fut réalisé. Les séquences en aa des GP4 et GPs des isolats étudiés furent comparées à celles de souches de référence ayant la capacité de se multiplier sur les deux types de cultures cellulaires. Deux régions génomiques, l'une située dans l'ORF4 et correspondant aux résidus d'aa 55 à 63 de la GP4, et l'autre localisée au niveau de l'ORF5 et impliquant le codon de l'aa 10 de la GP5, démontrèrent des variations spécifiques à ces isolats. Ces régions pourraient jouer un rôle important dans la modification du tropisme du VSRRP et, possiblement, interagir avec le récepteur cellulaire.D'autre part, l'attention fut portée sur l'obtention d'un vaccin efficace et sécuritaire contre le VSRRP. En effet, les vaccins existants sont soit plus ou moins efficaces dans la protection qu'ils confèrent contre la maladie et l'infection (vaccins inactivés), soit non sécuritaires (vaccins vivants atténués). Par ailleurs, bien que les Ac neutralisants soient dirigés contre les GP4 et GP5 du VSRRP, chez les porcelets, ce sont les Ac dirigés contre la GP5 qui sont les plus nombreux, les plus efficaces et qui réagissent principalement contre des épitopes conservés chez la majorité des isolats. Ainsi, la GPs représente une cible intéressante pour la mise au point d'un vaccin sous-unitaire efficace et sécuritaire contre le SRRP. L'efficacité d'un vaccin inactivé par un agent n'affectant pas la structure et la glycosilation des protéines du virion fut évaluée, de même que celle d'adénovirus recombinants humains (hAdVrecs) portant soit le gène de l'ORF5 de type sauvage (ORF5-WT), soit un gène synthétique (ORF5-SYN) codant de façon optimale pour la GP5 puisqu'il correspond à l'ORF5-WT modifié de façon à ce que l'ARNm qui en découle exprime les codons traduits le plus efficacement par les cellules de mammifères, résultant ainsi en une expression amplifiée de la protéine. Le vaccin inactivé a engendré une mémoire immunologique à l'hôte lui ayant conféré une certaine protection contre 1'apparition de lésions pulmonaires suite à une infection-défi, mais la protection des animaux contre l'infection par le virus infectieux n'était que partielle. Lors des immunisations avec les hAdrecs, le virus recombinant exprimant le gène ORF5-SYN a engendré chez les porcelets une bien meilleure mémoire immunologique contre les épi topes neutralisants du VSRRP que le virus recombinant véhiculant le gène ORF5-WT. Toutefois, aucune conclusion n'a pu être émise quant à l'effet protecteur de cette immunisation suite à l'échec de l'infection-défi .


identifier: Christin-Piché, Marie-Soleil  (2001). Effets des pesticides agricoles sur le système immunitaire des amphibiens.  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 152 p.

abstract: Pour mieux comprendre le rôle et l'implication des xénobiotiques dans la diminution des populations d'amphibiens, les effets d'un mélange de six pesticides agricoles sur le système immunitaire des grenouilles ont été étudiés. Puisque la modulation de certains paramètres du système immunitaire peut entraîner une augmentation de la sensibilité des animaux aux pathogènes, la résistance des grenouilles à un parasite, couramment retrouvé dans leur environnement, a aussi été évaluée. Finalement, le dernier objectif de la présente étude a été de vérifier si les xénobiotiques et les pathogènes pouvaient avoir un effet synergique sur le système immunitaire des amphibiens.Afin de répondre à ces objectifs, deux espèces de grenouilles ont été utilisées: Xenopus laevis, un modèle de laboratoire et Rana pipiens, une espèce indigène au Québec. Les méthodes pour tester les compétences immunitaires des grenouilles ont d'abord été mises au point avec X. laevis puisqu'il s'agit d'une espèce bien étudiée par plusieurs chercheurs et qu'elle peut facilement être maintenue dans des conditions de laboratoire. Ensuite, les expériences ont été reprises avec R. pipiens afin de vérifier si les résultats obtenus avec X. laevis pouvaient s'appliquer à des espèces de grenouilles plus indigènes. Ceci nous a permis de déterminer si les pesticides peuvent affecter les amphibiens de la faune québécoise dans leur environnement naturel.Les grenouilles ont été exposées in vivo au mélange de pesticides pendant une courte période de temps après laquelle certains paramètres de l'activité immunitaire étaient mesurés. La cellularité (concentration de cellules dans la rate), la viabilité et l'activité phagocytaire des splénocytes ainsi que la prolifération des lymphocytes ont été analysées. Suite à l'exposition aux pesticides la moitié des grenouilles Rcma pipiens ont été infectées avec des larves du parasite Rhabdias ranae afin de vérifier si une exposition aux xénobiotiques affectait leur résistance aux pathogènes. La vitesse de migration, la maturation, le nombre et la taille des parasites infectieux ont été mesurés. Finalement, les compétences immunitaires des grenouilles parasitées ont été vérifiées et comparées à celles des grenouilles exposées aux pesticides seuls, afin de déterminer si les polluants et les parasites ont un effet synergique sur le système immunitaire.Nos recherches ont permis de conclure que les pesticides utilisés en agriculture peuvent dérégler le système immunitaire des grenouilles. Chez les grenouilles X. laevis, le mélange de pesticides diminue le nombre de splénocytes et augmente leur activité phagocytaire. Ceci suggère que le mélange utilisé pourrait immunosupprimer les animaux et induire des réactions autoimmunes ou inflammatoires. Chez les Rwza pipiens, les pesticides diminuent la prolifération des lymphocytes T ce qui pourrait inhiber le développement de la réponse immunitaire acquise et affaiblir la résistance aux pathogènes. D'ailleurs, il a été observé que l'exposition au mélange augmentait la maturation et la vitesse de migration des parasites chez les grenouilles. L'affaiblissement de la réponse immunitaire, causé par des pesticides, pourrait donc être une des causes responsables de l'augmentation des infections observées chez les amphibiens.Nos résultats démontrent également que les pesticides et les pathogènes peuvent avoir un effet synergique sur le système immunitaire. En effet, il a été observé que les grenouilles exposées à la fois aux parasites et aux pesticides avaient une activité phagocytaire moins grande que les grenouilles exposées aux pesticides seuls. Les microorganismes ont la propriété d'altérer la réponse immunitaire afin de pouvoir y échapper et se reproduire dans l'hôte. Il est possible que l'immunosuppression créée par les pathogènes soit additive à celle créée par les pesticides. Une exposition à des contaminants suivie d'une infection complique souvent les réactions du système immunitaire et peut entraîner une réponse inadéquate de l'hôte l'empêchant de se défendre contre d'autres pathogènes.Il est important d'étudier les effets de la pollution environnementale sur le système immunitaire afin d'être en mesure de comprendre comment les polluants peuvent entraîner la disparition de certaines espèces. Nos résultats indiquent que les pesticides peuvent accroître indirectement la sensibilité des amphibiens à différents pathogènes, en affaiblissant leur système immunitaire. Il devient donc évident que la relation entre les polluants et le système immunitaire constitue un sujet d'étude qui mérite d'être approfondi si nous voulons comprendre l'impact de nos pratiques agricoles sur les écosystèmes aquatiques. Ainsi, nous pourrons peut-être éventuellement les améliorer de façon à les rendre moins nocives.


identifier: Chicoine, Eric  (2001). Rôle de la méthylation de l'ADN dans la régulation de MMP-9  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 87 p.

abstract: Le caractère métastatique du lymphome non-Hodgkinien est associé avec la sécrétion de protéases impliquées dans la dégradation de la matrice extracellulaire. Avec l'aide d'un modèle expérimental de lymphomes thymiques, notre groupe de recherche a démontré que l'augmentation du caractère agressif des lymphomes était associé avec l'augmentation de l'expression de MMP-9. Récemment, plusieurs études ont démontré l'importance de la méthylation de l'ADN dans la régulation transcriptionnelle de gènes impliqués dans le processus tumorigénique. Bien que la modulation de la transcription causée par la méthylation de l'ADN dans la région du promoteur est souvent associée avec la suppression transcriptionnelle du gène correspondant, certaines indications laissent supposer que l'expression des certains oncogènes pourraient être favorisées par l'hypométhylation à certains stades du cancer. Dans la présente étude, nous avons examiné l'importance de la méthylation de l'ADN sur la régulation transcriptionnelle de MMP-9 chez des lignées de lymphomes murins. Nos études ont démontré que : 1) il y a une corrélation inverse entre le taux de méthylation du promoteur de MMP-9 et le niveau d'expression de MMP-9, notamment aux sites Spi impliquées dans l'activité du promoteur; 2) le traitement de cellules lymphomateuses non-agressives avec un agent pharmacologique hypométhylant est suffisant pour induire la sécrétion de MMP-9; 3) cette induction de MMP-9 est potentialisée par le PMA et, 4) l'utilisation du vecteur contenant le promoteur MMP-9 méthylé in vitro a permis de confirmer que la méthylation de l'ADN exerce une répression sur l'activité transcriptionnelle sur le promoteur de MMP-9. L'ensemble de ces résultats indiquent que méthylation de l'ADN joue un rôle important dans la régulation du gène mmp-9 et de mieux mettre en perspective le rôle de I'hypométhylation dans le processus de métastasie.


identifier: Champoux, Julie  (2001). Support nutritionnel et grands brûlés : étude sur l'importance de la glutamine au niveau des fonctions immunitaires.  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 109 p.

abstract:
Malgré le progrès dans la prévention, les brûlures graves continuent de représenter une menace majeure pour la santé et le bien-être des gens à travers le monde entier et ce, dans tous les groupes d'âge. En dépit des interventions chirurgicales et des thérapies antibiotiques agressives, les complications dues à des infections sont une cause majeure de mortalité chez les grands brûlés, comptant pour approximativement 75% de tous les décès survenant après 1' administration des premiers soins. La brûlure est caractérisée par des désordres métaboliques et hormonaux importants, par une réponse inflammatoire systémique et une immunosuppression qui augmente la susceptibilité aux infections, non pas seulement par les pathogènes communs, mais aussi par des organismes qui ne sont normalement pas dangereux pour des hôtes en bonne santé.Dans les dernières décennies, il a été démontré qu'un support nutritionnel adéquat pouvait grandement améliorer la condition des patients brûlés. L'effet de différentes proportions et types de lipides dans la diète a été étudié. Les suppléments de certains acides aminés considérés favorables pour le système immunitaire, dont la glutamine, ont aussi fait l'objet d'études. La glutamine est l'acide aminé le plus abondant dans le plasma des mammifères et elle est transportée et métabolisée activement dans presque tous les tissus. La glutamine joue plusieurs rôles importants au niveau métabolique, mais en plus, elle est une source d'énergie impliquée dans les phénomènes entourant la réponse immunitaire.Les effets d'une diète enrichie en glutamine, administrée par voie entérale, chez des grands brûlés ont donc fait l'objet de ce mémoire. Les résultats attendus étaient une augmentation de l'activité phagocytaire des neutrophiles et une amélioration dans les sous-populations de leucocytes. Ces améliorations auraient donc engendré une diminution de la durée des soins, du taux de mortalité et de morbidité. Cette étude à été réalisée en double aveugle avec une cohorte de 38 patients. Des prélèvements sanguins ont été effectués aux jours 4, 7, 14, 21 et 28 du protocole. À partir des leucocytes sanguins, des tests fonctionnels ont été effectués pour évaluer certains paramètres de la réponse immunitaire, comme la phagocytose, la flambée oxydative, le potentiel mitochondrial et les thiols. Les populations de leucocytes, par l'expression de récepteurs membranaires spécifiques, ont été étudiés. Tous les tests ont été réalisés par cytométrie de flux. Les résultats obtenus au jour 28 du protocole ont été exclus pour effectuer les analyses statistiques à cause de trop de données manquantes. Les résultats ont démontré des effets positifs de la glutamine, majoritairement au niveau de l'augmentation de sous-populations de cellules T qui jouent des rôles majeurs dans la réponse immunitaire spécifique. L'intensité de la phagocytose des granulocytes et des monocytes a été significativement plus basse au niveau du groupe recevant la glutamine. Il y a également deux populations de cellules exprimant les récepteurs membranaires, le CD16b (P = 0.05) et le CD Il b (P = 0.05), qui se sont retrouvées en plus bas nombre dans le groupe recevant la glutamine. Par contre, le nombre de cellules exprimant soit le CD19, le CD3, le CD4 ou le CDS, parmi la sous-population de lymphocytes, s'est retrouvé significativement plus
élevé chez les patients recevant la glutamine.Donc, contrairement aux idées véhiculées, la glutamine ne semble pas augmenter les fonctions des phagocytes ou diminuer la durée des soins. Une chose certaine, c'est que la glutamine rétablit partiellement plusieurs sous-population de lymphocytes. Elle diminue aussi le taux de mortalité et le taux d'infections sanguines par un facteur de trois. Les hypothèses sont que la glutamine contribuerait à diminuer le stres oxydatif et l'apoptose des lymphocyte, améliorant ainsi la collaboration entre les sous-population de lymphocytes et par le fait même l'efficacité de la réponse immunitaire spécifique .


identifier: Chabot, Sylvie  (2001). Le rôle immunostimulateur de deux souches de lactobacillus rhamnosus, ATCC 9595 et RW-9595M, l'une non-mucoïde et l'autre mucoïde chez la souris  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 185 p.

abstract:
La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Deux souches de Lactobacillus rhamnosus, ATCC 9595 et son variant mucoïde RW-
9595M, ont été comparées quant à leurs propriétés immunostimulantes sur le système immunitaire murin. Dans un premier temps, des splénocytes de souris C57Bl/6 ont été stimulés et incubés en présence de chacune des souches bactériennes irradiées, à des concentrations définies, durant 6 ou 24 heures. La sécrétion de cytokines dans les surnageants a ensuite été mesurée à l'aide de bio-essais. Lb. rhamnosus A TCC 9595 induit une sécrétion significativement plus élevée de TNF (p ≦ 0.05) par les splénocytes murins, comparativement à Lb. rhamnosus RW-9595M. De plus, ces deux souches induisent à des niveaux similaires la sécrétion d'IFN-y par les cellules spléniques. Dans un deuxième temps, les EPS synthétisés par la souche mucoïde Lb. rhamnosus RW-9595M ont été produits en fermenteur, isolés, purifiés et fractionnés par filtration sur membranes de différentes porosités. Quatre fractions ont été recueillies: F1 est plus grand que 1OOO kDa; F2 100-1000 kDa ; F3 10-100 kDa et F4 est plus petit que 10 kDa. Chacune de ces fractions a été testée pour ses propriétés mitogéniques sur les splénocytes de C57Bl/6. Les résultats montrent que FI est la fraction la plus active, comparativement aux autres fractions. Toutefois, celles-ci montrent également des activités mitogéniques sur les splénocytes stimulés. Des splénocytes de souris C57Bl/6, BALB/c et nude ont été incubés en présence de FI ou des EPS entiers, à des concentrations définies, durant 6 ou 24 heures. La sécrétion de cytokines dans les sumageants a aussi été mesurée à l'aide de bio-essais ou d'ELISA. Les résultats montrent que les EPS produits par Lb. rhamnosus RW-9595M induisent la sécrétion d'IL-6, mais pas de TNF chez les splénocytes de souris. Ils induisent aussi la sécrétion d'IFN-y chez les splénocytes murins. L'évaluation de la sécrétion d'IL-I2 p40 montre qu'une réponse a été observée chez les splénocytes de C57Bl/6 et de BALB/C, mais pas denude. Des expériences pour déterminer le type de récepteur cellulaire se liant aux EPS n'ont pas donné de résultats concluants. La réponse des splénocytes de souris nude mériterait des expériences plus poussées afin de mieux comprendre le phénomène de sécrétion d'IFN-y indépendant de l'IL-12.


identifier: Caron, Isabelle  (2001). Boutures d'if canadien et japonais : Études de nutrition  Mémoire.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 185 p.

abstract: L'analyse du contenu en taxanes de boutures de deux espèces d'ifs (T canadensts et T' cusp1data) a été réalisée. Quatre taxanes dont deux sont majeurs (0-cinnamoyltaxicine I et 5-cinnamoyl-l 0-acétyltaxicine l) ont été extraits pour la première fois de l'if du Japon. Des différences importantes dans les proportions de taxanes présents dans les plants bouturés, par rapport aux plants matures, ont également été observées chez les deux espèces étudiées. Il s'est avéré que le taxane majoritaire des boutures de l'if du Canada est la 10-désacétylbaccatine III (0,009%) et non la 9-dihydro-13-acétylbaccatine III (0,008%) comme c'est le cas pour les tissus matures. Ces résultats donnent un appui supplémentaire à 1' hypothèse selon laquelle les voies biosynthétiques des taxanes pourraient varier selon l'espèce et l'âge des tissus utilisés. Il devient donc d'autant plus important d'approfondir nos connaissances de ces voies et particulièrement, l'implication controversée du mévalonate en tant que précurseur.Plusieurs expériences de nutrition des tissus ont été réalisées. Parmi celles-ci, une nouvelle méthode misant sur l'utilisation de plants bouturés a été testée. Cette dernière permet une absorption directe du précurseur via les racines et constitue un modèle beaucoup plus représentatif de l'environnement naturel entourant la biosynthèse des taxanes chez les ifs. Des incorporations similaires à celles obtenues via l'utilisation des techniques conventionnelles ont pu être observées. L'optimisation éventuelle de cette méthode laisse donc entrevoir la possibilité d'obtenir des taux d'incorporation supérieurs à ceux mesurés jusqu'à maintenant Quant au mévalonate, bien qu'il semble être utilisé de façon préférentielle par l'if du Canada, des expériences supplémentaires seront essentielles pour s'assurer de la fiabilité de la nouvelle technique et ainsi pouvoir interpréter sans erreur les résultats obtenus.


identifier: Popkov, Mikhail  (2001). The identification (phage display) of peptide molecules with potential application in anti-cancer therapy (Identification par banque phagique de peptides ayant un potentiel thérapeutique anti-cancéreux)  Thèse.  Québec, Université du Québec. Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 182 p.

abstract: En dépit des progrès considérables apportés au cours des trente dernières années au diagnostic et au traitement du cancer, les statistiques indiquent que les thérapies actuelles ne procurent qu'une probabilité de survie de cinq (5) ans dans environ 40% des cas. Actuellement, la méthode de choix pour le traitement de la majorité des cas de cancer est la chirurgie, suivie de la radiothérapie et de la chimiothérapie. Cependant, ces traitements ne permettent pas de traiter certains des cancers les plus fréquents en plus de causer des effets secondaires sévères reliés à leur utilisation. Plusieurs raisons peuvent expliquer l'échec de ces traitements. D'abord certaines tumeurs ne peuvent être traitées en raison de leur localisation ou de leur dispersion métastatique, mais également à cause de leur faible sensibilité à la radiothérapie ou à la chimiothérapie. En outre, ces méthodes ne sont certainement pas idéales pour le traitement des néoplasies considérant la morbidité qui leur est associée.En conséquence, de nombreuses autres approches ont été tentées dans le but d'améliorer le taux de survie des patients à haut risque de récidive. Ces approches incluent l'immunothérapie seule ou en combinaison avec la chimiothérapie.L'hypothèse de l'utilisation du système immunitaire pour éradiquer une tumeur n'est pas nouvelle. Il y a plus de cent ans, William Coley (en 1893) était le premier à publier une étude montrant qu'une activation non-spécifique du système immunitaire à l'aide de toxines bactériennes pouvait causer une régression tumorale (sarcome métastatique). Les bienfaits de la «toxine de Coley)) demeurent encore controversés mais il reste que ce chercheur avait clairement démontré une régression tumorale ainsi qu'une survie prolongée chez certains patients. Les efforts héroïques de Coley lui ont valu le titre de «Père de l'Immunothérapie)), bien avant que les principes fondamentaux de l'immunologie ne soient élucidés.Avec les progrès récents accomplis dans l'élucidation du mécanisme d'action du système immunitaire et le développement de la technologie des hybridomes, le concept stipulant que l'immunothérapie représente un outil thérapeutique valable pour le traitement du cancer est devenu une réalité. L'avènement des anticorps monoclonaux (AcMo) a permis le développement de thérapies ciblant directement la tumeur, que ce soit par le biais de mécanismes effecteurs anticorps-dépendant ou d'immunoconjugués (par exemple, une drogue, un isotope ou une toxine couplé à un anticorps). Au cours des quinze ou vingt dernières années, les AcMo sont passés du laboratoire aux essais cliniques pour le traitement d'un grand nombre de cancers variés. Plusieurs AcMo sont maintenant en phase clinique avancée et pourraient être introduits sur le marché au cours des prochaines années. Ces résultats sont sans nul doute impressionnants; toutefois, l'utilisation des AcMo comporte encore plusieurs contraintes physiques, biologiques et immunologiques pouvant limiter leur utilité clinique.Le travail décrit dans cette thèse porte sur l'identification de molécules peptidiques pouvant être utilisées dans la thérapie anti-cancer. Cette étude a débuté à une période où les progrès en biologie moléculaire (banques peptidiques aléatoires ou BPAs) permettaient de développer des outils permettant de surmonter plusieurs difficultés. Les BP As exprimées à la surface de phages filamenteux sont des outils versatiles pour identifier des épitopes détectés par des anticorps monoclonaux et autres molécules de liaison. Les séquences d'épitope, obtenues à partir du criblage de ces banques avec des anticorps, montrant de surcroît une divergence de séquence significative avec 1 'antigène originel, sont appelées mimotopes. Les mimotopes peptidiques sont d'un intérêt considérable à cause de leur utilisation potentielle pour le développement de vaccins anti-cancer. Toutefois, il y a encore peu de données disponibles sur le potentiel des mimotopes à induire une réponse humorale pouvant reconnaître 1' antigène originel. De même, il y a encore peu d'information disponible sur le mécanisme d'action des anticorps anti -mimotope.Bien que l'expression sur un phage (phage display) mène à plusieurs applications, le but de ce projet de doctorat était de découvrir des mimotopes pouvant être reconnus par l' AcMo murin BCD-F9 et d'utiliser ces mimotopes comme outil d'immunothérapie dans un modèle de xénogreffe sur souris nue. Bien que le travail présenté porte principalement sur le traitement du fibrosarcome humain, les concepts peuvent être appliqués à tous les types de tumeurs. Les implications de la découverte des mimotopes dans la compréhension des mécanismes d'action de la glycoprotéine-P (P-gp) sont aussi décrites.Nous avons démontré que l'épitope reconnu par l'AcMo BCD-F9 n'était pas restreint aux lignées cellulaires de cancer du sein. Les observations décrites dans cette étude suggèrent que cet épitope est aussi présent en plus ou moins grande quantité à la surface de plusieurs d'autres lignées cellulaires néoplasiques: carcinome du colon, sarcome, lymphome et leucémie. Leur réactivité commune avec BCD-F9 implique que ces lignées cellulaires partagent un antigène de surface ou expriment différentes molécules portant des épitopes à réactivité croisée.La réactivité de 1' Ac Mo BCD-F9 avec le fibrosarcome humain HT -1 080 nous a permis d'utiliser cette lignée cellulaire pour l'étude des propriétés anti-tumorales de BCD-F9 dans un modèle expérimental animal. Nos résultats ont montré que l'inoculation i.v. répétée de BCD-F9 à des souris nues CD-1, chez lesquelles les cellules HT -1080 étaient transplantées, réduisait de manière significative la croissance tumorale chez les animaux transplantés par voie s.c.. Ce même traitement abrogeait complètement le développement de métastases pulmonaires des souris transplantées par voie i.v .. Nos études in vitro de la lyse BCD-F9-dépendante de cellules HT-1080 ont confirmé que la cytotoxicité cellulaire anticorps-dépendante (ADCC) et la cytotoxicité anticorps-dépendante médiée par le complément (ADCMC) peuvent être impliquées dans l'activité anti-tumorale observée chez les animaux traités avec le BCD-F9. Le large spectre de lignées néoplasiques reconnues par BCD-F9 suggère que cet AcMo pourrait être un agent immunothérapeutique efficace. À cet égard, il serait intéressant de répéter avec d'autres cellules tumorales humaines les expériences examinant 1 'effet de BCD-F9 sur la croissance du fibrosarcome HT -1 080 et les métastases en originant.Nous avons également utilisé l'AcMo BCD-F9 pour identifier à l'aide des BPAs des peptides pouvant simuler l'épi tope reconnaissant cet anticorps. Le phage choisi exprimait le peptide GRRPGGWWMR, qui pouvait se lier à l' AcMo BCD-F9. L'immunisation de lapins avec ce peptide-mimotope synthétique induisait des anticorps polyclonaux (AM-F9) capables de bloquer la liaison d' AcMo BCD-F9 aux cellules tumorales HT-1080. À l'aide d'un modèle de métastases pulmonaires agressives, nous avons démontré que l'administration i.v. de l' AM-F9 prolongeait significativement la survie de souris nues CD-1 inoculées i.v. avec des cellules de fibrosarcome humain HT-1080.Ces observations initiales ont été suivies d'une autre étude examinant les propriétés de l'antisérum AM-F9. Nous avons démontré que le traitement avec AM-F9 inhibait de manière significative la croissance des cellules tumorales HT -1 080 inoculées s.c. à des souris nues CD-1. Nous avons aussi étudié 1 'activité anti-tumorale de 1' AM-F9 in vitro à l'aide d'essais ADCMC et AOCC. Nous avons démontré que, dans ce modèle, l' ADCMC jouait vraisemblablement un rôle majeur dans la lyse des cellules tumorales. Ces observations suggèrent que les mimotopes peptidiques induisent une réponse anti-tumorale bénéfique et peuvent ainsi être utilisés pour l'immunothérapieLes mimotopes peptidiques sont aussi importants pour la simulation de la liaison de substances non-protéiques, telles que des drogues chimiothérapeutiques à faible poids moléculaire. Nous avons donc utilisé les banques de phages pour identifier des ligands peptidiques pouvant se lier aux drogues MDR, simulant de ce fait l'activité de liaison de la P-gp. Nous avons démontré que les phages exprimant des peptides, contenant la séquence canonique WXXW, se liaient à des drogues de type MOR (vinblastine, doxorubicine, vérapamil et génistéine) avec la même sélectivité que la P-gp mais n'interagissaient pas avec des drogues de type non-MOR, telles que l'arabinosylcytosine (Ara-C) et le melphalan. Nous avons aussi démontré qu'un anticorps polyclonal obtenu contre le phage exprimant le peptide VCDWWGWGIC pouvait reconnaître de manière spécifique la P-gp dans la fraction membranaire de cellules MCF-7ADR à phénotype MDR. Les séquences se liant aux drogues MDR que nous avons identifiées dans ce travail fournissent un outil important pour le design et le criblage de nouveaux agents chimiothérapeutiques.	0036-8075The advent of mAbs has allowed the development of tumor directed therapies utilizing antibody-dependent effector mechanisms and immunoconjugates ( e.g. drug, isotope and toxin coupled antibodies) against human malignancies. Random peptide libraries displayed on the surface of filamentous phage are a versatile tool for identifying protein epitopes detected by monoclonal antibodies and other binding molecules. Epitope sequences derived by screening these libraries with antibodies, which show significant sequence divergence from the native antigens, are also referred to as mimotopes. Peptide mimotopes are of considerable interest because of their potential for use in anti-cancer vaccine development. However, there are limited data on whether mimotopes so derived can induce a humoral response that recognizes native antigens. Also, at the present time, very little information is available on the mechanism of action of any of the antimimotope antibodies. To this end, we constructed phage epitope libraries and screened them with a mouse monoclonal antibody BCD-F9 (mAb). Hereafter, we report that (1) the phage that was selected encoded for the unique sequence GRRPGGWWMR representing the peptide capable of binding to the BCD-F9 mAb. (2) Polyclonalm antibodies (AM-F9) generated by immunization of rabbits with this synthetic peptide specifically bound to HT-1080 cells and inhibited the binding of the BCD-F9 antibody to these cells. (3) Using an aggressive lung metastatic model, we demonstrated that AM-F9 administrated i. v. significantly prolonged the life span of CD-1 nude mice inoculated s.c.  with HT-1080 human fibrosarcoma cells. (4) We also showed that the administration of AM-F9 to CD-1 nude mice inoculated s.c. with HT -1080 cells led to a significant inhibition of tumor growth. (5) We also investigated the anti-tumor activity of AM-F9 in vitro in ADCMC and ADCC assays, and demonstrated that, in this model, ADCMC is likely to be a major mechanism responsible for tumor cell killing. These results indicate that peptide mimotopes can potentially be used as a novel immunotherapy to induce a beneficial antitumor response.Peptide mimotopes are also of importance in mimicking the binding of non-proteineceous substances such as, for example, low molecular chemotherapeutic drugs. We used therefore phage display libraries to generate peptide ligands that can bind MOR drugs mimicking, in this respect, the drug binding activity of P-glycoprotein. We showed that (6) the phages expressing the peptides, which contain the core consensus motif WXXW, bound MDR type drugs (vinblastine, doxorubicin, verapamil, and genistein) with the same selectivity as P-glycoprotein and did not interact with non-MDR type drugs, such as arabinosylcytosine (Ara-C) and melphalan. (7) Most importantly, we showed that monospecific antibody obtained against the phage expressing VCDWWGWGIC peptide could specifically recognize P-glycoprotein in the membrane fraction of MDR phenotype MCF-7 ADR cells. The MDR drug-binding sequences generated during this work could provide an important tool for design and screening of new chemotherapeutical agents.


identifier: Lacoste, Marie-Claude  (2001). Activité enzymatique phospholipase A2 de la protéine de structure VP1 du parvovirus porcin  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 124 p.

abstract: Les acides aminés essentiels du site catalytique de la PLA2 sont très conservés parmi les PLA2 provenant de différents groupes, mais se retrouvent aussi dans la séquence de la partie unique de la protéine VPI des parvovirus. Il est donc possible que ces acides aminés forment aussi un site catalytique dans la capside des parvovirus. Il y aurait donc une activité enzymatique PLA2 dans la capside des parvovirus. Pour vérifier la présence d'une activité PLA2 dans la capside des parvovirus, plusieurs expériences seront effectuées.Tout d'abord, à l'aide de protéines VPI provenant des capsides de deux parvovirus, le B 19 et le PPV, il sera possible de vérifier si, en présence de phospholipides, il y a présence de la réaction enzymatique attendue. Une fois la présence d'une activité enzymatique établie. Les mutations qui seront effectuées sur les acides aminés importants du site catalytique de la PLA2 dans la séquence du PPV, permettront de confirmer qu'il s'agit bien d'une activité PLA2 dans la capside de PPV. L'utilisation d'inhibiteurs de la PLA2 permettra d'appuyer les résultats obtenus.L'importance d'une activité PLA2 pour le virus se situerait au niveau des premières étapes de l'infection: la liaison au récepteur et la pénétration du virus dans la cellule. Les mutations effectuées sur les acides aminés du site catalytique de la PLA2 de la capside permettront de vérifier si le virus conserve ou perd son infectivité lorsque les mutations diminuent ou suppriment l'activité enzymatique. Grâce à des transfections avec les clones infectieux sauvages ou possédant des mutations affectant les différents acides aminés du site catalytique de la PLA2, il sera possible d'évaluer l'importance de ces acides aminés pour l'infectivité des parvovirus.Il est important dans ce projet de s'assurer que la capside du PPV possède une activité PLA2, que les mêmes acides aminés du site catalytique de la PLA2 sont ceux conférant au virus l'activité PLA2 et que cette activité joue un rôle dans les premières étapes de l'infection. Les résultats de ces expériences sont essentiels à la poursuite du projet. Ils permettront ensuite de comprendre les liens entre la présence d'une activité PLA2 sur la capside des parvovirus, la présence d'anticorps antiphospholipides chez les individus infectés avec le B 19 et chez les patients atteints de maladies auto-immunitaires comme l'arthrite rheumatoïde et le lupus et finalement 1' infection au B 19 comme précurseur de ces maladies.


identifier: Lainesse, Marco  (2001). Isolement et caractérisation d'une souche bactérienne dégradant le chrysène  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 108 p.

abstract: La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF.Dû à la faible solubilité des hydrocarbures aromatiques polycycliques ( HAP) lourds en milieux aqueux et à leur adsorption sur la matière organique du sol, très peu de micro-organismes capables de dégrader ce type de molécule ont été isolés. Ces problèmes ont été contournés par l'utilisation de cultures biphasiques (milieu aqueux ' avec huile de silicone). Celles-ci ont permis J'isolement d'une bactérie (souche ML1) capable de dégrader Je chrysène, un HAP lourd à 4 cycles aromatiques très récalcitrant. La comparaison de la séquence de son gène de l'ARNr 16S à celles d'une banque de données a montré qu'elle appartenait au genre Sphingomonas.Les études effectuées avec Sphingomonas sp. ML 1 ont montré que la dégradation du chrysène est plus rapide en système biphasique qu'en système monophasique (sans huile) avec des vitesses moyennes et maximales de dégradation observées de 1 A et 3.3 mg/L-j, respectivement. pour les cultures biphasiques et de 0,9 et 2.9 mg/1.-j pour les cultures monophasiques. Ces taux de dégradation sont parmi les plus élevés rapportés dans les écrits scientifiques. Des essais de dégradation avec du 14C -chrysène ont montré que la souche ML 1 minéralise le chrysène (14C-chrysène -> 14C02 + H20). La souche peut aussi utiliser Je phénanthrène. J'anthracène. Je fluoranthène ainsi que Le benz[a]anthracène comme seule source de carbone. Pour le pyrène. le benzo[a]pyrène. Le pérylène. le benzo[b]fluoranthène. le benzo[k]fluoranthène et le dibenz[a,h]anthracène. Il y a une légère dégradation mais seulement par co-métabolisme en présence de chrysène.La dégradation du chrysène nécessite la présence de sol ou d'un extrait aqueux de sol. Les éléments de cet extrait qui induisent la dégradation du chrysène ont été adsorbés sur charbon activé et désorbés avec du méthanol. L'analyse de cette fraction par chromatographie en phase gazeuse et spectrométrie de masse suggère que cet inducteur serait un disaccharide.


identifier: David, Maude  (2001). Les capsides recombinantes de densovirus comme plateforme pour la présentation d'un épitope du virus respiratoire syncytial humain  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 136 p.

abstract: De nos Jours, la plupart des vaccins utilisés sont encore faits de virus vivants ou inactivés. Des atténuations insuffisantes ou des inactivations incomplètes constituent toujours un risque pour la santé des êtres humains ou des animaux. De récentes stratégies ont procuré de nouvelles approches pour créer des vaccins sécuritaires. Depuis quelques années, les baculovirus retiennent l'attention quant à leur capacité d'exprimer de grandes quantités de protéines mimant la protéine virale authentique. Le densovirus de la larve Galleria mellonella est un petit virus eucaryote non enveloppé avec une capside d'environ 22 mn de diamètre. Son génome est fait d'ADN monocaténaire linéaire ambisens de 6 kb. L'expression du gène VP4 du densovirus GmDNV, codant pour la protéine de capside (VP), dans les cellules d'insectes grâce à l'utilisation du système du baculovirus permet de produire des capsides recombinantes formées par l'auto-assemblage des VP4. Ces capsides recombinantes ont été utilisé pour présenter un épitope protecteur du virus respiratoire syncytial humain (VRSH) au système immunitaire. Le VRSH est l'agent causal le plus important des maladies virales des voies respiratoires inférieures chez les nouveau-nés et les enfants en bas-âge. Malgré 1' importance des infections et des dommages causés par ce virus, il n'existe toujours pas de vaccin sécuritaire et efficace pour la protection des enfants. L'épitope inséré est constitué des acides aminés 173-187 de la glycoprotéine de surface virale G qui est un antigène viral majeur. L'épitope a été inséré à un endroit stratégique à la surface de la capside, soit en C-terminal de VP4.Grâce à plusieurs analyses la présence du peptide inséré sur les capsides recombinantes à pu être détectée. Malheureusement, lors de l'évaluation de l'activité protectrice de l'épi tope exprimé à la surface des capsides recombinantes de GmDNV dans un modèle animal aucune réponse immunitaire contre le pathogène VRSH n'a pu être détectée.


identifier: Gauthier, Henriette  (2001). Expression de la protéine VPg du virus de la mosaıique du navet dans les plantes  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 79 p.

abstract: La VPg ("Virus Protein linked to the genome") est une protéine virale qui se lie de façon covalente à l'extrémité 5' du génome du TuMV ("Turnip Mosaic Virus"). Les travaux effectués au laboratoire utilisant le système double-hybride ont démontré que la VPg interagit avec une protéine de l'hôte: la protéine eIF4E. Cette protéine lie la structure coiffée retrouvée en 5' des ARNm. Elle est un élément clé dans l'initiation de la traduction des ARNm. Surexprimée, elle provoque la transformation cellulaire et sous-exprimée, elle entraîne un ralentissement de croissance des cellules de mammifère. Notre hypothèse veut que la liaison de la VPg à la protéine eiF4E diminue l'activité de celle-ci et une nouvelle population d' ARNm serait traduite. On obtiendrait ainsi des phénotypes différents chez la plante exprimant la VPg.Pour démontrer notre hypothèse, nous avons utilisé deux systèmes d’expression : le vecteur viral PVX et les plantes transgéniques.Nous avons infecté des plantes de Nicotiana benthamiana avec des transcrits d' ARN du vecteur PVX contenant le gène VPg et avec des transcrits du vecteur PVX seul. Dix jours après l'inoculation, toutes les plantes montraient des signes d'infection. L'analyse des plantes par RT-PCR nous révéla par contre que le vecteur PVX délétait le gène VPg.Comme alternative nous avons travaillé avec des plantes transgéniques d'Arabidopsis tha/iana. Ces plantes ont été transformées à l'aide d'une suspension bactérienne contenant le gène VPg inséré dans le plasmide Ti. Ce plasmide contient un gène de résistance à l'hygromicine permettant la sélection des plantes transformées. Les plantes résistantes présentant des symptômes atypiques (retard de croissance, rosette feuillue et difforme, plantes naines, système racinaire peu développé) ont été analysées pour leur contenu en ADN et en ARN. Nous avons montré par PCR que toutes les plantes sélectionnées contenaient le gène et le messager VPg.Nous avons alors certaines évidences qui supporte notre hypothèse voulant que la VPg exprimée chez la plante entraîne un changement phénotypique, possiblement en modifiant la programmation de la traduction des ARNm cellulaires.


identifier: Daugan, Matthieu  (2016). Influence de l’infection par le virus de la chorioméningite lymphocytaire sur la réponse immunitaire humorale  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 156 p.

abstract:
Les infections virales chroniques sont un problème de santé publique majeur. À elles seules les infections par le VIH et le VHC représentent plus de 250 millions de personnes infectées à travers le monde et continuent de se propager. Une caractéristique commune de ces infections est, contrairement aux infections aigües, leur tendance à provoquer une apparition tardive des anticorps neutralisants. Afin de comprendre si cette modification affecte seulement la réponse antivirale ou bien agit à une échelle plus large, ces travaux ont pour objectif de caractériser la réponse humorale montée contre le 4-hydroxy-3-nitrophenyl dans le contexte d’une infection par le virus de la chorioméningite lymphocytaire (LCMV), un modèle murin d’infection chronique bien connu.Nous avons pu démontrer que l’infection par LCMV provoque une profonde perturbation de la réponse humorale en général. Une plus grande quantité d’anticorps totaux est sécrétée alors que la réponse spécifique est à l’opposé dramatiquement diminuée. Cet effet est dépendant des lymphocytes T, apparait dès les premiers jours de l’infection et persiste durant environ 20 jours. Il s’accompagne aussi d’une forte augmentation des lymphocytes T auxiliaires folliculaires (TFH) ainsi que de leurs fonctions de soutien à la survie des lymphocytes B.En parallèle, nous avons pu démontrer que le blocage spécifique du récepteur majeur de l’interféron de type I (IFN-I) sur les lymphocytes B permettait de retrouver des réponses en anticorps spécifiques et totales similaires à celles obtenues chez les souris infectées par un virus causant une infection aigüe ou non-infectées. Ce traitement a notamment permit d’accélérer l’apparition des anticorps neutralisants, primordiaux pour éviter la propagation du virus dans l’organisme infecté. Ces résultats suggèrent qu’une modulation du nombre et de la fonction des TFH, ainsi que l’activation des lymphocytes B par l’interféron de type I, pourraient être responsables de la réponse humorale déréglée caractéristique des infections virales persistantes. Ils ouvrent de nouvelles perspectives pour faciliter le développement de traitements et vaccins contre les infections chroniques.

Chronic viral infections are a major health issue. Infection with HIV and HCV alone represent more than 250 millions infected people worlwide and keep spreading.One caracteristic of these infections, as opposed to acute infections, is their tendency to induce a late appearance of neutralizing antibodies. In order to better understand if this modification affects only the antiviral response or acts at a larger scale, this work has for objective to caracterize the humoral response mounted against the 4-hydroxy-3-nitrophenyl in the context of an infection by the lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV), a well-known model of chronic infection. We managed to demonstrate that the LCMV infection provokes a deep disruption of the general humoral response. A greater quantity of total antibodies is secreted whereas the specific response is dramatically decreased. This effect is T-dependent, appears in the first days of the infection and persists for around 20 days. It’s accompanied by a strong increase in follicular helper T cells (TFH) and their functions of sustain of the B cell survival. In parallel we showed that upon specific blockade of the major type 1 interferon (IFN-I) receptor on B cells, total and specific antibody responses similar to those obtained in uninfected mice or mice infected with a virus causing an acute infection were retreived. This treatment notably allowed us to accelerate the appearance of neutralizing antibodies, mandatory to avoid the spreading of the virus in the infected organism. These results suggest that a modulation of the numbers and functions of the TFH and the activation of B cells by IFN-I could be responsible for the disrupted humoral response caracteristic of chronic viral infections. They give news perspectives to facilitate the design of treatments and vaccines against those infections.


identifier: Grosset, Andrée-Anne  (2016). EXPRESSION ET FONCTIONS DES GALECTINES DANS LE CANCER DU SEIN  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 259 p.

subject:
cancer du sein
triple-négatif
galectines
galectine-7
apoptose
p53
micromatrice tissulaire
immunohistochimie
localisation
stroma
breast cancer
triple-negative
galectins
galectin-7
apoptosis
p53
tissue microarray
immunohistochemistry
localization
stroma

abstract:
La résistance à l’apoptose par les agents chimiothérapeutiques est un obstacle majeur dans le traitement des formes agressives du cancer du sein. Récemment caractérisée dans la glande mammaire, l’expression de la galectine-7 est exclusive aux sous-types de carcinomes mammaires associés à un mauvais pronostic. De plus, l’injection de cellules du cancer du sein qui surexpriment la galectine-7 augmente les métastases osseuses et pulmonaires, tout en diminuant le taux de survie des souris. Le mécanisme moléculaire par lequel la galectine-7 augmente la dissémination du cancer du sein reste toutefois inconnu. Bien que les galectines soient très bien connues pour leur rôle dans la liaison des récepteurs de la membrane cellulaire, plusieurs études démontrent que les galectines intracellulaires exercent d’importantes fonctions dans les cellules cancéreuses. Cependant, quelles que soient leur localisation, la capacité des galectines à moduler les voies apoptotiques semble au coeur même de leurs fonctions pro-tumorales.Le premier objectif de notre travail vise à étudier la distribution intracellulaire de la galectine-7 et caractériser sa fonction anti-apoptotique dans les cellules du cancer du sein. Le deuxième objectif comporte l’analyse de la signature des galectines dans les différents sous-types du cancer du sein. Il est d’autant plus important que les membres de la famille des galectines, de par leur structure à la fois similaire globalement et distincte en régions précises, peuvent être compensatoires ou antagonistes. Pour ce faire, nous avons construit une série de mutants ponctuels de la galectine-7 et porté une attention particulière au mutant R74S. Ce mutant s’exprime de façon préférentielle dans le cytosol des cellules du cancer du sein. Contrairement à la forme normale de la galectine-7, ce mutant est incapable de se déplacer à la mitochondrie ou dans le noyau. Nos résultats démontrent que la mutation n’altère pas la fonction anti-apoptotique de la galectine-7 dans les cellules du cancer du sein traitées avec la doxorubicine, le chlorure de cobalt ou l’étoposide. De façon surprenante, la galectine-7 normale et mutée diminuent la translocation de p53 au noyau et l’expression de p21, un gène cible de p53, suite au traitement à la doxorubicine. L’utilisation d’un inhibiteur du protéasome suggère que la galectine-7 contrôle la dégradation protéasomale de p53, possiblement via une interaction directe avec p53. Par la suite, nous avons évalué l’expression en ARNm et en protéine des différents membres de la famille des galectines, dans le cancer du sein. Les études in silico indiquent que lgals1 et lgals3 sont associés à un mauvais pronostic pour les sous-types les plus agressifs. De par la construction de micromatrices tissulaires, comprenant 213 tumeurs de patientes différentes, nous avons déterminé que l’expression stromale des galectines 1, 3 et 9 est exclusive aux sous-types HER-2 positif et triple-négatif. Lorsqu’épithéliales, les galectines 1, 3, 8 et 9 sont restreintes au cytosol ou retrouvées dans le cytosol et le noyau. Cette localisation est d’autant plus importante que la galectine-1 nucléaire est associée à un faible taux de survie, à l’inverse de la galectine-8 nucléaire qui est associé à un bon pronostic. La nécessité d’analyser les différents membres des galectines est confirmée par l’observation de la survie de 5 ans sans maladie et sans métastase de 100% des patientes atteintes d’un cancer triple-négatif, positif pour les galectines 1 et 8 nucléaires, ce qui indique une dominance du phénotype de la galectine-8. Ces résultats mettent en évidence l’existence d’un nouveau mécanisme par lequel la galectine-7 module la survie des cellules de cancer du sein et suggèrent que la galectine-7 cytosolique pourrait être une cible potentielle afin d’améliorer l’efficacité des agents chimiothérapeutiques pour le traitement des sous-types agressifs du cancer du sein. De plus, nos données cliniques suggèrent que les galectines ont une utilité clinique comme indicateurs de la progression de la maladie dans le cancer du sein.

Resistance to apoptosis induced by chemotherapeutic agents is a major obstacle in the treatment of aggressive forms of breast cancer. Recently characterized in the mammary gland, the expression of galectin-7 is exclusive to subtypes of breast carcinomas associated with a poor prognosis. In addition, injection of breast cancer cells that overexpress galectin-7 increases bone and lung metastasis, while decreasing the mouse survival. The molecular mechanism by which galectin-7 increases the spread of breast cancer remains unknown. Although galectins are well known for their role in the binding of receptors on the cell membrane, several studies show that intracellular galectins have important functions in cancer cells. However, whatever their location, the ability of galectins to modulate apoptotic pathways seems at the heart of their pro-tumoral functions. The first objective of our work is to study the intracellular distribution of galectin-7 and characterize its anti-apoptotic function in breast cancer cells. The second goal involves the analysis of galectin signature in different subtypes of breast cancer. This is of significant importance since galectin can have either agonize or antagonize each other since they have a similar overall structure but also different specific regions.To address our goals, we generated a series of point mutants of galectin-7 and paid particular attention to the mutant R74S. This mutant is expressed preferentially in the cytosol of breast cancer cells. Unlike the normal form of galectin-7, this mutant is unable to traffic into the mitochondria or the nucleus. Our results demonstrate that the mutation does not alter the anti-apoptotic function of galectin-7 in breast cancer cells treated with doxorubicin, cobalt chloride or etoposide. Surprisingly, wild type galectin-7 and mutated galectin-7 both decrease p53 translocation to the nucleus and expression of p21, a p53 target gene, after treatment of doxorubicin. The use of a proteasome inhibitor suggests that galectin-7 controls the proteasomal degradation of p53, possibly through direct interaction with p53. Subsequently, we evaluated the expression of mRNA and protein of different members of the family of galectins in breast cancer. The in silico studies indicate that lgals1 and lgals3 are associated with a poor prognosis for the more aggressive subtypes. In tissue microarrays, including 213 tumors from different patients, we determined that expression of stromal galectins 1, 3 and 9 is exclusive to HER-2 positive and triple-negative subtypes. In epithelial cells, galectins 1, 3, 8 and 9 are restricted to the cytosol or found in the cytosol and the nucleus. This localization is particularly important since nuclear galectin-1 is associated with a low survival rate, in contrast to nuclear galectin-8 which is associated with a good prognosis. The need to analyze the different members of galectins, as an entity, is confirmed by the observation that patients with triple-negative cancer, positive for nuclear galectins 1 and 8 have a 100% 5-year survival without disease and without metastasis, indicating a preferential dominance of the galectin-8 phenotype.These results demonstrate the existence of a novel mechanism by which galectin-7 modulates the survival of breast cancer cells and suggest that cytosolic galectin-7 could be a potential target to improve chemotherapy efficiency for the treatment of aggressive breast cancer subtypes. In addition, our clinical data demonstrate that galectins have clinical utility as indicators of disease progression in breast cancer.


identifier: Bertrand, Luc  (2011). Identification et caractérisation des domaines fonctionnels de la protéine UL24 du virus de l'herpès simplex 1  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 193 p.

subject: VHS 1

abstract:
Le gène codant pour la protéine UL24 est conservé à travers la famille des Herpesviridae, mais peu est connu sur sa fonction dans la réplication virale. Son absence entraîne en la formation de petites plages de lyse, une réduction de la production virale et la formation de plages syncytiales. Dans un modèle animal, cette protéine a également été démontrée comme importante pour la réplication virale, spécialement dans les neurones, et très importante pour la réactivation. Des études ont démontré qu'UL24 est exprimée tardivement au cours de l'infection et qu'elle se retrouve au noyau et dans le cytoplasme. Des études de comparaison ont démontré la présence de cinq domaines hautement conservés ainsi que certains résidus quasi invariants. Certains de ceux-ci ont été liés à un motif putatif d'endonucléase qui a été rapporté au cours de cette étude. Vu la disparité des phénotypes viraux observés lors de l'infection et la présence de régions conservées, notre hypothèse était qu'UL24 est une protéine multifonctionnelle qui agit du moins en partie par des interactions protéine-protéine. Pour cette étude, nous avons commencé par étudier UL24 hors du contexte d'infection, en utilisant des plasmides d'expression, pour identifier les fonctions se rattachant directement à celle-ci et également pour faciliter l'évaluation de l'importance des domaines et des résidus conservés. Utilisant ces constructions, nous avons pu démontrer qu'UL24 est capable seule de se localiser au noyau, au nucléole, au trans-Golgi et au cytoplasme. En utilisant les différentes constructions, nous avons pu démontrer que la région N-terminale se retrouve au noyau et au nucléole et que la partie C-terminale, moins conservée, se retrouve au cytoplasme et au Golgi. Ceci soutient notre hypothèse qu'UL24 est multifonctionnelle. De plus, nous avons démontré que les 60 premiers résidus d'UL24 peuvent induire une localisation nucléolaire pour la eGFP.
Au début de cette étude, notre laboratoire avait démontré l'importance d'UL24 pour la dispersion de la nucléoline au cours de l'infection. Dans cette étude, nous démontrons que la portion N-terminale d'UL24 seule est capable d'induire cette dispersion et que la délétion des domaines conservés bloque ce rôle. Nous avons également testé l'impact de la substitution des résidus hautement conservés sur ce rôle. Nous avons identifié deux régions susceptibles qui lorsque mutées affectent grandement la dispersion de la nucléoline. Certains de ces résidus forment le site catalytique du motif putatif d'endonucléase alors que les autres seraient importants dans sa fonction. Puisque la fonctionnalité de ce motif n'a toujours pas été démontrée, nous ne pouvons conclure que cette fonction est importante pour la dispersion de la nucléoline, mais que la séquence le composant l'est. Certaines de ces mutations, telles que E99A/K101A et G121A, ont été insérées dans un virus par recombinaison homologue et nous ont permis d'observer le même impact sur la dispersion de la nucléoline observé en transfection transitoire. Ces virus exhibent plusieurs phénotypes rattachés à une déficience en UL24 en infection. Ils forment des plages de lyses syncytiales, mais seulement la mutation E99A/K101A entraîne une réduction de l'efficacité de réplication, indiquant que l'un n'est pas la résultante de l'autre. Cela nous permet de séparer deux des phénotypes associés à une déficience en UL24 et soutient qu'elle serait une protéine multifonctionnelle. Également, ces virus démontrent un lien entre la dispersion de la nucléoline et l'efficacité de réplication, puisque la forte réduction de cette relocalisation observée avec la mutation E99A/K101A est associée avec une réduction de l'efficacité de réplication. Pour déterminer les mécanismes par lesquels UL24 intervient dans la réplication virale, nous avons tenté d'identifier des partenaires d'interaction. Nous avons pu démontrer qu'UL24 fait partie de complexes protéiques dans la cellule infectée et qu'elle interagit avec la protéine Non-muscular myosin type lia (NM2a), un moteur des microfilaments. Cette protéine est impliquée au niveau du transport des capsides et de vésicules. Durant notre étude, il a été publié que cette protéine pourrait également être un récepteur viral via une interaction avec la glycoprotéine virale, gB. Nous avons démontré une co-localisation partielle entre ces deux protéines et que l'absence d'UL24 résulte en une réduction de l'association de gB avec NM2a. En conclusion, nos résultats ont permis d'éclaircir le rôle joué par UL24 au cours de l'infection. Nous avons pu démontrer l'importance de différents résidus dans son rôle dans la dispersion de la nucléoline et que cette fonction est importante pour une réplication virale efficace. De plus, nous avons démontré que la formation de syncytia, due à une déficience en UL24, ne résulte pas en une réduction de l'efficacité de réplication, mais que ce sont deux fonctions indépendantes d'UL24. La localisation nucléaire de la portion N-terminale et cytoplasmique de la C-terminale supporte également ce rôle multifonction net. La recherche de partenaires d'interaction nous a également permis de démontrer une interaction avec la protéine cellulaire NM2a, association qui serait impliquée au niveau d'un rôle cytoplasmique pour UL24, possiblement lié à la formation de polykaryocytes. Également, une absence d'UL24 affecte l'association entre NM2a et une autre protéine virale, la glycoprotéine B.


identifier: Chauvette, Anne-Louise  (2016). Exploration de l'approche de la gouvernance multiniveaux : le cas de la réfection du Complexe Turcot 2007-2011  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en études urbaines, 130 p.

subject:
gouvernance multiniveaux
transport
gouvernance métropolitaine
coordination
relations intergouvernementales
Turcot
multilevel governance
metropolitan governance
intergovernmental affairs

abstract:
RÉSUMÉ : La croissance des phénomènes d’urbanisation et de mondialisation engendre des
transformations profondes du rôle de l’État et sa relation avec les autres paliers
gouvernementaux. Pour répondre aux enjeux territoriaux, la création d’instances métropolitaines
représente une solution pour certaines juridictions, mais elle oblige alors un réaménagement de
la répartition du pouvoir entre les paliers. À ces réorganisations s’ajoutent les dynamiques de
gouvernance où la concertation avec les groupes de la société civile est de mise. Ainsi, les
transformations dans l’organisation des pouvoirs et l’approche gouvernementale engendrent des
changements profonds des pratiques au sein des administrations publiques et sur les
relations intergouvernementales.
Il est donc entièrement pertinent de s’intéresser aux dynamiques politiques entre les paliers de
gouvernement après l’instauration d’une réforme métropolitaine. Pour ce faire, nous analysons
le cas d’un projet majeur d’infrastructure de transport selon une approche de gouvernance
multiniveaux qui permet de caractériser les interactions de l’ensemble des acteurs du système
de gouvernance des transports dans la région métropolitaine de Montréal selon une approche
de gouvernance à multiniveaux.
L’analyse d’une vaste revue de presse et des documents officiels produits par les acteurs du
système de gouvernance des transports métropolitains de Montréal nous a permis de clairement
définir le cadre complexe dans lequel les acteurs prennent place au cours des années 2007 à
2011. Par la suite, des entretiens semi-dirigés avec treize informateurs-clés nous ont permis de
caractériser les jeux politiques qu’on y retrouve. Notre analyse identifie quatre grandes
tendances dans les interactions des acteurs et révèle comment le ministère des Transports du
Québec, en tant qu’agent directeur, a sous-exploité ses ressources et déployé des stratégies
insatisfaisantes pour coordonner efficacement l’action politique multiniveaux entourant le projet
de réfection du complexe autoroutiers Turcot. Nous analysons également l’ensemble des
facteurs ayant influencé l’évolution du projet Turcot et les pratiques du gouvernement.

The growth of the urbanization and globalization phenomena have led to profound transformations
on the role of the State and its relationship with other levels of government. To meet the territorial
challenges, the creation of metropolitan instance represents a solution for certain jurisdictions but
it then requires a revision of the distribution of authority between the political levels. Added to this
reorganization, there are the added complexities stemming from the imperative for consultation
and coordination with civil society groups. And so, transformations in the distribution of powers
and practices of government lead to profound changes in the practices of public administrations
and in their relations with the other levels of government.
It is therefore entirely appropriate to study the political intricacies of intergovernmental relations
after the institution of a metropolitan reform. To that end, we will be analysing the case of a
major transport infrastructure project with a multilevel governance approach that allows us
to take into consideration the interactions between various levels of government. The present
research aims therefore at characterizing the system of governance of a major transport project
in the metropolitan region of Montreal through a multilevel governance analysis framework.
Through the thorough review and analysis of an extensive collection of news reports and official
documents produced by the actors of the metropolitan transport governance system of Montreal,
we were able to clearly define the complex framework in which players operated during the
2007-2011 period. In addition, loosely structured interviews with thirteen key informants enabled
us to characterize the political manoeuvring having taken place. Our analysis identifies four main
trends in these relationships between various players and reveals how the Ministry of Transport
of Quebec, as guiding agent, under-utilized its resources and deployed suboptimal strategies to
efficiently coordinate the multilevel political actions necessary to the reconstruction of the
Turcot complex. We also analyse the numerous factors having influenced the evolution of plan
Turcot and the practices of the government.


identifier: Charbonneau, Marie-Ève  (2016). Le quartier chinois de Montréal à l'aube de nouvelles transformations sociales et spatiales : quelles significations pour les jeunes migrants d'origine chinoise?  Mémoire.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en études urbaines, 205 p.

subject:
quartier chinois
dynamiques migratoires
mobilité
ancrages
ethnicité
réseaux
marquage ethnique
étudiants internationaux
Chinatown
migratory dynamics
mobility
anchors
ethnicity
networks
place making
international students

abstract:
RÉSUMÉ : Cette recherche exploratoire vise à comprendre les transformations qui redéfinissent le quartier
chinois de Montréal aujourd’hui. Ces transformations sont d’une part internes, puisqu’elles sont
étroitement liées aux nouvelles dynamiques migratoires qui se manifestent par des
changements majeurs dans la mobilité des migrants, ainsi que leurs profils socioéconomiques et
leurs styles de vie désormais très diversifiés. Le quartier chinois se recompose donc au fil des
transformations de la population, mais aussi des changements qui surviennent dans son
environnement. Nous approchons le quartier sous l’angle d’une nouvelle catégorie de migrants
en hausse depuis les dix dernières années, celle des étudiants internationaux chinois.
Ayant des profils très diversifiés, ces étudiants incarnent la mobilité et la superdiversité qui se
sont accrues ces dernières années. Nous observons de nouvelles trajectoires résidentielles et
une multiplication des ancrages, tant physiques que virtuels. La méthode de l’entrevue mobile
avec les étudiants chinois nous a permis de comprendre comment ces jeunes mettent en scène
leur ethnicité dans le territoire et dans leurs pratiques sociales, au cours de leurs déplacements
et de leur intégration dans des réseaux multiples. En revisitant le concept de marquage
ethnique, nous étudions les manières variées dont ces nouveaux migrants participent aux
transformations du quartier chinois et d’autres lieux dans lesquels ils s’investissent au quotidien.

This exploratory research aims to understand the transformations that redefine Montreal’s
Chinatown today. To a certain degree, these transformations are internal because of their direct
link to new migratory dynamics that manifest through major changes in the mobility of the
migrants, as well as their socioeconomic profiles and diverse lifestyles. Chinatown is therefore
gradually restructured by the changes occurring within its population and its environment. More
precisely, we approach the study of the neighbourhood from the perspective of a new category
of migrants: Chinese international students, whose population has increased during the past ten
years.
Having very diversified profiles, these students embody the mobility and superdiversity of the
population, which has intensified in the past few years. In fact, new residential trajectories were
observed, in addition to a multiplication of physical and virtual anchors in the city. The method of
the mobile interview with the Chinese students helped us to understand how these young people
make their ethnicity visible in the territory and in social practices, while they travel in the city and
integrate into multiple networks. By revisiting the concept of ethnic marketing, we study the
different ways in which new migrants participate in the transformation of Chinatown and other
spaces where they invest themselves on a daily basis.


identifier: Nguyen, Xuan Tuan  (2016). Modélisation de l’impact des rizières et de l’irrigation sur le régime hydrologique de la rivière Cong au Vietnam.  Thèse.  Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Doctorat en sciences de l'eau, 199 p.

subject:
rizières
lac
modélisation
irrigation
régime d’écoulement en rivière
bassin versant
hydrologie
HYDROTEL
Vietnam

abstract:
La collaboration scientifique entre le Canada et le Vietnam a permis de mettre en place un projet qui est celui de la gestion intégrée des ressources en eau du bassin versant (GIEBV) de la rivière Cau au Vietnam. Ce projet a été réalisé dans le cadre d’un partenariat entre l’Académie des Sciences et Technologies du Vietnam (ASTV) et l’Institut National de la Recherche Scientifique (INRS) du Canada. La thèse s’inscrit dans ce projet et a comme cas d’étude le sous-bassin versant de la rivière Cong du bassin versant de la rivière Cau. L’objectif global de la thèse est la modélisation de l’impact des rizières et de l’irrigation sur le régime d’écoulement en rivière du bassin versant de la rivière Cong.
Dans le cadre de ce projet, les outils de modélisation sont importants pour analyser les impacts de l’aménagement des rizières sur le bassin versant. HYDROTEL (Fortin et coll., 1995) est un modèle qui permet de modéliser et de simuler l’ensemble des processus hydrologiques sur un bassin versant. Par contre, la version actuelle de ce modèle ne permet pas de simuler l’impact hydrologique des rizières ni le mode de gestion du lac Nuicoc, un réservoir d’importance situé sur le bassin versant de la rivière Cong. Ainsi, dans un premier temps, des sous-modèles ont dû être développés puis implémentés dans HYDROTEL, afin que ce modèle puisse être appliqué sur le bassin de la rivière Cong. Dans le premier de ceux-ci, soit le sous-modèle des rizières, le bassin versant est divisé en unités hydrologiques relativement homogènes (UHRH) à partir de la structure spatiale d’HYDROTEL. Dans chaque UHRH, les rizières sont considérées comme des réservoirs qui viennent modifier le bilan en eau journalier. De plus, des paramètres d’infiltration spécifiques (Kinf) aux rizières ainsi que le coefficient cultural du riz (Kc) sont implémentés. Dans le second sous-modèle, celui de gestion du lac, le lac-réservoir, Nuicoc est représenté comme un lac à deux sorties : une qui sert pour la régulation des crues et l’autre pour satisfaire les besoins en eau. Le sous-modèle de gestion du lac a été développé selon le principe de la conservation de la masse. Dans un second temps, le modèle HYDROTEL ainsi bonifié des sous-modèles des rizières et de gestion du lac a été appliqué sur le bassin versant de la rivière Cong pour analyser l’impact des rizières et de l’irrigation sur le régime d’écoulement en rivière du bassin versant.
Pour l’analyse de l’impact des rizières et de l’irrigation sur l’hydrologie du bassin versant, trois scénarios principaux ont été étudiés dans la thèse : (i) un premier scénario de conversion de 100 % des rizières actuelles en terres agricoles non inondables, pour lequel le volume
d’écoulement total augmente de 12% à 16 % en saison des pluies et diminue de 3 à 4 % en saison sèche; (ii) un deuxième scénario d’augmentation de 30 % de la superficie des rizières, qui entraîne une diminution de 2 à 3 % du volume d’écoulement total en saison des pluies et une augmentation de 2 à 4% de volume de l’écoulemet total en saison sèche; (iii) un troisième scénario de réaffectation temporaire de 30 % des rizières en terres agricoles non inondables qui entraîne une augmentation de 2 à 4 % de l’écoulement total en saison des pluies et une diminution de 2 à 3 % en saison sèche. Cette thèse a apporté des éléments nouveaux en matière de compréhension des processus hydrologiques ayant lieu dans un bassin versant avec des rizières. Elle a permis de comprendre la nécessité de tenir compte du fonctionnement hydrologique de cultures nécessitant de grandes quantités d’eau (p. ex. les rizières) dans l’hydrologie d’un bassin versant. Ce travail a également permis d’améliorer le modèle HYDROTEL afin de l’utiliser dans la mise en place de la gestion intégrée des ressources en eau dans le bassin versant de la rivière Cong et dans des bassins versants similaires au Vietnam. Les résultats de la thèse et les outils développés pourront servir aux gestionnaires et aux preneurs de décisions en vue de réaliser la gestion intégrée des ressources en eau sur le bassin versant de la rivière Cau.